強(qiáng)志組方對多發(fā)性抽動癥復(fù)合恐懼行為大鼠的影響

金　枝，閻兆君，李亞群，趙興友，吳金勇，襲雷鳴

(1. 山東中醫(yī)藥大學(xué)，濟(jì)南　250000；2. 山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，濟(jì)南　250000)

?

研究報告

強(qiáng)志組方對多發(fā)性抽動癥復(fù)合恐懼行為大鼠的影響

金枝1，閻兆君2，李亞群1，趙興友1，吳金勇2，襲雷鳴2

(1. 山東中醫(yī)藥大學(xué)，濟(jì)南250000；2. 山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，濟(jì)南250000)

【摘要】目的探究強(qiáng)志組方治療多發(fā)性抽動癥(TS)復(fù)合恐懼行為的作用機(jī)制。方法腹腔注射亞氨基二丙腈(IDPN)建立TS大鼠模型后，進(jìn)一步聲電刺激建立TS復(fù)合恐懼大鼠模型，給予不同藥物灌胃治療后，采用曠場試驗、行為學(xué)檢測大鼠行為變化，高效液相法(HPLC)檢測腦組織中多巴胺(DA)的含量，免疫組織化學(xué)法檢測酪氨酸羥化酶(TH)的含量，RT-PCR檢測TH mRNA 的表達(dá)。結(jié)果與正常對照組相比，模型對照組刻板行為、運動行為增加，凍結(jié)時間延長，腦組織中 DA、TH、TH mRNA 含量無明顯變化；與模型對照組相比，強(qiáng)志組方組刻板行為、運動行為減少，凍結(jié)時間縮短，腦組織中 DA、TH、TH mRNA 含量減少。結(jié)論強(qiáng)志組方可改善模型大鼠抽動復(fù)合恐懼行為，其作用機(jī)制可能是通過下調(diào) TH mRNA表達(dá)，降低 TH 含量，減少 DA 合成實現(xiàn)的。

【關(guān)鍵詞】強(qiáng)志組方；多發(fā)性抽動癥；恐懼行為；多巴胺；酪氨酸羥化酶；

多發(fā)性抽動癥(Tourette syndrome, TS)是兒童時期常見的精神行為性疾病，且在疾病的發(fā)生和發(fā)展過程中常常伴隨恐懼行為等臨床表現(xiàn)[1]。目前本病的發(fā)病機(jī)制仍不十分明確，普遍認(rèn)為本病的發(fā)病與神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)的異常有關(guān)。部分研究表明患兒腦紋狀體存在多巴胺(dopamine, DA)活動過度現(xiàn)象[2]。酪氨酸羥化酶(tyrosine hydroxylase, TH)是 DA 合成過程中的限速酶，其含量影響 DA 的生成，兩者之間密切關(guān)系。強(qiáng)志組方由巴戟天、制遠(yuǎn)志、茯神、清半夏、天麻、山藥、大棗等藥物組成，具有強(qiáng)志定意，安魂助勇之效，臨床上用于治療多發(fā)性抽動癥，已取得顯著療效[3]。本研究基于3,3-氨基二丙腈((3,3’-iminodipropionitrile, IDPN)誘導(dǎo)的 TS 大鼠模型，與恐懼行為模型相復(fù)合建立復(fù)合大鼠模型，觀察強(qiáng)志組方對大鼠模型行為學(xué)及腦組織中 DA、TH、TH mRNA 的影響，以探討強(qiáng)志組方的作用機(jī)制。

1材料和方法

1.1實驗動物及實驗環(huán)境

SD 雄性大鼠，48 只，體重(200 ± 20)g，購自北京華阜康生物科技股份有限公司，許可證號為 SCXK(京)2014-0004，質(zhì)量合格證號11401300018142。實驗在山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院動物實驗室進(jìn)行，許可證號：SYXK(魯)2011 0019。

1.2儀器與試劑

Agilent 1100高效液相色譜儀(Agilent)，用于含量測定。RM 2235轉(zhuǎn)輪式切片機(jī)(Leica)、TP 1020自動脫水機(jī)(Leica)、ST 5020多功能染色機(jī)(Leica)用于免疫組化檢測。AB17500 PCR 儀(AB & Invitrogen)用于 PCR 檢測。

強(qiáng)志組方是由巴戟天、制遠(yuǎn)志、茯神、清半夏、天麻、山藥、大棗等藥物組成，購自山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科。硫必利片，購自江蘇恩華藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號為 201306181。IDPN 購自 Sigma 公司。DA、NE 標(biāo)準(zhǔn)品均購自中國藥品生物制品檢定所。一抗 Rb a tyrosine hydroxylase 購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司。SP 檢測試劑盒、DAB 顯色試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。TRIzol、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購、熒光定量試劑盒購自于天根生化科技有限公司。

1.3動物實驗

1.3.1造模方法： 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，腹腔注射 IDPN，300 mg /kg，1 次/d，連續(xù)注射 7 d，誘導(dǎo)大鼠出現(xiàn)抽動癥狀。抽動造模完成后，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。將大鼠單獨放入聲電刺激儀，前 5 min 為適應(yīng)期，之后給予 2 S 噪聲信號(“滴滴”兩聲)并緊跟 1 S 電擊(2 mA)，間隔 1 min，每天 30 次，共 5 d。第 6、7 天實驗只予噪音信號，不予電擊；聲電刺激連續(xù)重復(fù) 3 周。

1.3.2分組與給藥： 大鼠隨機(jī)分為正常對照組、TS 復(fù)合恐懼行為組(簡稱模型對照組)、強(qiáng)志組方組(5 g /kg)、硫比利組(25 mg /kg)，每組 12 只。連續(xù)灌服 4 周，正常對照組、模型對照組同時灌服等量生理鹽水。末次給藥后禁食不禁水 24 h，斷頭取腦，冰盒上快速剝離大鼠腦組織，拍照，電子天平稱重，分裝后冷凍保存待檢測。

1.3.3曠場試驗：曠場試驗綜合評價抽動行為與恐懼行為。將動物置于曠場試驗箱中(長×寬×高：100 × 100 × 50)cm，周壁為黑色，底面分成面積相等的 25 方格的曠場里。攝像記錄動物 5 min 的行為，以穿越底面的格數(shù)為水平活動得分，以直立抬首的次數(shù)為垂直活動得分，曠場實驗得分為兩者之和。行為評定采用盲法，由 2 名觀察者觀看錄像后評分，取其平均值，電腦記錄其活動軌跡。

1.3.4刻板行為與運動行為測試：在安靜、避光環(huán)境下，將大鼠放置于曠場試驗箱中適應(yīng) 5 min，按照文獻(xiàn)[4]中對 TS 大鼠模型刻板行為的評分方法，在末次給藥 1 h后，進(jìn)行雙盲觀察 1 h，每 5 min 記錄 1 次，并統(tǒng)計其總分平均值。評分標(biāo)準(zhǔn)見表 1。在進(jìn)行刻板行為測試同時進(jìn)行運動行為測試。按照文獻(xiàn)方法[4]，在末次給藥 1 h后，進(jìn)行雙盲觀察 1 h，每 5 min 記錄 1 次，并統(tǒng)計其總分。評分標(biāo)準(zhǔn)見表 2。

表1　刻板行為測試評分標(biāo)準(zhǔn)

表2　運動行為測試評分標(biāo)準(zhǔn)

1.3.5恐懼行為檢測: 恐懼行為學(xué)檢測通過凍結(jié)時間判定。模型對照組大鼠在第 6、 7 天實驗噪音后出現(xiàn)凍結(jié)姿勢 (freezing posture)，表現(xiàn)為靜止、呆滯、蜷縮、蹲伏等，期間僅有呼吸和輕微搖擺運動。其總時間稱為凍結(jié)時間 ( freezing time)，凍結(jié)時間總時間(單位：s)即為大鼠恐懼行為學(xué)得分。行為評定采用盲法，單位以秒來計算。每測定完 1 組大鼠，氨水清潔自主活動箱中大鼠排泄物，以消除對下只鼠自主活動的影響。

1.3.6腦組織中單胺類神經(jīng)遞質(zhì) DA 檢測:取腦組織 100 mg 放入玻璃勻漿器中，加入高氯酸 500 mg，充分勻漿，離心(12 000 r/min，15 min，4℃)，仔細(xì)收集上清液，經(jīng) 0.20 μm 濾器過濾后取 20 μL注入高效液相色譜儀中。色譜條件：固定相分析柱為 C18 反相色譜柱(250～x 4.6 mm)，流動相組成 A 為 0.02 mol/L 磷酸二氫鉀緩沖液，B 為乙腈。流速為 1 mL/min。柱溫保持在 35℃,熒光檢測器波長設(shè)置為：激發(fā)波長 280 nm，熒光波長 315 nm，以峰面積定量，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出大鼠腦組織內(nèi) DA 含量。

1.3.7腦組織中 TH 的檢測：免疫組織化學(xué)法檢測大鼠腦組織中 TH。大鼠腦組織用 4% 中性甲醛固定 24 h，石蠟包埋，切片，常規(guī)脫蠟至水，蒸餾水沖洗，PBS 浸泡 5 min。含 3% H2O2的去離子水孵育15 min，以消除內(nèi)源性過氧化物酶活性。滴加試劑 A(藍(lán)色液體)室溫孵育 15 min，傾去液體。滴加一抗，4℃ 過夜。第2天取出后室溫平衡 10 min，PBS 沖洗 3 次，每次 3 min。滴加試劑 B(黃色液體)，37℃ 孵育 15 min，PBS 沖洗 3 次，每次 3 min。滴加試劑 C(橙色液體)，37℃ 孵育 15 min，PBS 沖洗 3 次，每次 3 min。DAB 顯色試劑盒顯色，自來水充分浸泡沖洗，蘇木素染液復(fù)染 5 s，脫水至透明，中性樹膠封片。同時 PBS 代替一抗作為陰性對照，顯微鏡下觀察細(xì)胞胞質(zhì)或胞漿呈棕色或者棕黃色顆粒為陽性，不顯色為陰性。每組選取 10 張片，光學(xué)顯微鏡 200 倍隨機(jī)選取 10 個不重疊視野，采用 Leica Qwin V3 圖像分析軟件，對染色結(jié)果進(jìn)行評分，在 200 倍鏡下隨機(jī)選取 4 個視野，進(jìn)行灰度值測定，取平均值。

1.3.8腦組織中 TH mRNA 的檢測： RT-PCR 檢測腦組織中 TH mRNA 的含量。(1)TRIzol 試劑提取總 RNA：取腦組織 100 mg，液氮冷凍后低溫充分研磨，加入 1 mL TRIzol 試劑，靜置 5 min，加入氯仿 0.2 mL 混勻后室溫放置 3 min， 離心(4℃，12 000 r/min)取上清液 0.5 mL，加入異丙醇 0.5 mL 混勻后室溫沉淀 10 min，離心(4℃，12 000 r/min)棄上清液，加入 75% 乙醇(DEPC 水配置)混勻，離心(4℃，7 500 r/min)棄上清液，沉淀(即模板 RNA)略干后加入 DEPC 水 20 μL 備用。(2)RT 反應(yīng)得 cDNA 模板：將10× RT Mix 2 μL、Super pure dNTPs 2 μL、Oligo-(Dt)152 μL、Quant Reverse Transcriptase 1 μL 震蕩混合均勻后加 RNsae-free 雙蒸H2O 及模板 RNA，保持總體積為 20 μL，渦旋震蕩混合均勻簡單離心收集管壁殘余液體，37℃孵育 60 min，得到逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 cDNA。(3)使用 SYBR Green I master mix 試劑盒進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增：SYBR Green PCR Master Mix 10 μL、上游引物 2 μL、下游引物 2 μL、模板 2 μL、dd H2O 4 μL(總計20 μL)，均勻混合后入 PCR 儀進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，測定 TH mRNA 濃度。其中上游引物為 GCAGCCCTACCAAGATCAAA，下游引物為CGCTGGATACGAGAGGCATA。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

2結(jié)果

2.1強(qiáng)志組方對復(fù)合大鼠模型自主活動的影響

與正常對照組相比，模型對照組自主活動減少(P<0.05)；與模型對照組相比，硫必利組、強(qiáng)志組方組大鼠自主活動增多(P<0.05)；與硫必利組相比，強(qiáng)志組方組無明顯變化(P>0.05)。(圖 1)。

2.2強(qiáng)志組方對復(fù)合大鼠模型刻板行為、運動行為的影響

與正常對照組相比，模型對照組全部造模完成后刻板行為、運動行為增多(P<0.05)；與模型對照組相比，硫必利組、強(qiáng)志組方組刻板行為、運動行為均減少(P<0.05)；與硫必利組相比，強(qiáng)志組方組治療刻板行為作用明顯(P<0.05)，治療運動行為硫必利效果明顯(P<0.05)。(圖 2、圖 3)。

圖1　強(qiáng)志組方對大鼠模型自主行為的影響Fig.1　Effects of “Qiangzhizufang” on autonomous behavior in the model rats

圖2　強(qiáng)志組方對大鼠模型刻板行為的影響Fig.2　The effects of “Qiangzhizufang” on stereotyped behavior in the model rats

圖3　強(qiáng)志組方對大鼠模型運動行為的影響Fig.3　The effects of “Qiangzhizufang” on exercise behavior in the model rats

2.3強(qiáng)志組方對復(fù)合大鼠模型恐懼行為的影響

與正常對照組相比，模型對照組全部造模完成后凍結(jié)時間延長(P<0.05)；與模型對照組相比，硫必利組、強(qiáng)志組方凍結(jié)時間縮短(P<0.05)；與硫必利組相比，強(qiáng)志組方組凍結(jié)時間明顯縮短(P<0.05)(圖 4)。

圖4　強(qiáng)志組方對大鼠模型凍結(jié)時間的影響Fig.4　The effects of “Qiangzhizufang” on freezing time in the model rats

2.4強(qiáng)志組方對復(fù)合大鼠模型腦組織內(nèi) DA 影響

與正常對照組相比，模型對照組大鼠腦組織中 DA 含量無明顯變化 (P>0.05)；與模型對照組相比，強(qiáng)志組方組腦組織中 DA 含量降低 (P<0.05) (表 3)。

2.5強(qiáng)志組方對復(fù)合大鼠模型腦組織內(nèi) TH 的影響

應(yīng)用 SP 染色方法觀察各組大鼠腦組織中 TH 陽性率的變化，圖 5 為各組大鼠腦組織 TH 免疫組化染色圖片。與正常對照組相比，模型對照組大鼠腦組織中 TH 陽性率無明顯變化 (P>0.05)；與模型對照組相比，強(qiáng)志組方組腦組織中 TH 陽性率降低 (P<0.05) (表 3)。

表3　強(qiáng)志組方對大鼠模型腦組織中 DA、TH、TH mRNA 含量的影響

注：與正常對照組相比，(1)P>0.05；與模型對照組相比，(2)P<0.05。

Note. Compared with the normal control group,(1)P>0.05; Compared with the model control group,(2)P<0.05.

2.6強(qiáng)志組方對復(fù)合大鼠模型腦組織中 TH mRNA 的影響

與正常對照組相比，模型對照組大鼠腦組織中 TH mRNA 含量無明顯變化 (P>0.05)；與模型對照組相比，強(qiáng)志組方組腦組織中 TH mRNA 含量降低 (P<0.05) (表 3)。

圖5　大鼠腦組織免疫組化染色圖片(標(biāo)尺=100 μm)Fig.5　The immunohistochemistry in brain tissue of model rats(Bar=100 μm)

3討論

TS 屬中醫(yī)學(xué)抽搐、慢驚風(fēng)等范疇，是兒童時期常見的精神行為性疾病。臨床觀察發(fā)現(xiàn) TS 的抽動動作不自主、無目的、重復(fù)，發(fā)作時可受意識控制暫時停止抽動，但不能持久，缺乏控制力是本病的特點，且在疾病的發(fā)生和發(fā)展過程中常常伴隨恐懼行為等臨床表現(xiàn)[1]。通訊作者認(rèn)為疾病的發(fā)生與腎志不足相關(guān)，自擬強(qiáng)志組方治療本病，臨床取得明顯療效[3]。

目前 TS 動物模型的行為學(xué)體現(xiàn)不全面，僅能部分模擬臨床TS患兒的行為學(xué)和神經(jīng)生化方面的改變[5-7]。IDPN 腹腔注射誘導(dǎo)建立 TS 大鼠模型被公認(rèn)是理想的 TS 動物模型之一，目前已被廣泛用于 TS 發(fā)病機(jī)制及藥物作用機(jī)制的研究[8，9]。實驗發(fā)現(xiàn)，IDPN 連續(xù)腹腔注射 7 d后，大鼠刻板行為、運動行為增多，與文獻(xiàn)描述一致[10]，標(biāo)志造模成功。后與恐懼模型復(fù)合，采用聲電誘導(dǎo)建立恐懼模型，自主活動減少，刻板行為、運動行為減少，凍結(jié)時間明顯延長，與文獻(xiàn)描述一致[11，12]，標(biāo)志恐懼造模成功。本研究針對TS動物模型局限性，提出將TS大鼠模型與恐懼大鼠模型相復(fù)合，建立TS復(fù)合大鼠模型，考察強(qiáng)志組方治療效用與作用機(jī)制。與空白對照組相比，模型對照組自主活動減少，刻板行為、運動行為增多，凍結(jié)時間延長，標(biāo)志 TS 造模與恐懼造模均成功復(fù)制。該復(fù)合模型既模擬了患兒的抽動行為，又模擬了患兒常常伴有的恐懼行為，可以較為綜合的評價藥物的治療效果。與模型對照組相比，強(qiáng)志組方組、硫必利組自主活動增加，刻板行為、運動行為明顯減少，表明硫必利與強(qiáng)志組方均可治療抽動癥狀；與模型對照組相比，強(qiáng)志組方組凍結(jié)時間縮短，而硫必利組無明顯改變，表明強(qiáng)志組方可緩解恐懼行為，而硫必利則無此方面作用。另外與硫必利組相比，強(qiáng)志組方組一般情況較好，體重增加明顯，提示強(qiáng)志組方具有療效好，不良反應(yīng)少的優(yōu)點。

TS 的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確[13]，普遍認(rèn)為此病的發(fā)生可能是由遺傳、免疫、神經(jīng)生物、心理、社會、感染、創(chuàng)傷、及藥物濫用等因素單獨或聯(lián)合致病的結(jié)果[12]。其中，從神經(jīng)生物學(xué)角度探討的神經(jīng)生化學(xué)說最受關(guān)注[14]。目前眾多研究者認(rèn)為此病的發(fā)生與 DA 系統(tǒng)的亢進(jìn)有關(guān)，研究方向主要集中在 DA 異常分泌和 DA 受體超敏感方面[7]。而神經(jīng)遞質(zhì)的合成、儲存、釋放或降解的任何環(huán)節(jié)受到干擾，或遞質(zhì)受體的功能異常，均可導(dǎo)致相應(yīng)的神經(jīng)精神功能的改變，如恐懼行為產(chǎn)生[15-16]。本研究中，與正常對照組相比，模型對照組中 DA 含量無明顯改變；與模型對照組相比，強(qiáng)志組方組 DA 含量下降。本研究中選用 IDPN 腹腔注射建立 TS 大鼠模型，關(guān)于其 DA 含量變化，文獻(xiàn)報道不一致[17]，普遍認(rèn)為其可導(dǎo)致 DA 含量下降或保持不變[18-20]。采用聲電刺激建立恐懼大鼠模型，可導(dǎo)致 DA含量應(yīng)激性升高[21]。本研究中 DA 含量無明顯改變，猜測可能是由于其 IDPN 誘導(dǎo)建立 TS 模型導(dǎo)致 DA 含量下降，而后又進(jìn)行聲電刺激誘導(dǎo)建立恐懼模型導(dǎo)致 DA 含量應(yīng)激性升高，兩者最終相抵導(dǎo)致含量無明顯變化。與模型對照組相比，強(qiáng)志組方組 DA 含量下降，硫必利組 DA含量無明顯變化，因此推測強(qiáng)志組方與硫必利作用機(jī)制可能存在不同。TS的發(fā)生主要認(rèn)為DA 異常分泌增加和 DA 受體超敏感方面[7]，硫必利是多巴胺受體阻滯劑，因而考慮強(qiáng)志組方發(fā)揮作用可能是通過減少 DA 異常分泌而實現(xiàn)的?？謶譅顟B(tài)下 DA 含量升高[20]，硫必利與多巴胺受體結(jié)合發(fā)揮治療作用而不具備減少 DA 含量的作用，從而可治療 TS 而不能改善恐懼行為，由此推測強(qiáng)志組方通過減少 DA 含量而發(fā)揮治療 TS 和恐懼作用的。

多巴胺神經(jīng)元攝取血液中的酪氨酸，酪氨酸在 TH的催化下生成多巴，再經(jīng)多巴胺脫羧酶作用生成DA。其過程中TH 是DA生物合成過程的限速酶，TH的含量影響 DA的合成。本研究中，與空白對照組相比，模型對照組TH無明顯變化；與模型對照組相比，強(qiáng)志組方組 TH含量下降，其變化趨勢與各組DA含量變化趨勢一致， TH mRNA變化趨勢與 TH變化趨勢一致，由此推測強(qiáng)志組方可能是通過減少 TH mRNA 的表達(dá)，降低TH含量，影響DA合成的。

綜上所述，強(qiáng)志組方能改善復(fù)合模型大鼠抽動行為、恐懼行為，其作用機(jī)制可能是通過下調(diào) TH mRNA 的表達(dá)，降低 TH 的含量，從而影響 DA 含量而實現(xiàn)的。疾病的發(fā)生與諸多因素相關(guān)，強(qiáng)志組方是否存在其他作用機(jī)制還有待更深入的研究。

參考文獻(xiàn)：

[1]劉智勝. 小兒多發(fā)性抽動癥 [M]. 北京：人民衛(wèi)生出版社.2002: 92-92.

[2]Houeto JL，Gire P. Tics and Tourette syndrome: diagnosis, course and treatment principles [J]. Presse Med, 2008, 37(2): 263-270.

[3]閻兆君, 孫聰玲, 王晶. 多發(fā)性抽動癥中醫(yī)臨床辨證現(xiàn)狀與思考 [J]. 中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育, 2007, 5(1): 14-15.

[4]Diamond BI, Reyes MG, Borison R. A new animal model for Tourette syndrome [J]. Adv Neurol, 1982, 35: 221-225.

[5]Thomas DL, Susan H F. Neurobiological basis of serotonin-dopamine antagonists in the treatment of Gilles de la Tourette syndrome [J]. Progr Brain Res, 2008, 172: 495-513.

[6]王夢雨, 鄭毅, 崔永華. 抽動穢語綜合征動物實驗?zāi)Ｐ脱芯窟M(jìn)展 [J]. 中國健康心理學(xué)雜志, 2014, 22(10): 1598-1600.

[7]車立純. 抽動障礙動物模型研究進(jìn)展 [J]. 中國兒童保健雜志, 2013, 21(6): 615-617.

[8]Soler MC, Vilardosa U, Saldana RS, et al. Loss of neurofilaments in the neuromuscular junction in a rat model of proximal axonopathy [J]. Neuropathol Appl Neurobiol, 2012, 38(1): 61-71.

[9]劉智勝. 小兒多發(fā)性抽動癥 [M]. 北京：人民衛(wèi)生出版社. 2002: 237-238.

[10]衛(wèi)利, 王素梅, 陳自佳, 等. 化學(xué)因素誘發(fā)的多發(fā)性抽動癥動物模型的比較研究 [J]. 中華行為醫(yī)學(xué)與腦科學(xué)雜志, 2010, 19(8): 683-686.

[11]董秋安, 劉曉偉. 恐懼應(yīng)激大鼠行為學(xué)評估及比較 [J]. 黑龍江中醫(yī)藥, 2014, 43(1): 44-45.

[12]劉佳佳, 潘霄, 嚴(yán)進(jìn), 等. 大鼠恐懼應(yīng)激模型的建立及指標(biāo)篩選 [J]. 實用醫(yī)藥雜志, 2011, 28(5): 447-450.

[13]齊越, 魏小維. 多發(fā)性抽動癥發(fā)病相關(guān)因素的研究進(jìn)展 [J]. 中國兒童保健雜志, 2013, 21(6): 618-619.

[14]段玲玲, 張驃. 小兒多發(fā)性抽動癥中樞神經(jīng)生化介質(zhì)研究進(jìn)展 [J]. 江西中醫(yī)藥, 2008, 39(11): 78-80.

[15]董秋安, 劉曉偉, 許麗, 等. 驚恐應(yīng)激對大鼠下丘腦單胺類遞質(zhì)的影響及中藥干預(yù) [J]. 遼寧中醫(yī)雜志, 2006, 33(12): 1652-1653.

[16]謝忠禮, 李杰, 王興華. 加味四逆散對慢性應(yīng)激模型大鼠下丘腦單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的影響 [J]. 中國實驗方劑學(xué)雜志, 2008, 14(1): 50-52.

[17]王道涵, 王素梅, 衛(wèi)利, 等. 健脾止動湯對多發(fā)性抽動癥模型小鼠紋狀體多巴胺及其受體含量的影響[J]. 北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報, 2012, 35(7): 452-455.

[18]杜淑娟, 彭貝如, 陳秀梅. 益智寧神口服液對抽動穢語綜合征模型大鼠神經(jīng)生物學(xué)和行為學(xué)的影響 [J]. 廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報, 2012, 24(7): 358-360.

[19]朱先康, 韓新民, 王敏華. 定抽顆粒治療小兒多發(fā)性抽動癥的臨床及實驗研究 [J]. 中華中醫(yī)藥雜志, 2011, 26(2): 399-402.

[20]張如意, 張麗, 艾厚喜, 等. 金童顆粒治療擬抽動穢語綜合征模型大鼠的藥理機(jī)制研究 [J]. 中國康復(fù)理論與實踐, 2010, 16(10): 910-912.

[21]Inglis FM, Moghaddam B. Dopaminegic innervation of the amygdala highly responsive to stress [J]. Neuroehem, 1999, 72: 1088-1094.

〔修回日期〕2015-12-25

Effect of “Qiangzhizufang” on the rat model of Tourette syndrome combined with fear

JIN Zhi1, YAN Zhao-jun2, LI Ya-qun1, ZHAO Xing-you1, WU Jin-yong2, XI Lei-ming2

(1. Shandong University of TCM, Jinan 250014, China;2. Affiliated Hospital of Shandong University of TCM, Jinan 250014)

【Abstract】ObjectiveTo explore the functional mechanism of a Chinese medicine compound “Qiangzhizufang” on rat model of Tourette syndrome (TS) combined with fear. Methods The rat model of TS combined with fear was established by intraperitoneal injection of 3,3’-iminodipropionitrile (IDPN) combined with acoustic stimulation. After giving different drug lavage treatment, the changes of behavior of the rat models were assessed by field test and behavior test. The content of DA, TH and TH mRNA in the brain tissue was detected by HPLC, immunohistochemistry and RT-PCR, separately. ResultsCompared with the normal control group, stereotyped behavior and exercise behavior were increased, freezing time prolonged, but the content of DA, TH and TH mRNA in the brain tissue were not obviously changed in the model control group. Compared with the model control group, the stereotyped behavior and exercise behavior were decreased, content of DA, TH and TH mRNA in the brain tissue was decreased in the “Qiangzhizufang” group. ConclusionsThe Chinese medicine compound “Qiangzhizufang” can improve the behavior in rat models of TS combined with fear. This effect may be realized through down-regurating TH mRNA expression, reducing the content of TH, and reducing the dopamine synthesis.

【Key words】Qiangzhizufang, a Chinese medicine compound; Tourette syndrome, TS; Fear behavior; Dopamine; (DA); Tyrosine hydroxylase (TH); Brain; Rat

doi:10.3969.j.issn.1671-7856. 2016.02.015

【中圖分類號】R-33

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A

【文章編號】1671-7856(2016) 02-0071-06

[作者簡介]金枝(1986-)，女，研究方向：中醫(yī)兒科學(xué)。E-mail: jinzi-1986@163.com。[通訊作者]閻兆君(1963-)，男，研究方向：中醫(yī)兒科學(xué)。Email： yanzhaojun7790@sina.com。

[基金項目]山東省科技發(fā)展計劃項目(編號：2009GG20002048)。