老年病樣本庫規(guī)范化建設(shè)

傅　蕾　趙　虎　張新顏

(復(fù)旦大學(xué)附屬華東醫(yī)院中心實驗室　上海市老年醫(yī)學(xué)臨床重點實驗室　復(fù)旦大學(xué)老年醫(yī)學(xué)研究中心，上海　200040)

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老年病樣本庫規(guī)范化建設(shè)

傅蕾趙虎張新顏1

(復(fù)旦大學(xué)附屬華東醫(yī)院中心實驗室上海市老年醫(yī)學(xué)臨床重點實驗室復(fù)旦大學(xué)老年醫(yī)學(xué)研究中心，上海200040)

〔摘要〕目的探討規(guī)范化建立老年病樣本庫、老年病生物樣本庫建立質(zhì)量控制體系和樣本信息化管理。方法制定老年病樣本庫標本庫操作流程(SOP)及質(zhì)量控制體系，規(guī)范化收集、處理及保存老年病患者的血清、血漿、核酸和組織等樣本，應(yīng)用信息管理軟件進行樣本信息錄入。樣本全程質(zhì)控并隨機抽樣進行質(zhì)量評估。結(jié)果自2013年建庫以來，入庫病種主要為少肌癥、老年冠心病、老年糖尿病、肝癌、結(jié)腸癌、白塞氏病、帕金森病、阿爾茨海默病、脂肪肝等共16個病種。入庫病例共2 110例，>60歲的體檢人群約500例。入庫樣本共20 171份，并隨機抽取30份DNA進行質(zhì)量檢測，結(jié)果表明所收集標本質(zhì)量較好。建立了規(guī)范化的標本信息管理系統(tǒng)。結(jié)論通過老年病樣本庫規(guī)范化建立，能夠建立有效的標準化的質(zhì)量控制系統(tǒng)并規(guī)范化、有效地收集、保存和利用樣本，為老年病研究提供寶貴資源和臨床研究平臺。

〔關(guān)鍵詞〕老年病樣本庫；質(zhì)量控制體系

1成都軍區(qū)總醫(yī)院信息科

社會人口老齡化、老年病高發(fā)、多種慢病共存是我國老年醫(yī)學(xué)研究目前面臨的困難。預(yù)防和治療與老年相關(guān)的所有疾病，研究老年病發(fā)病機制和衰老機制的核心是發(fā)展老年醫(yī)學(xué)和轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究，從分子生物學(xué)、基因?qū)用嫒ソ沂纠夏瓴〉陌l(fā)病機制和衰老的原因，推動轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究，盡快實現(xiàn)“從實驗室到病床旁”。醫(yī)生可以根據(jù)患者遺傳分子信息前瞻性和早期做出個體化治療方案，進行個性化的診斷和治療。基礎(chǔ)到臨床緊密結(jié)合這一過程的實現(xiàn)高度依賴于高質(zhì)量生物樣本以及完整的樣本臨床信息，因此建立規(guī)范化的老年病樣本庫，提供個體高質(zhì)量的樣本服務(wù)，是老年醫(yī)學(xué)的基礎(chǔ)。

1資料和方法

1.1專職人員生物樣本庫由專職人員管理，工作人員參加了樣本庫標準化培訓(xùn)，組織樣本取材人員經(jīng)過專業(yè)的病理解剖培訓(xùn)，掌握樣本質(zhì)量控制體系的各種指標要求。

1.2環(huán)境和儀器設(shè)備我院樣本庫占地面積約120 m2，配有雙電源斷電報警設(shè)施。規(guī)劃為樣本處理區(qū)、樣本儲存區(qū)分。主要設(shè)備是-80℃超低溫冰箱，液氮罐，溫控檢測儀，液氮罐，小型運輸液氮罐，制冰機，條碼打印機，二維條碼掃描槍，低溫耐液氮標簽，低溫高速離心機，超微量分光光度計，膠成像系統(tǒng)，凍存管等。

1.3信息系統(tǒng)樣本庫擁有計算機2臺，裝有1套海爾樣本管理軟件管理樣本信息錄入。美國貝迪打印機1臺、掃碼機1臺。條碼打印采用雙條碼標簽打印二維碼并粘貼于凍存管。

1.4樣本來源老年病樣本資源庫以老年病的防治、抗衰老研究為主要方向，采集的樣本均來自于復(fù)旦大學(xué)附屬華東醫(yī)院各臨床科室住院和門診患者以及體檢人群。年齡均在60歲以上，病種主要包括老年冠心病、老年高血壓、糖尿病、老年少肌癥、老年結(jié)腸癌、帕金森病、阿爾茨海默病等。

1.5建立樣本庫標準化管理流程

1.5.1質(zhì)量管理體系文件按照中國醫(yī)藥生物技術(shù)協(xié)會生物樣本庫標準〔1〕、國際生物和環(huán)境樣本庫協(xié)會(ISBER)制定的樣本庫管理規(guī)范〔2〕，我院規(guī)范化的建立了老年病樣本庫，在樣本倫理審核、知情同意、樣本采集、接收、處理、注釋、貯存、分發(fā)、運輸、檢測、報廢等過程建立質(zhì)量體系文件。 編制了質(zhì)量手冊，包含 QA/QC 的所有流程。制定了樣本庫的標準化操作流程(SOPs)。

1.5.2樣本信息管理樣本庫管理人員運用樣本庫軟件規(guī)范管理樣本的生物信息、臨床信息和長期隨訪信息。包括樣本信息錄入、信息綜合查詢，并設(shè)置權(quán)限分配，全流程追蹤每一份樣本在樣本庫的保存狀態(tài)。

1.5.3生物樣本質(zhì)量控制樣本庫建立通過了醫(yī)院倫理委員會審批，受檢者及家屬簽署知情書后進行采集，從樣本的收集、運輸、處理、存儲、使用等方面全程進行質(zhì)量控制。樣本庫標準化流程見圖1。

圖1　樣本庫標準化流程

1.5.4樣本采集血液樣本的采集、處理、儲存均按照標準化流程進行操作。在治療前采集捐贈者的早晨8∶00空腹靜脈血，分離血清、血漿、血細胞，提取核酸，分裝入凍存管，貼二維碼標簽，凍存于-80℃冰箱中。病理組織樣本采集應(yīng)在手術(shù)標本離體后30 min內(nèi)完成，按避免交叉污染的原則取材順序應(yīng)依次為正常組織、癌旁組織、癌組織，3種樣本分別放入標志了患者病案號、姓名及取材日期的凍存管中，并立即將凍存管投入小型液氮罐中短時間內(nèi)運輸至樣本庫超低溫冰箱存儲或液氮罐保存。入庫時根據(jù)國際生物和環(huán)境樣本庫協(xié)會最佳實踐指南填寫樣本入庫前的信息，使用樣本分析前變量(SPREC)〔3〕記錄生物樣本分析前的操作處理環(huán)節(jié)的信息，對樣本的質(zhì)量進行追溯、追蹤，保證樣本的質(zhì)量。

2結(jié)果

2.1標本的收集情況自2013年建庫以來，入庫病種主要為少肌癥、老年冠心病、老年高血壓、老年糖尿病、肝癌、結(jié)腸癌、白塞病、帕金森病、阿爾茨海默病、脂肪肝等，共16個病種。入庫病例共2 110例，>60歲的體檢人群約500例。血清、血漿、血細胞、核酸、總蛋白、新鮮冰凍組織和石蠟組織等樣本共20 171份，有3 640份樣本已出庫用于臨床研究。

2.2樣本的質(zhì)量鑒定按0.1%的比例隨機抽取30例樣本，進行DNA和RNA檢測，結(jié)果顯示質(zhì)檢樣本取材準確率在95%以上，DNA樣本OD260/OD280值在1.7～1.9；瓊脂糖凝膠電泳檢測，所有DNA完整性良好，無降解。RNA樣本A260/280值均在1.9 ～2.0。 RNA經(jīng)非變性電泳后，可見清晰的28S和18S條帶，且28S/18S在1.8 ～2.0，說明RNA完整性較好，保存良好，樣本質(zhì)量穩(wěn)定，可以滿足老年病研究工作。

2.3初步建立了符合老年病和抗衰老研究的規(guī)范化樣本庫建立了統(tǒng)一標準的樣本采集、處理、存儲和使用質(zhì)量控制體系和樣本庫標準操作流程，規(guī)范化整合了老年病樣本實體庫、樣本臨床信息數(shù)據(jù)庫和隨訪資料信息數(shù)據(jù)庫系統(tǒng)，初步構(gòu)建了臨床老年醫(yī)學(xué)研究的資源平臺。

3討論

目前我國已建的生物樣本庫通常存在樣本收集不規(guī)范、缺乏統(tǒng)一標準化流程、質(zhì)量控制管理水平參差不齊、倫理管理不規(guī)范等問題，嚴重影響了基礎(chǔ)科研、臨床醫(yī)學(xué)的發(fā)展。國際上一些發(fā)達國家已經(jīng)建立了國家層面的質(zhì)量管理體系。中國醫(yī)藥生物技術(shù)協(xié)會組織生物樣本庫分會也發(fā)布了第1版生物樣本庫行業(yè)標準，并成立了生物樣本庫質(zhì)量檢查和達標論證專家組〔1〕，規(guī)范生物樣本庫的建設(shè)。中國目前擁有豐富的臨床樣本資源，只有規(guī)范化、標準化建設(shè)我國生物樣本庫，才能提供高質(zhì)量樣本服務(wù)。

現(xiàn)代老年醫(yī)學(xué)以多病共存和老年綜合征(認知障礙、運動障礙、心血管病、排尿障礙、代謝紊亂、消化障礙、衰弱等)、老年人綜合評估和診治為中心研究，老年醫(yī)學(xué)研究的重點涉及衰老機制，老年病發(fā)病與防治機制，診治新方法的臨床、基礎(chǔ)和轉(zhuǎn)化研究領(lǐng)域。而高質(zhì)量的老年病樣本庫是發(fā)展老年醫(yī)學(xué)研究的關(guān)鍵。

目前國內(nèi)還未見針對老年病發(fā)病機制、老年病防治和衰老機制研究的規(guī)范化的生物樣本庫，我院籌建的老年病樣本庫，主要側(cè)重臨床老年醫(yī)學(xué)研究和轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究。樣本庫在環(huán)境設(shè)計中保證了通風(fēng)、供電和安全運行。樣本庫室內(nèi)溫度控制在16℃～28℃，樣本庫有備用斷電保護裝置、監(jiān)測和報警系統(tǒng)24 h運行，備有應(yīng)急預(yù)案以保證樣本庫正常工作。樣本庫人員規(guī)范化管理樣本出、入庫和使用，運用樣本庫軟件和二維碼標識規(guī)范管理樣本的實體庫和數(shù)據(jù)庫信息。每管樣本都具有完整的生物樣本信息和臨床信息，通過二維碼可詳細查詢到完整的樣本錄入信息，包括患者基本信息、臨床信息、隨訪信息和樣本信息。目前根據(jù)SPREC 要求，在樣本入庫時，使用SPREC記錄生物樣本分析前的操作處理環(huán)節(jié)的信息，包括樣本第1次離心和(或)第2次離心的條件(離心的速度、制動、溫度、持續(xù)時間)、采集方式、熱缺血時間、冷缺血時間、長期儲存的條件等。填寫SPREC有助于根據(jù)已有的特征識別樣本，當樣本共享時，用戶根據(jù)SPREC獲得詳細的樣本信息，有效追溯和評估分析前變量對樣本分子水平的影響以及檢測結(jié)果的影響，有助于提高樣本的質(zhì)量和實驗結(jié)果的準確性和可重復(fù)性。已有相關(guān)研究表明，在生物樣本離體后熱缺血的時間會影響分析結(jié)果的總體特征和水平〔4〕。這些分析前因素包括：采集管類型、離心前放置的時間和溫度、離心細節(jié)、組織樣本熱缺血和冷缺血時間、采樣方式、樣本固定方式和時間、長期貯存方式、樣本冷凍保存等技術(shù)差異，將導(dǎo)致分析前樣本的狀態(tài)與樣本在患者體內(nèi)的狀態(tài)存在差異，因此SPREC記錄對樣本的質(zhì)量控制非常重要。

我院樣本庫以最佳實踐規(guī)范、指南和相關(guān)標準為依據(jù)建立了自己的質(zhì)量管理制度，樣本在標準操作程序下進行采集、處理、保存、運輸以及后期加工，并對樣本處理流程進行質(zhì)控和質(zhì)量評估，定期隨機抽檢進行質(zhì)量評價。根據(jù)樣本評價結(jié)果判斷樣本儲存是否存在問題，進而及時發(fā)現(xiàn)問題并反饋問題，對質(zhì)量管理做出持續(xù)的改進。通過質(zhì)檢結(jié)果及樣本使用者反饋信息均顯示老年病樣本庫可提供高質(zhì)量的樣本和完整的樣本臨床信息，既滿足了我院老年醫(yī)學(xué)科研工作的需求也搭建了老年醫(yī)學(xué)和轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用的橋梁。

隨著生命科學(xué)研究進入了功能基因組時代，人類對疾病狀態(tài)分子機制的不斷研究，疾病診斷和治療由傳統(tǒng)的疾病治療模式進入轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)模式，建立規(guī)范化的老年病樣本庫，提供高質(zhì)量的樣本和信完整臨床信息服務(wù)，是老年醫(yī)學(xué)的基礎(chǔ)，同時也為樣本庫間交流共享提供必要的平臺，對老年醫(yī)學(xué)的基礎(chǔ)、臨床研究和轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)的發(fā)展，加快老年病發(fā)病機制和衰老機制研究、解決人口老齡化問題和慢病管理都有極其重要的意義。

4參考文獻

1中國醫(yī)藥生物技術(shù)協(xié)會生物樣本庫標準(試行)〔J〕.中國醫(yī)藥生物技術(shù),2011;6(1):71-9.

2No authors listed.2012 Best practices for repositories collection,storage,retrival,and distribution of biological materials for research international society for biological and environmental repositories〔J〕.Biopreserv Biobank，2012;10(2)：79-161.

3Nanni U，Betsou F，Riondino S，etal.SPREC ware：software tools for Standard PRE analytical Code(SPREC)labeling-effective exchange and search of stored biospecimens〔J〕.Int J Biol Markers,2012;27(3):e272-9.

4Ma Y，Dai H，Kong X.Impact of warm ischemia on gene expressionanalysis in surgically removed biosamples〔J〕.Anal Biochem，2012;423(2)：229-35.

〔2015-12-20修回〕

(編輯曲莉/滕欣航)

〔中圖分類號〕R592

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)06-1433-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.06.071

通訊作者：張新顏(1976-)，女，博士后，主要從事醫(yī)學(xué)信息和大數(shù)據(jù)醫(yī)療信息研究。

第一作者：傅蕾(1972-)，女，碩士，主管技師，主要從事老年病和冠心病基礎(chǔ)研究。