發(fā)酵小麥制酒精殘渣中寡肽的抗氧化及免疫活性

康連虎，卞寶國，李呂木,,*，許發(fā)芝，丁小玲，李 彬，郭文杰，穆 華（.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)茶與食品科技學(xué)院，安徽 合肥 006；.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，安徽 合肥 006；.安徽瑞福祥食品有限公司，安徽 亳州 6000）

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發(fā)酵小麥制酒精殘渣中寡肽的抗氧化及免疫活性

康連虎1，卞寶國2，李呂木1,2,*，許發(fā)芝2，丁小玲2，李 彬3，郭文杰3，穆 華3
（1.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)茶與食品科技學(xué)院，安徽 合肥 230036；2.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，安徽 合肥 230036；3.安徽瑞福祥食品有限公司，安徽 亳州 236000）

摘 要：研究從發(fā)酵小麥制酒精殘渣中提取分離出的寡肽抗氧化和免疫活性。將112 只4 周齡雌性健康昆明小鼠隨機分成14 組，基礎(chǔ)對照組和實驗1～6組飼喂正?；A(chǔ)料的同時分別灌胃生理鹽水、低、中、高3 個劑量的寡肽（五肽和七肽），高脂對照組和實驗7～12組飼喂高脂料的同時分別灌胃生理鹽水、低、中、高3 個劑量的寡肽（五肽和七肽），連續(xù)灌胃28 d后，測定基礎(chǔ)對照組和實驗1～6組血清中丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量，肝勻漿中MDA含量、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、過氧化氫酶（catalase，CAT）和谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）活性，脾臟中淋巴T細(xì)胞CD3＋、CD4＋和CD8＋數(shù)量，測定基礎(chǔ)對照組、高脂對照組和實驗7～12組十二指腸、空腸和回腸中MDA含量、SOD、CAT、GSH-Px活性。結(jié)果顯示，與高脂對照組相比，灌胃寡肽后，血清、肝臟和腸道中MDA含量顯著下降（P＜0.05），SOD、CAT、GSH-Px活性顯著升高（P＜0.05），CD4＋/CD8＋顯著升高（P＜0.05）。結(jié)果表明寡肽均具有體內(nèi)抗氧化能力和免疫活性，而且能夠清除高脂飲食帶來的氧化損傷。

關(guān)鍵詞：發(fā)酵小麥制酒精殘渣；寡肽；高脂飲食；抗氧化；免疫活性；小鼠

引文格式：

康連虎,卞寶國,李呂木,等.發(fā)酵小麥制酒精殘渣中寡肽的抗氧化及免疫活性[J].食品科學(xué),2016,37(5):180-185.

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在制酒精的過程中會產(chǎn)生大量的殘渣，經(jīng)測定，浮渣中含有大量的蛋白質(zhì)，丟棄處理實屬浪費。我國蛋白質(zhì)飼料嚴(yán)重短缺，每年需從國外進(jìn)口大量的蛋白質(zhì)飼料填補空缺[1]。因此，將此殘渣發(fā)酵作為蛋白質(zhì)飼料，對實現(xiàn)浮渣的無害化處理和資源化利用具有重要意義。有研究證明蛋白質(zhì)并不是全部以氨基酸的形式被機體吸收，有一部分是以寡肽的形式被吸收且效果優(yōu)于氨基酸的形式[2]。此外，寡肽還具有一些獨特的生物活性功能，如抑制血壓升高[3]、抗疲勞[4]、增強免疫功能[5]及降低膽固醇[6]等作用，這些功能都與其具有的抗氧化能力有關(guān)。有研究利用胰蛋白酶[7]、中性蛋白酶[8]和固定化堿性蛋白酶[9]等對小麥蛋白進(jìn)行水解，可以得到小麥肽，小麥肽具有降血壓[10]和抗氧化[11]等活性，但具體是哪一種肽或哪幾種肽起活性作用并不明確。直接使用小麥蛋白和專用的蛋白酶，生產(chǎn)成本較高。在微生物固態(tài)發(fā)酵浮渣和沼渣進(jìn)行飼料開發(fā)過程中發(fā)現(xiàn)其發(fā)酵產(chǎn)物中也富含小麥寡肽，而且這些寡肽是在發(fā)酵過程中由微生物產(chǎn)生的蛋白酶在自然條件下分解得到，與小麥肽相比，生產(chǎn)成本十分低廉。前期實驗證明經(jīng)分離提取得到的五肽和七肽，在體外具有較強的抗氧化能力[12]，但其是否具有體內(nèi)抗氧化及免疫增強能力尚不明確。為此，本實驗選取發(fā)酵小麥制酒精殘渣中分離提取到的具有較強體外抗氧化能力的兩種寡肽——五肽和七肽，研究其是否具有體內(nèi)抗氧化和免疫增強能力，以及在高脂狀態(tài)下的腸道抗氧化能力，為揭示發(fā)酵小麥制酒精殘渣的生物學(xué)功能提供依據(jù)。

1　材料與方法

1.1動物、材料與試劑

4 周齡純系雌性健康昆明小鼠112 只，購自安徽醫(yī)科大學(xué)動物中心，體質(zhì)量（16±2） g，顆粒飼料自由采食，清潔飲水不斷，飼養(yǎng)于23 ℃空調(diào)動物房。

微生物固態(tài)發(fā)酵浮渣的產(chǎn)物中粗提寡肽，經(jīng)葡聚糖凝膠G-15層析柱分離得到五肽和七肽[12]。

考馬斯亮藍(lán)G-250試劑盒、丙二醛（malondialdehyde，M DA）試劑盒、超氧化物歧化酶（s u p e r o x i d e dismutase，SOD）試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）試劑盒 南京建成科技有限公司；冰乙酸（分析純） 上海市振企化學(xué)試劑有限公司；流式熒光抗體CD3＋-APC、CD4＋-PE、CD8＋-FITC 美國eBioscience公司。

1.2儀器與設(shè)備

FACSCalibur流式細(xì)胞儀 美國BD公司；HC-2518高速離心機 安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司；快速混勻器 江蘇金壇江南儀器廠；紫外分光光度計、數(shù)顯控溫水浴鍋 上海浦東新區(qū)電理儀器廠；電子天平上海精密科學(xué)儀器有限公司；手提式壓力蒸汽滅菌鍋上海華線醫(yī)用核子儀器公司；安捷倫1100高效液相色譜系統(tǒng) 美國安捷倫公司。

1.3方法

1.3.1寡肽的粗提及分離純化

準(zhǔn)確稱取發(fā)酵完成且已烘干粉碎的發(fā)酵小麥制酒精殘渣樣品20 g加180 mL純水，攪拌混勻浸提20 min，濾紙過濾后取濾液8 000 r/min離心15 min，取上清液過0.45 μm濾膜，取濾液過1 000 D納濾膜，得到分子質(zhì)量小于1 000 D部分濃縮備用。采用Sephadex G-15葡聚糖凝膠層析柱對寡肽粗提液進(jìn)行分離純化，純化條件：層析柱2.6 cm×60 cm，寡肽粗提液質(zhì)量濃度為30 mg/mL，上樣量為l.0 mL，使用雙蒸水做洗脫液，流速0.5 mL/min，檢測波長280 nm。對分離出的不同組分進(jìn)行收集，即得到不同分子質(zhì)量的寡肽。通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線[13-14]，計算各組分寡肽的分子質(zhì)量。對收集到的各個寡肽溶液進(jìn)行低溫濃縮，濃縮到一定濃度后，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2動物實驗

將112 只小鼠標(biāo)準(zhǔn)飼喂3 d之后，隨機分成14 組，每組8 只，具體分組情況見表1?；A(chǔ)料對照組飼喂基礎(chǔ)日糧，高脂料對照組飼喂高脂日糧，基礎(chǔ)日糧和高脂日糧的配方及其營養(yǎng)水平見表2；實驗1～3組在飼喂基礎(chǔ)日糧的同時，分別灌胃4 mg（低劑量）、8 mg（中劑量）和12 mg（高劑量）的五肽溶液；實驗4～6組在飼喂基礎(chǔ)日糧的同時分別灌胃4 mg（低劑量）、8 mg（中劑量）和12 mg（高劑量）的七肽溶液；實驗7～9組在飼喂高脂日糧的同時，分別灌胃2 mg（低劑量）、4 mg（中劑量）和8 mg（高劑量）的五肽溶液；實驗10～12組在飼喂高脂日糧的同時分別灌胃2 mg（低劑量）、4 mg（中劑量）和8 mg（高劑量）的七肽溶液，五肽和七肽溶液質(zhì)量濃度均為24.0 mg/mL，灌胃時根據(jù)每組不同灌胃量補充一定的雙蒸水，使灌胃總體積均調(diào)整為0.50 mL/d?；A(chǔ)料對照組和高脂料對照組則灌胃與其他實驗組等體積的生理鹽水，具體灌胃情況見表1。灌胃于每日早上9時進(jìn)行，每天一次，連續(xù)灌胃28 d。各組自由飲水和攝食。末次灌胃后禁食12 h，基礎(chǔ)料對照組和實驗1～6組稱體質(zhì)量后摘眼球取血，分離得到血清，測定其中的MDA含量；摘取肝臟、脾臟和胸腺并稱質(zhì)量，計算臟器系數(shù)，同時將肝臟制備成肝勻漿，測定其中的MDA含量和SOD、CAT與GSH-Px活性；脾臟經(jīng)處理后使用流式細(xì)胞儀測定其中淋巴T細(xì)胞CD3＋、CD4＋和CD8＋的數(shù)量?；A(chǔ)料對照組、高脂料對照組和實驗7～12組斷脊椎處死后摘取十二指腸、空腸和回腸，將其制備成組織勻漿，分別測定MDA含量和SOD、CAT、GSH-Px酶活力。

表1　小鼠分組及其灌胃情況Table 1 Gavage treatment groups and corresponding feeding conditions

表2　小鼠日糧配方及其營養(yǎng)水平Table 2 Mouse diet components and nutritional contents %

1.3.3測定方法

寡肽含量的測定采用Folin-酚法[15]；臟器（肝臟、脾臟、胸腺）系數(shù)為臟器的質(zhì)量占體質(zhì)量的百分比；肝勻漿中蛋白質(zhì)含量的測定采用考馬斯亮藍(lán)法[16]；MDA含量測定采用硫代巴比妥酸比色法[17]；SOD活力的測定采用黃嘌呤氧化酶法[18]；CAT活力測定采用鉬酸銨顯色法[19]；GSH-Px活力的測定采用2-硝基苯甲酸比色法[20]；高效液相色譜分析條件：柱溫30 ℃，C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相：V（水）∶V（乙腈）＝85∶15，檢測器：二極管陣列檢測器（diode array detector，DAD），波長338 nm，流速：1 mL/min，檢測波長：215 nm。

1.3.4流式細(xì)胞檢測

每只小鼠脾臟全部取出，在200 目的不銹鋼篩網(wǎng)上研磨出白色組織，用約3 mL磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）沖洗，底部用培養(yǎng)皿盛接，將得到的脾細(xì)胞懸液放入10 mL離心管中，保存在冰盒內(nèi)。將收集到的脾細(xì)胞懸液1 500 r/min離心5 min，棄上清，將離心管底部的細(xì)胞團(tuán)振蕩均勻，每50 μL加入3 mL的PBS；1 500 r/min離心5 min，棄上清液，加入1 mL紅細(xì)胞裂解液，反應(yīng)10 min后，1 500 r/min離心5 min，將細(xì)胞團(tuán)振蕩均勻，分別加入熒光抗體CD3＋-APC 4 μL，CD4＋-PE 4 μL，CD8＋-FITC 1.5 μL，避光孵育30 min，加入1 000 μL生理鹽水并過200 目細(xì)胞膜后上機測試。測定參數(shù)：FSC增益為2.42；SSC電壓為429 V，增益為1.00；FL1、FL2、FL3和FL4電壓分別為547、499、825、775 V[21]。

1.4統(tǒng)計分析

2　結(jié)果與分析

2.1寡肽的純度

圖1　五肽、七肽高效液相色譜檢測圖譜Fig.1 HPLC profiles of purified penta and hepta peptides from wheat residue

經(jīng)高效液相色譜儀檢測五肽和七肽濃縮液的純度均在95%以上（圖1），這給研究其功效提供了有價值的實驗材料，克服了普通小麥肽是多種寡肽混合物，難以確定活性小麥肽具體種類的困難。

2.2五肽、七肽對小鼠臟器系數(shù)的影響

灌胃五肽及七肽后小鼠臟器系數(shù)見表3，五肽、七肽各組臟器系數(shù)與基礎(chǔ)料對照組相比均無明顯差異。表明在實驗添加的劑量范圍內(nèi)，灌胃寡肽對小鼠無明顯的毒副作用。

在三位負(fù)責(zé)人的帶領(lǐng)下，我們身著工作服，參觀了從上鋁卷到電化學(xué)處理、涂布和干燥、在線分切、包裝，直至儲運、物流的完整生產(chǎn)流程。我們看到，在監(jiān)控室里高速生產(chǎn)線的實時數(shù)據(jù)不斷閃現(xiàn)，所有數(shù)據(jù)可以保留2年；生產(chǎn)全過程參數(shù)自動檢測，全球同步；安裝于生產(chǎn)線上的在線檢測系統(tǒng)，可檢測到50微米缺陷，自動切走缺陷部分；采用環(huán)保包裝方式，自動打包。此外，我們了解到，其關(guān)鍵材料由總部統(tǒng)一進(jìn)口；新開發(fā)產(chǎn)品，需經(jīng)過12個月嚴(yán)格測試，才能投入正式生產(chǎn)……或許正因為執(zhí)行著最嚴(yán)苛的生產(chǎn)要求，無錫工廠才敢于做出最高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的莊重承諾。

表3　灌胃寡肽對小鼠臟器系數(shù)的影響Table 3 Effect of oral oligopeptides on organ coefficients of mice

2.3寡肽對基礎(chǔ)日糧小鼠抗氧化方面的影響

灌胃五肽及七肽對基礎(chǔ)日糧小鼠抗氧化能力的影響見表4，灌胃不同劑量的五肽和七肽后，與基礎(chǔ)料對照組相比實驗組血清MDA及肝臟MDA含量均有所降低，SOD、CAT、GSH-Px酶活力均有所升高，且在一定的劑量范圍內(nèi)，隨著劑量增加酶活力也隨之升高。五肽中劑量組、高劑量組以及七肽中劑量組與基礎(chǔ)料對照組相比，都有顯著差異。在灌胃相同劑量的狀態(tài)下五肽所起的效果比七肽要好。表明在飼喂基礎(chǔ)日糧的情況下，通過灌胃一定濃度的寡肽溶液，可以降低小鼠血清MDA及肝臟MDA含量，增加SOD、CAT、GSH-Px活力，起到增強小鼠抗氧化能力的作用。

表4　灌胃五肽、七肽對基礎(chǔ)日糧小鼠抗氧化作用的影響Table 4 Effect of oral oligopeptides on antioxidant parameters in mice

2.4寡肽對基礎(chǔ)日糧小鼠免疫作用的影響

灌胃五肽及七肽后小鼠CD4＋/CD8＋、CD3＋含量百分比和CD4＋含量百分比見表5，CD4＋/CD8＋五肽中、高劑量組比基礎(chǔ)料對照組和低劑量組顯著增高（P＜0.05），七肽低、高劑量組與基礎(chǔ)料對照組無明顯差異，中劑量組比其他幾組明顯增高（P＜0.05），五肽高劑量組顯著高于七肽高劑量組（P＜0.05）。五肽、七肽各組CD3＋百分比和CD4＋百分比與基礎(chǔ)料對照組相比均無明顯差異。

表5　灌胃寡肽對基礎(chǔ)日糧小鼠免疫作用的影響Table 5 Effect of oral oligopeptides on immune function in basal dietfed mice

2.5寡肽對高脂日糧小鼠十二指腸抗氧化能力的影響

灌胃五肽及七肽對高脂日糧小鼠十二指腸抗氧化能力的影響見表6，高脂料對照組與基礎(chǔ)料對照組相比MDA含量明顯升高，SOD、CAT、GSH-Px酶活力均顯著降低（P＜0.05），飼喂高脂日糧的小鼠在灌胃五肽及七肽后，與高脂料對照組相比，MDA含量都有所降低，SOD、CAT、GSH-Px酶活力升高，且五肽中劑量組和七肽高劑量組均已恢復(fù)到正常水平。在灌胃相同劑量的狀態(tài)下五肽低、中劑量組所起的效果比七肽要好，而高劑量組七肽要優(yōu)于五肽。

表6　灌胃寡肽對高脂日糧小鼠十二指腸抗氧化能力的影響Table 6 Effect of oral oligopeptides on antioxidant parameters in duodenum of high-fat diet-fed mice

2.6寡肽對高脂日糧小鼠空腸抗氧化能力的影響

灌胃五肽及七肽對高脂日糧小鼠空腸抗氧化能力的影響見表7，高脂料對照組與基礎(chǔ)料對照組相比MDA含量明顯升高，SOD、CAT、GSH-Px酶活力均顯著降低，飼喂高脂日糧的小鼠在灌胃五肽及七肽后，與高脂料對照組相比，MDA含量都有所降低，SOD、CAT、GSH-Px酶活力升高，且五肽中劑量組和七肽高劑量組的MDA、CAT、GSH-Px活力均已恢復(fù)到正常水平。同等劑量的狀態(tài)下，灌胃五肽低、中劑量所起的效果比七肽要好，而高劑量組七肽要優(yōu)于五肽。

表7　灌胃寡肽對高脂日糧小鼠空腸抗氧化能力的影響Table 7 Effect of oral oligopeptides on antioxidant parameters in jejunum of high-fat diet-fed mice

灌胃五肽及七肽對高脂日糧小鼠回腸抗氧化能力的影響見表8，高脂料對照組與基礎(chǔ)料對照組相比MDA含量明顯升高，SOD、CAT、GSH-Px酶活力均顯著降低，飼喂高脂日糧的小鼠在灌胃五肽及七肽后，與高脂對照組相比，MDA都有所降低，酶活力有所升高，但均未恢復(fù)到正常水平。同等劑量的狀態(tài)下，灌胃五肽和七肽差異不顯著。

表8　灌胃寡肽對高脂日糧小鼠回腸抗氧化能力的影響Table 8 Effect of oral oligopeptides on antioxidant parameters in ileum of high-fat diet-fed miccee

3 討論與結(jié)論

血清、肝臟和腸道是機體內(nèi)易生成過氧化脂質(zhì)和自由基的場所。脾臟和胸腺是機體重要的免疫器官。實驗結(jié)果表明，分別給小鼠灌胃五肽和七肽，對小鼠的正常生長和器官無毒害和不良影響。

MDA是氧自由基攻擊細(xì)胞導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的產(chǎn)物，間接反映細(xì)胞膜受損傷的程度。含量越高表示過氧化程度越高，損傷越大[22]。SOD是一種能夠催化超氧化物通過歧化反應(yīng)轉(zhuǎn)化為氧氣和過氧化氫的酶。是生物體內(nèi)清除自由基的首要物質(zhì)，是一種重要的抗氧化劑，保護(hù)暴露于氧氣中的細(xì)胞[23]。CAT是催化過氧化氫分解成氧和水的酶，存在于細(xì)胞的過氧化物體內(nèi)。是過氧化物酶體的標(biāo)志酶，存在于所有已知的動物的各個組織中。GSH-Px是機體內(nèi)廣泛存在的一種重要的過氧化物分解酶，它能催化谷胱甘肽變?yōu)檠趸凸入赘孰?，使有毒的過氧化物還原成無毒的羥基化合物，從而保護(hù)細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)及功能不受過氧化物的干擾及損害[24]。這幾種酶共同協(xié)作進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)的抗氧化活動，保持機體內(nèi)自由基的平衡，維持細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)，確保細(xì)胞功能的完整性。實驗結(jié)果表明，在飼喂基礎(chǔ)日糧的條件下，灌胃不同劑量的五肽和七肽，都可以在一定程度上降低MDA含量，提高SOD、CAT和GSH-Px酶活力，其中五肽中、高劑量組，七肽高劑量組能夠顯著降低體內(nèi)MDA含量，顯著提高SOD、CAT、GSH-Px酶活性，說明灌胃合適劑量的寡肽可以提高小鼠抗氧化能力。

免疫細(xì)胞是白細(xì)胞的俗稱，包括淋巴細(xì)胞和各種吞噬細(xì)胞等，也特指能識別抗原、產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答的淋巴細(xì)胞等，淋巴細(xì)胞是免疫系統(tǒng)的基本成分。淋巴細(xì)胞包括T淋巴細(xì)胞（CD3＋）、B淋巴細(xì)胞（CD3－CD19＋）、NK細(xì)胞（CD3－CD16＋CD56＋），其中，T細(xì)胞是淋巴細(xì)胞的主要組成。CD3＋淋巴細(xì)胞代表全T淋巴細(xì)胞，它包括CD4＋和CD8＋細(xì)胞。CD4＋/CD8＋比值是評價機體免疫狀態(tài)的重要指標(biāo)，CD4＋/CD8＋比值高，表明機體處于高的免疫狀態(tài)[25]。本實驗中五肽和七肽灌胃組CD4＋/CD8＋均有所增大且差異顯著，表明五肽和七肽對小鼠的免疫系統(tǒng)具有增強作用。

小腸是消化和吸收營養(yǎng)物質(zhì)的主要場所，食物在攝入、消化和吸收過程中，在腸道這樣的代謝部位會產(chǎn)生自由基。所以小腸抗氧化水平是評價體內(nèi)抗氧化水平的又一重要指標(biāo)。研究表明，飼喂高脂日糧會引起動物氧化應(yīng)激，使動物機體的抗氧化能力降低，本實驗中，與基礎(chǔ)日糧對照組相比，高脂日糧對照組MDA含量顯著增高，SOD、CAT、GSH-Px酶活性顯著下降，說明高脂造成的氧化應(yīng)激已經(jīng)形成，這和前人的報道一致[23]。在飼喂高脂料的情況下，灌胃不同劑量的五肽和七肽，都可以不同程度地降低腸道氧化損傷，在十二指腸、空腸中，五肽中劑量組和七肽高劑量組可以使MDA含量，SOD、CAT、GSH-Px酶活性恢復(fù)到正常水平。由于十二指腸與胃緊緊相連，其次是很長一段的空腸，再是回腸，因此可能灌胃的寡肽在十二指腸和空腸中已被大部分吸收，所以在回腸中所起的作用不是太明顯。

總之，在灌胃相同劑量的條件下，五肽的抗氧化能力要優(yōu)于七肽，這與范遠(yuǎn)景等[26]關(guān)于小分子質(zhì)量多肽的抗氧化活性要明顯高于大分子質(zhì)量的多肽的研究結(jié)果一致。這主要是因為抗氧化活性肽含有某些能與自由基反應(yīng)的特殊基團(tuán)即供氫基團(tuán)，只有當(dāng)小肽在適當(dāng)分子質(zhì)量時，這些特殊的供氫基團(tuán)才能得到最大的暴露充分與自由基作用，此時才具有較強的抗氧化性。

發(fā)酵小麥制酒精殘渣中的五肽、七肽可以顯著提高小鼠的體內(nèi)抗氧化能力，增強免疫能力。同時，在高脂條件下，還可以有效抵抗高脂飲食帶來的氧化損傷。小麥制酒精過程中產(chǎn)生的殘渣通過發(fā)酵作為一種飼料，其中富含的寡肽作為一種天然的抗氧化劑存在于飼料中，可以起到安全有效的作用，今后在飼料領(lǐng)域?qū)⒂袕V闊的應(yīng)用前景。

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Antioxidant Activity and Immunoregulatory Activity of Oligopeptides from Wheat Residue Left after Solid-State Fermentation for Alcohol Production

KANG Lianhu1,BIAN Baoguo2,LI Lümu1,2,*,XU Fazhi2,DING Xiaoling2,LI Bin3,GUO Wenjie3,MU Hua3
(1.School of Tea and Food Science and Technology,Anhui Agricultural University,Hefei 230036,China;
2.School of Animal Science and Technology,Anhui Agricultural University,Hefei 230036,China; 3.Anhui Ruifuxiang Food Co.Ltd.,Bozhou 236000,China)

Abstract:The antioxidant activity and immunoregulatory activity of oligopeptides from wheat residue left after solid-state fermentation for alcohol production were studied in vivo.Totally 112 healthy Kunming mice(4 weeks old)were randomly divided into 14 groups.The mice in the normal control group and experimental groups 1–6 were fed a normal diet and gavaged with normal saline and oligopeptides(penta and hepta peptides each at different doses(4,8,and 12 mg)),respectively,while those in the high-fat control group and experimental groups 7–12 were fed a high-fat diet and orally administrated with normal saline and the oligopeptides(each at different doses(2,4,and 8 mg)),respectively.After continuous intragastric administration for 28 days,the levels of malondialdehyde(MDA)in serum and liver,and the activities of superoxide dismutase(SOD),catalase(CAT)and glutathione peroxidase(GSH-Px)in liver were determined in the mice in the normal control group and experimental groups 1–6,and the populations of T-lymphocytes such as CD3+,CD4+and CD8+in spleen were determined by flow cytometry.Also,the tissue homogenates of duodenum,jejunum and ileum of the mice in the normal control group,high-fat control group and experimental groups 7–12 were determined for the levels of MDA and the activities of SOD,CAT and GSH-Px.The results showed that MDA contents in liver,duodenum,jejunum and ileum of the highfat diet-fed mice declined significantly(P < 0.05)in response to administration of the oligopeptides,and SOD,CAT and GSH-Px activities increased significantly(P < 0.05).CD4+/CD8+ratio also significantly increased(P < 0.05).These experimental findings suggest that the oligopeptides from fermented wheat residue have antioxidant capacity and can enhance immune function,as well as can inhibit oxidative damage caused by high-fat diets in the intestine of mice.

Key words:wheat residue left after alcohol fermentation; oligopeptide; high-fat diet; antioxidant activity; immunoregulatory activity; mice

中圖分類號：TS201.4

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1002-6630（2016）05-0180-06

DOI:book=181,ebook=18810.7506/spkx1002-6630-201605032 10.7506/spkx1002-6630-201605032.http://www.spkx.net.cn

*通信作者：李呂木（1956—），男，研究員，博士，研究方向為糧食油脂及植物蛋白工程。E-mail：llm56@ahau.edu.cn

作者簡介：康連虎（1990—），男，碩士研究生，研究方向為糧食油脂及植物蛋白工程。E-mail：645615576@qq.com

基金項目：“十二五”國家科技支撐計劃項目（2012BAD14B13）；安徽省教育廳自然科學(xué)研究重大項目（KJ2014ZD15）

收稿日期：2015-04-02