• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    脫除阿魏酸后車前子多糖的溶液性質(zhì)、構(gòu)象特征及固體形貌

    2016-04-08 06:24:00殷軍藝劉曉瑩聶少平謝明勇

    殷軍藝, 劉曉瑩, 聶少平, 謝明勇

    (南昌大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國家重點實驗室, 南昌 330047)

    ?

    脫除阿魏酸后車前子多糖的溶液性質(zhì)、構(gòu)象特征及固體形貌

    殷軍藝, 劉曉瑩, 聶少平, 謝明勇

    (南昌大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國家重點實驗室, 南昌 330047)

    摘要分別采用NaOH和阿魏酸酯酶對車前子多糖(PLCP)進行脫除阿魏酸處理, 得到的多糖分別記為PLCP-FAS和PLCP-FAE. 通過基本理化性質(zhì)測定和單糖組成分析比較了處理前后多糖的基本結(jié)構(gòu)特征, 并采用烏式黏度計、高效體積排阻色譜(HPSEC)和掃描電子顯微鏡(SEM)等方法表征了多糖的溶液性質(zhì)、構(gòu)象特征及固體形貌. 結(jié)果表明, 經(jīng)NaOH或阿魏酸酯酶處理后多糖的單糖組成基本不變, 但糖含量和糖醛酸含量增加, 表觀黏度顯著下降; PLCP-FAS和PLCP-FAE在0.1 mol/L NaCl和0.5 mol/L NaOH中的特性黏度基本相同; HPSEC分析結(jié)果表明, PLCP-FAE的重均分子量(Mw)為3.17×106, PLCP-FAS的Mw為2.83×106, PLCP-FAS和PLCP-FAE的持續(xù)圍長值一致, 但相同分子量下PLCP-FAS的特性黏度低于PLCP-FAE; SEM測定結(jié)果顯示, PLCP-FAS和PLCP-FAE仍保留一定線性鏈特征. 上述結(jié)果表明, 脫除阿魏酸的大粒車前子多糖呈現(xiàn)半柔順鏈的構(gòu)象特征, 樣品固體形貌仍保留一定的線性鏈特征.

    關(guān)鍵詞車前子; 多糖; 阿魏酸; 溶液性質(zhì); 構(gòu)象特征

    車前子為車前(PlantagoasiaticaL., 又稱大粒車前子)或平車前(PlantagodepressaWilld.)的干燥成熟種子, 主要產(chǎn)自江西、河南[1], 可用作保健食品. 車前子除了含有苯乙醇苷類化合物外[2], 還含有大量黏液質(zhì), 具有抗氧化[3,4]、免疫調(diào)節(jié)[5,6]和提升腸道健康[7,8]等功能. 大粒車前子富含阿拉伯糖和木糖, 主鏈由β-1,4-linked Xylp順序連接組成, 大量阿拉伯糖和木糖殘基分布在支鏈上, 同時支鏈上帶有部分GlcA[9,10]. 前文[11]研究表明, 阿魏酸對于維持大粒車前子高黏性和弱凝膠特征起重要作用, 采用NaOH脫除車前子多糖中的阿魏酸后多糖黏度顯著下降. 對于和車前子多糖具有相似結(jié)構(gòu)的阿拉伯木聚糖, 其高黏性特征通常與其支鏈末端Ara上存在的阿魏酸密切相關(guān), 多糖鏈間的阿魏酸通過交聯(lián)等作用賦予了阿拉伯木聚糖獨特的分子結(jié)構(gòu)和理化特征[12~14]. 阿拉伯木聚糖類多糖通常呈現(xiàn)出半柔順鏈的構(gòu)象特征[15~17], 其支鏈上的阿拉伯糖取代度對該類型多糖構(gòu)象特征的影響很小[15,18], 而多糖上的阿魏酸對其構(gòu)象有一定影響[19], 迄今未見關(guān)于阿魏酸和阿拉伯木聚糖溶液、構(gòu)象特征之間相互作用關(guān)系的報道. 大粒多糖為阿拉伯木聚糖, 含有一定量的阿魏酸, 本文通過堿法或者酶法脫除車前子多糖上的阿魏酸, 表征了脫除阿魏酸后多糖溶液的構(gòu)象特征, 進而分析了脫除阿魏酸前后的車前子多糖在結(jié)構(gòu)和構(gòu)象特征等方面的變化, 以期為車前子多糖高黏度性質(zhì)提供更科學(xué)、合理的解釋.

    1實驗部分

    1.1試劑與儀器

    大粒車前子產(chǎn)自江西省吉安市; 單糖標(biāo)準(zhǔn)品葡萄糖(Glucose)、鼠李糖(Rhamnose)、巖藻糖(Fucose)、阿拉伯糖(Arabinose)、木糖(Xylose, Xyl)、甘露糖(Mannose)和半乳糖(Galactose)購自德國Merck公司/美國Sigma化學(xué)制劑公司; 阿魏酸酯酶購自愛爾蘭Megazyme公司; 其它試劑均為分析純.

    ICS 500型離子色譜儀(美國Dionex公司); 高效體積排阻色譜(HPSEC)系統(tǒng)包括Wyatt D05SFD01泵、Dawn Heleos型多角度激光光散射檢測器、OPTILAB T-rEX示差檢測器和Visco Star Ⅱ型黏度檢測器(美國Wyatt公司), 色譜柱為Ohpak SB-G保護柱(8 mm×50 mm)、Ohpak SB-806 HQ型色譜柱和Ohpak SB-804 HQ型色譜柱(日本Showa Denko公司) 串聯(lián)使用; ALPHA 1-2型冷凍干燥機(德國Martin Christ公司); Milli-Q 超純水儀(美國Millipore公司); ARES流變儀(美國TA公司); 透析袋(截留分子量8000~10000); QUANTA 200F掃描電子顯微鏡(美國FEI公司).

    1.2實驗過程

    1.2.1多糖樣品的制備參考文獻[10]方法制備車前子精制多糖(PLCP). 稱取1.0 g PLCP溶解于50 mL水中, 加入150 mL 5 mg/mL NaBH4的NaOH溶液(終濃度為2.0 mol/L), 在N2氣保護下攪拌4 h, 用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1.5以下, 加入300 mL無水乙醚萃取3次. 將萃取后的多糖溶液減壓濃縮, 經(jīng)透析、凍干得到脫除阿魏酸后的車前子多糖PLCP-FAS(收率63%).

    稱取1.0 g PLCP溶解于300 mL磷酸鈉緩沖液(0.1 mol/L)中, 加入50 μL 0.39 mmol/L阿魏酸酯酶, 于40 ℃反應(yīng)3 h后, 透析、離心收集上層清液, 經(jīng)濃縮、凍干得到多糖PLCP-FAE(收率89%).

    1.2.2測試與表征以Xyl為標(biāo)準(zhǔn)品, 采用苯酚-硫酸法測定總糖含量[20]; 以葡萄糖醛酸為標(biāo)準(zhǔn)品, 采用改良硫酸-咔唑法測定糖醛酸含量[21]; 以牛血清白蛋白為標(biāo)準(zhǔn)品, 采用考馬斯亮藍法測定蛋白含量[22]. 取一定量多糖加入2 mol/L H2SO4中, 于100 ℃水解2 h后, 用離子色譜儀測定單糖組成[23].

    利用烏氏黏度計分別測定PLCP-FAS和PLCP-FAE在水溶液、0.1 mol/L NaCl溶液和0.5 mol/L NaOH溶液中的特性黏度, 測試溫度為25.0 ℃. 依據(jù)Huggins和Kramer公式計算特性黏度

    (1)

    (2)

    式中,ηsp為表觀黏度,ηrel為相對黏度,c為待測物濃度,k為常數(shù), 通過濃度外推法可計算得到

    (3)

    (4)

    HPSEC測定: 將PLCP-FAS和PLCP-FAE溶解在0.1 mol/L NaNO3溶液中(含0.2 mg/mL NaN3), 室溫下攪拌溶解12 h以上(樣品濃度為0.5 mg/mL), 然后用0.45 μm濾膜過濾. 以0.1 mol/L NaNO3為流動相(含0.2 mg/mL NaN3), 流速為0.6 mL/min, 進樣量100 μL進行HPSES測定. 示差折光指數(shù)濃度增量(dn/dc)值取0.146. 以Mw為40000的葡聚糖(Dextran)為標(biāo)樣對儀器進行歸一化處理. 采用Wyatt公司ASTRA軟件(6.1.1.84)采集和分析數(shù)據(jù).

    2結(jié)果與討論

    2.1基本理化性質(zhì)和單糖組成分析

    PLCP經(jīng)脫除阿魏酸處理后的基本理化性質(zhì)和單糖組成結(jié)果如表1所示. 與原有樣品相比[11], 多糖脫除阿魏酸后糖含量和糖醛酸含量顯著上升, 但主要單糖組成種類和相對比例幾乎無變化, 特別是阿拉伯糖(Arabinose)和木糖(Xylose)的比例基本穩(wěn)定, 說明無論是用NaOH還是阿魏酸酯酶處理, 多糖主要結(jié)構(gòu)均未發(fā)生顯著變化. 但是多糖經(jīng)脫除阿魏酸處理后, 阿魏酸之間的交聯(lián)作用以及阿魏酸與Ca2+的相互作用消失, 導(dǎo)致多糖黏度急劇下降(圖S1~圖S3, 見本文支持信息).

    Table 1 Physicochemical properties and monosaccharide compositions of PLCP-FAS and PLCP-FAE*

    * ND: Not determined.

    2.2特性黏度分析

    特性黏度用于衡量給定溶劑中被單獨的聚合物鏈所占據(jù)的流體體積. PLCP-FAS和PLCP-FAE在不同溶劑中的特性黏度存在一定差異, 如PLCP-FAS和PLCP-FAE在純水中特性黏度最高, 分別達到43.68和32.94 dL/g, 當(dāng)2個組分溶解于0.1 mol/L NaCl溶液中時, 由于Na+可以消除多糖中酸性電荷引起的排斥作用, 致使多糖的特性黏度降低(均為3.45 dL/g). 在0.5mol/L NaOH溶液中, PLCP-FAS和PLCP-FAE的特性黏度則分別降至2.64和2.68 dL/g.

    2.3HPSEC檢測

    HPSEC-激光光散射儀聯(lián)用稱為絕對方法, 除可得到Mw, 還能得到多分散指數(shù)(Mw/Mn)和均旋轉(zhuǎn)半徑(Rg)等構(gòu)象參數(shù)[24], PLCP-FAE和PLCP-FAS的HPSEC測定結(jié)果見表2(HPSEC色譜圖見圖S4和圖S5, 見本文支持信息). 由HPSEC結(jié)果可知, PLCP-FAS的Mw大于PLCP-FAE, PLCP-FAS的多分散指數(shù)(Mw/Mn)和PLCP-FAE相當(dāng), 但二者的Mw和Mn均小于PLCP[25]. PLCP-FAE和PLCP-FAS的樣品回收率較高, 與其它來源的小分子量阿拉伯木聚糖在HPSEC測試中的數(shù)值接近[15,16].

    Table 2 Analysis results of PLCP-FAS and PLCP-FAE from HPSEC*

    * Injection volume: 100 μL; flow rate: 0.6 mL/min; sample concentration: 0.5 mg/mL; mobile phase: 0.1 mol/L NaNO3containing 0.2 mg/mL NaNO3.Rg: Mean-square radius of gyration;Rh: hydrodynamic radius.

    Fig.1 Logarithmic plot of molecular weight against intrinsic viscosity of PLCP-FAS(A),  PLCP-FAE(B) and wmbination(C)

    由Mark-Houwink經(jīng)驗公式([η]=KMα, 其中K和α是經(jīng)驗常數(shù), 隨聚合物的種類、溶劑以及測定溫度不同而呈現(xiàn)一定差異)可知, 在一個特定溶劑中測定的特性黏度與相對分子質(zhì)量M有關(guān). 對于線性無規(guī)卷曲多糖, 指數(shù)α介于0.5~0.8之間, 且隨著鏈條剛性的增加而增大. 對于PLCP-FAS, 在低分子量(占總數(shù)的50%)和高分子量區(qū)域(占總數(shù)的47%)的α值分別為0.84和0.20, 而PLCP-FAE在低分子量(占總數(shù)的70%)和高分子量區(qū)域(占總數(shù)的26%)的α值分別為0.64和0.18(見圖1). 通過蠕蟲狀鏈模型(Bohdanecky模型)可分析PLCP-FAS和PLCP-FAE的構(gòu)象參數(shù), 伸展無規(guī)線團的(M2/[η])1/3和M1/2存在以下線性關(guān)系[26,27]

    (5)

    式中:M為HPSEC測得的相對分子質(zhì)量; [η]為每個級分對應(yīng)的特性黏度;ML為單位圍長摩爾質(zhì)量;Lp為持續(xù)圍長;A0和B0為常數(shù)[25];Φ0,∞=2.86×1023mol-1;ML取值為420 g/(mol·nm). PLCP-FAS和PLCP-FAE的Bohdanecky擬合圖見圖2, 通過計算得到PLCP-FAS和PLCP-FAE的Lp值均為2.1 nm. 持續(xù)圍長Lp的大小常用于衡量多糖鏈剛性結(jié)構(gòu)的強弱, 如非常柔順的普魯蘭的Lp介于1.2~1.9 nm之間, 而剛性結(jié)構(gòu)非常強的黃原膠的Lp可達到100~150 nm[17], 通過HPSEC測試計算得到PLCP-FAS和PLCP-FAE的持續(xù)圍長Lp均為2.1 nm, 說明脫除阿魏酸后的多糖表現(xiàn)出半柔順鏈構(gòu)象特征, 文獻[15~17]也報道阿拉伯木聚糖類多糖通常呈現(xiàn)出半柔順鏈的構(gòu)象特征.

    Fig.2 Bohdanecky plot of PLCP-FAS(A) and PLCP-FAE(B) in 0.1 mol/L NaNO3

    2.4SEM表征

    采用SEM表征了脫除阿魏酸后車前子多糖的形態(tài)變化情況, 結(jié)果如圖3所示. 在未脫除阿魏酸之前, 車前子多糖PLCP基本上呈現(xiàn)線性形態(tài), 存在少量無規(guī)則卷曲結(jié)構(gòu)[10]. 由圖3(A)可見, PLCP-FAS基本上表現(xiàn)為短小的細絲狀鏈結(jié)構(gòu), 有少部分鏈上出現(xiàn)圓形或橢圓形節(jié)點. 而PLCP-FAE還能觀察到細絲狀鏈構(gòu)象, 但鏈的直徑大小不一, 重要的是多糖鏈上出現(xiàn)了大量的圓形或橢圓形節(jié)點[圖3(B)]. 上述結(jié)果表明, 車前子多糖脫除阿魏酸后, 多糖鏈的形貌發(fā)生了一定變化.

    Fig.3 SEM images of PLCP-FAS(A) and PLCP-FAE(B)

    綜上所述, 分別采用NaOH和阿魏酸酶對車前子多糖PLCP進行脫除阿魏酸處理, 制得多糖PLCP-FAS和PLCP-FAE. 與PLCP相比, PLCP-FAS和PLCP-FAE的結(jié)構(gòu)特征未發(fā)生明顯改變, 但其表觀黏度和特性黏度數(shù)值顯著降低, 同時相對分子質(zhì)量和可持續(xù)圍長等值也有一定程度的降低. PLCP-FAS和PLCP-FAE呈現(xiàn)半柔順鏈的構(gòu)象特征, 二者的固體形貌發(fā)生了改變, 但均仍保留一定的線性鏈特征.

    支持信息見http://www.cjcu.jlu.edu.cn/CN/10.7503/cjcu20150513.

    參考文獻

    [1]State Pharmacopoeia Committee,People’sRepublicofChinaCodex(FirstSection), China Medical Sciences Press, Beijing, 2010, 63(國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典(一部), 北京: 中國醫(yī)藥科技出版社, 2010, 63)

    [2]Li L., Liu C. M., Chen Z. J., Wang J., Shi D. F., Liu, Z. Q.,Chem.Res.ChineseUniversities, 2009, 25(6), 817—821

    [3]Ye C. L., Hu W. L., Dai D. H.,Int.J.Biol.Macromol., 2011, 49(4), 466—470

    [4]Yin J. Y., Nie S. P., Zhou C., Wan Y., Xie M. Y.,J.Sci.FoodAgric., 2010, 90, 210—217

    [5]Huang D. F., Tang Y. F., Nie S. P., Wan Y., Xie M. Y., Xie X. M.,Eur.J.Pharmacol., 2009, 620(1—3), 105—111

    [6]Huang D. F., Nie S. P., Jiang L. M., Xie M. Y.,Int.Immunopharmacol., 2014, 18, 236—243

    [7]Hu J. L., Nie S. P., Wu Q. M., Fu Z. H., Gong J., Cui S. W., Xie M. Y.,J.Agric.FoodChem., 2014, 62, 229—234

    [8]Hu J. L., Nie S. P., Li C., Fu Z. H., Xie M. Y.,J.Agric.FoodChem., 2013, 61, 6092—6101

    [9]Yin J. Y., Li C., Nie S. P., Xie M. Y.,Chem.J.ChineseUniversities, 2013, 34(12), 2728—2733(殷軍藝, 李昌, 聶少平, 謝明勇. 高等學(xué)校化學(xué)學(xué)報, 2013, 34(12), 2728—2733)

    [10]Yin J. Y., Lin H. X., Li J., Cui S. W.,Carbohydr.Polym., 2012, 87, 2416—2424

    [11]Yin J. Y., Nie S. P., Li J., Cui S. W.,J.Agric.FoodChem., 2012, 60(32), 7981—7987

    [12]Izydorczyk M. S., Biliaderis C. G.,J.Agric.FoodChem., 1992, 40, 561—566

    [13]Carvajal-Millan E., Landillon V., Morel M. H., Rouau X., Doublier J. L., Micard V.,Biomacromolecules, 2005, 6, 309—317

    [14]Kale M. S., Hamaker B. R., Campanella O. H.,FoodHydrocolloids, 2013, 31, 121—126

    [15]Pitk?nen L., Liisa V., Tenkanen M., Tuomainen P.,Biomacromolecules, 2009, 10, 1962—1969

    [16]Pitk?nen L., Tuomainen P., Virkki L., Aseyew V., Tenkanen M.,J.Agric.FoodChem., 2008, 56, 5069—5077

    [17]Guo Q. B., Wang Q., Cui S. W., Kang J., Hu X. Z., Xing X. H., Yada R. Y.,FoodHydrocolloids, 2013, 32, 155—161

    [18]Dervilly P. G., Thibault J. F., Saulnier L.,Carbohydr.Res., 2001, 330, 365—372

    [19]Dervilly P. G., Saulnier L., Thibault J. F.,J.Agric.FoodChem., 2000, 48, 270—278

    [20]Dubois M., Gilles K. A., Hamilton J. K., Rebers P. A., Smith F.,Anal.Chem., 1956, 28(3), 350—356

    [21]Blumenkrantz N., Asboe H. G.,Anal.Biochem., 1973, 54, 484—489

    [22]Bradford M. M.,Anal.Biochem., 1976, 72, 248—254

    [23]Cui W., Wood P. J., Blackwell B., Nikiforuk J.,Carbohydr.Polym., 2000, 41, 249—258

    [24]Li S., Xu S. Q., Zhang L. N.,ActaPolymericaSinica, 2010, (12), 1359—1375(李盛, 許淑琴, 張俐娜. 高分子學(xué)報, 2010, (12), 1359—1375)

    [25]Yin J. Y., Nie S. P., Guo Q. B., Wang Q., Cui S. W., Xie M. Y.,Carbohydr.Polym., 2015, 124, 331—336

    [26]Bohdanecky M.,Macromolecules, 1983, 16, 1483—1492

    [27]Chen J. H., Zhang L. N., Yu D.S., Zhu R. P.,Chem.J.ChineseUniversities, 2000, 21(6), 961—964(陳敬華, 張俐娜, 余登壽, 朱榮萍. 高等學(xué)?;瘜W(xué)學(xué)報, 2000, 21(6), 961—964)

    Solution, Conformational Properties and Morphology of Psyllium

    Polysaccharide with Ferulic Acid Removal?

    YIN Junyi, LIU Xiaoying, NIE Shaoping, XIE Mingyong*

    (StateKeyLaboratoryofFoodScienceandTechnology,NanchangUniversity,Nanchang330047,China)

    AbstractThis study was aimed at investing the solution and conformation properties of polysaccharide from psyllium(or seeds ofPlantagoasiaticaL.). The fraction which was subjected with NaOH to remove ferulic acid was named as PLCP-FAS, while another fraction was PLCP-FAE whose ferulic acid was removed by feruloyl esterase. Ubbelohde capillary viscometer, HPSEC with refractive index, light scattering and viscometric detectors and scanning electron microscope(SEM) were applied to investigate the two fractions’ solution, conformation properties and solid form. The results showed that there was little change in monosaccharide compositions of the polysaccharide after ferulic acid removing, not mater by NaOH or enzyme. Sugar contents and uronic acid contents were much higher both for the two fractions. However, its apparent viscosity reduced remarkably. Intrinsic viscosity of PLCP-FAS and PLCP-FAE were close either in 0.1 mol/L NaCl or 0.5 mol/L NaOH. HPSEC analysis results showed that weight average molecular weight of PLCP-FAS was 3.17×106, while it was 2.83×106for PLCP-FAE. Persistence length of PLCP-FAS and PLCP-FAE were similar. SEM results showed that both PLCP-FAE and PLCP-FAS still exhibited certain linear chain characteristics. The above results indicated that the psylliun polysaccharide after removing ferulic acid was semi flexible, and morphology of the polysaccharide remained some linear chain characteristics.

    KeywordsPsyllium; Polysaccharide; Ferulic acid; Solution property; Conformation characteristic

    (Ed.: P, H, S, K)

    ? Supported by the National Natural Science Foundation of China(Nos.31301434, 21564007), the National Key Technology Research and Development Program of China for the 12th Five-year Plan(No.2012BAD33B06), the Research Fund for the Doctoral Program of Higher Education of China(No.20133601120009) and the Natural Science Foundation of Jiangxi Province, China(No.20142BAB214004).

    doi:10.7503/cjcu20150490

    基金項目:國家自然科學(xué)基金(批準(zhǔn)號: 31301434, 21564007)、“十二五”國家科技支撐計劃項目(批準(zhǔn)號: 2012BAD33B06)、教育部高等學(xué)校博士學(xué)科點專項科研基金(批準(zhǔn)號: 20133601120009)和江西省自然科學(xué)基金(批準(zhǔn)號: 20142BAB214004)資助.

    收稿日期:2015-07-01. 網(wǎng)絡(luò)出版日期: 2015-12-20.

    中圖分類號O629.12

    文獻標(biāo)志碼A

    聯(lián)系人簡介: 謝明勇, 男, 博士, 教授, 博士生導(dǎo)師, 主要從事食品化學(xué)和營養(yǎng)學(xué)研究. E-mail: myxie@ncu.edu.cn

    伊人久久国产一区二区| 欧美精品亚洲一区二区| 我的女老师完整版在线观看| 99国产精品免费福利视频| 久久精品夜色国产| 国产亚洲欧美精品永久| 国产爱豆传媒在线观看| 国产成人午夜福利电影在线观看| 韩国av在线不卡| 久久国产亚洲av麻豆专区| 22中文网久久字幕| 亚洲最大成人中文| 亚洲人成网站在线播| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 久久久成人免费电影| 伦理电影大哥的女人| 久久久久久人妻| 女性被躁到高潮视频| 亚洲精品国产色婷婷电影| 亚洲电影在线观看av| 久久久a久久爽久久v久久| videossex国产| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 国产精品人妻久久久久久| 黄色视频在线播放观看不卡| 男女下面进入的视频免费午夜| 大陆偷拍与自拍| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 久热久热在线精品观看| 久久精品夜色国产| 国产在视频线精品| 亚洲综合精品二区| 大香蕉97超碰在线| 国内精品宾馆在线| 纯流量卡能插随身wifi吗| 免费少妇av软件| 亚洲人成网站在线观看播放| 又爽又黄a免费视频| 日韩欧美精品免费久久| 有码 亚洲区| www.色视频.com| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 国产亚洲5aaaaa淫片| 国产在线免费精品| 午夜视频国产福利| 啦啦啦在线观看免费高清www| 男女啪啪激烈高潮av片| 黄色日韩在线| 亚洲在久久综合| videos熟女内射| 51国产日韩欧美| 久久 成人 亚洲| 欧美另类一区| xxx大片免费视频| 欧美日韩精品成人综合77777| 人妻夜夜爽99麻豆av| h日本视频在线播放| av专区在线播放| 美女高潮的动态| 精品久久久久久久末码| av一本久久久久| 少妇人妻久久综合中文| 黄片无遮挡物在线观看| 在线看a的网站| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 蜜臀久久99精品久久宅男| 三级国产精品欧美在线观看| 99视频精品全部免费 在线| 亚洲欧美日韩东京热| 精品久久久噜噜| 直男gayav资源| 国产爽快片一区二区三区| 99热6这里只有精品| 亚洲成人手机| 免费av中文字幕在线| 久久99热这里只有精品18| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 国产成人freesex在线| 日韩,欧美,国产一区二区三区| h视频一区二区三区| 涩涩av久久男人的天堂| 欧美3d第一页| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 热99国产精品久久久久久7| 一级毛片我不卡| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产综合精华液| 舔av片在线| 欧美另类一区| 国产精品三级大全| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 亚洲美女视频黄频| 哪个播放器可以免费观看大片| 免费人妻精品一区二区三区视频| 三级国产精品欧美在线观看| 欧美精品亚洲一区二区| 国产精品不卡视频一区二区| 免费高清在线观看视频在线观看| 国产亚洲欧美精品永久| 日本vs欧美在线观看视频 | 国产男女超爽视频在线观看| 伦理电影大哥的女人| 免费大片黄手机在线观看| 亚洲丝袜综合中文字幕| 亚洲丝袜综合中文字幕| 成人综合一区亚洲| 涩涩av久久男人的天堂| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 国产精品伦人一区二区| 97精品久久久久久久久久精品| 天堂8中文在线网| 在线观看美女被高潮喷水网站| 舔av片在线| 99九九线精品视频在线观看视频| 久久久久精品久久久久真实原创| 日本黄大片高清| 男人舔奶头视频| 久久久午夜欧美精品| 在线看a的网站| 永久网站在线| 久久久亚洲精品成人影院| 国产爱豆传媒在线观看| 国产精品一区二区性色av| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 欧美最新免费一区二区三区| 亚洲久久久国产精品| 久久亚洲国产成人精品v| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 久久久a久久爽久久v久久| 欧美极品一区二区三区四区| 99热全是精品| 亚洲人与动物交配视频| 国产乱人视频| 亚州av有码| 国产老妇伦熟女老妇高清| 国产一区有黄有色的免费视频| 两个人的视频大全免费| 中国国产av一级| 婷婷色av中文字幕| 少妇高潮的动态图| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 日本一二三区视频观看| 国产在线男女| 五月伊人婷婷丁香| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 国产一区有黄有色的免费视频| 男的添女的下面高潮视频| 伦理电影免费视频| 熟妇人妻不卡中文字幕| 大话2 男鬼变身卡| 激情五月婷婷亚洲| 91精品国产九色| 网址你懂的国产日韩在线| 99久久中文字幕三级久久日本| 婷婷色综合www| 在线观看免费视频网站a站| 男女啪啪激烈高潮av片| 在线观看免费高清a一片| 国产色爽女视频免费观看| 亚洲av日韩在线播放| 日韩强制内射视频| 丝瓜视频免费看黄片| 九九在线视频观看精品| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 久久国产乱子免费精品| 婷婷色综合www| 成人午夜精彩视频在线观看| 精华霜和精华液先用哪个| 91久久精品国产一区二区成人| 国产深夜福利视频在线观看| 成人毛片60女人毛片免费| 91久久精品国产一区二区三区| a级毛色黄片| 女性生殖器流出的白浆| 国产精品一及| 51国产日韩欧美| 欧美+日韩+精品| 搡女人真爽免费视频火全软件| 我要看黄色一级片免费的| 男女无遮挡免费网站观看| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 视频中文字幕在线观看| 国产成人精品一,二区| 久久热精品热| 观看美女的网站| 中文字幕亚洲精品专区| 国产高潮美女av| 国产高清国产精品国产三级 | 日日撸夜夜添| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 国产一区二区三区综合在线观看 | 尾随美女入室| 国产成人91sexporn| 国产黄色视频一区二区在线观看| av福利片在线观看| 综合色丁香网| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲精品日韩av片在线观看| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 国产在线免费精品| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 午夜老司机福利剧场| 秋霞伦理黄片| 久久久久精品久久久久真实原创| 三级国产精品片| 成人亚洲精品一区在线观看 | 国产日韩欧美亚洲二区| 欧美精品一区二区免费开放| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 国产伦在线观看视频一区| www.色视频.com| 亚洲精品成人av观看孕妇| 女人久久www免费人成看片| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 热re99久久精品国产66热6| 人体艺术视频欧美日本| 亚洲色图综合在线观看| 少妇的逼水好多| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 在线免费观看不下载黄p国产| 久久女婷五月综合色啪小说| 色视频在线一区二区三区| av在线老鸭窝| 国产有黄有色有爽视频| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 日韩av免费高清视频| 国产黄色视频一区二区在线观看| 中文字幕久久专区| 最近中文字幕2019免费版| 日本vs欧美在线观看视频 | 日韩制服骚丝袜av| 美女视频免费永久观看网站| 黄色一级大片看看| 又大又黄又爽视频免费| 一区二区三区免费毛片| 中文在线观看免费www的网站| 国产黄色免费在线视频| 亚洲国产精品一区三区| 亚洲精品国产av蜜桃| av天堂中文字幕网| 日韩中文字幕视频在线看片 | 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 一级a做视频免费观看| 久久久色成人| 一个人免费看片子| 婷婷色综合大香蕉| 欧美成人a在线观看| 99久久人妻综合| 久久久久久久久久人人人人人人| xxx大片免费视频| 亚洲国产成人一精品久久久| 久久女婷五月综合色啪小说| 有码 亚洲区| 97精品久久久久久久久久精品| tube8黄色片| 国产精品无大码| 久久6这里有精品| 亚洲不卡免费看| 成人亚洲欧美一区二区av| 日韩中文字幕视频在线看片 | 男女啪啪激烈高潮av片| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 午夜精品国产一区二区电影| 人体艺术视频欧美日本| 黑人猛操日本美女一级片| 国产视频内射| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 一区二区av电影网| 一级黄片播放器| 青春草视频在线免费观看| 内地一区二区视频在线| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 亚洲欧美清纯卡通| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 欧美xxⅹ黑人| 国产精品福利在线免费观看| 国产成人精品婷婷| 超碰97精品在线观看| 不卡视频在线观看欧美| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 国产69精品久久久久777片| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 欧美bdsm另类| 大片免费播放器 马上看| 国产高清三级在线| 国产黄频视频在线观看| 久久ye,这里只有精品| 久久久久久久大尺度免费视频| 中文天堂在线官网| 日日撸夜夜添| videossex国产| 熟妇人妻不卡中文字幕| 国产成人freesex在线| 又大又黄又爽视频免费| 99久久精品国产国产毛片| 久久鲁丝午夜福利片| 搡女人真爽免费视频火全软件| 99久久精品国产国产毛片| 国产成人午夜福利电影在线观看| 成人毛片a级毛片在线播放| 久久ye,这里只有精品| 亚洲国产成人一精品久久久| 欧美日韩精品成人综合77777| 久久国内精品自在自线图片| 久久av网站| 日韩精品有码人妻一区| 国产v大片淫在线免费观看| 人体艺术视频欧美日本| 搡老乐熟女国产| 亚洲国产成人一精品久久久| 精品熟女少妇av免费看| av卡一久久| 99热这里只有是精品50| 街头女战士在线观看网站| av在线播放精品| 国产伦理片在线播放av一区| 男人舔奶头视频| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜 | 在线播放无遮挡| 在线观看三级黄色| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 亚洲最大成人中文| 精品国产三级普通话版| 人妻少妇偷人精品九色| av.在线天堂| 97在线视频观看| 一级av片app| 免费观看在线日韩| 国国产精品蜜臀av免费| 男人添女人高潮全过程视频| 精品国产乱码久久久久久小说| av不卡在线播放| 精品国产露脸久久av麻豆| 在线观看国产h片| 欧美极品一区二区三区四区| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 免费观看的影片在线观看| 国产毛片在线视频| 成人国产av品久久久| 久久久久久久久久久丰满| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 欧美变态另类bdsm刘玥| 26uuu在线亚洲综合色| 男人和女人高潮做爰伦理| 国产成人freesex在线| 精品国产三级普通话版| 亚洲人成网站在线播| 欧美精品一区二区大全| 国精品久久久久久国模美| 国产色爽女视频免费观看| 亚洲精品aⅴ在线观看| 超碰av人人做人人爽久久| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 亚洲成人中文字幕在线播放| 春色校园在线视频观看| 插逼视频在线观看| 欧美一区二区亚洲| av在线老鸭窝| 欧美精品国产亚洲| 熟妇人妻不卡中文字幕| 亚洲精品,欧美精品| 99热6这里只有精品| 99精国产麻豆久久婷婷| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 亚洲国产欧美在线一区| 男人狂女人下面高潮的视频| 久久热精品热| 亚洲欧美一区二区三区国产| 成人亚洲欧美一区二区av| 亚洲国产精品一区三区| 免费看光身美女| 国产精品人妻久久久影院| 欧美丝袜亚洲另类| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 99久久精品一区二区三区| 看非洲黑人一级黄片| 国产片特级美女逼逼视频| 欧美xxⅹ黑人| 好男人视频免费观看在线| 秋霞伦理黄片| 亚洲av成人精品一二三区| 久久精品国产亚洲av天美| 日韩人妻高清精品专区| 能在线免费看毛片的网站| 国产av一区二区精品久久 | 在线免费十八禁| 欧美激情国产日韩精品一区| 高清不卡的av网站| 免费人成在线观看视频色| 精品久久久久久电影网| 免费在线观看成人毛片| 国产 一区精品| 乱系列少妇在线播放| 国产乱人视频| 老司机影院成人| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 国产av国产精品国产| 精品一品国产午夜福利视频| 国产黄频视频在线观看| 简卡轻食公司| 国产精品国产三级专区第一集| 嫩草影院入口| 欧美三级亚洲精品| av在线播放精品| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 久久久精品94久久精品| 国产伦理片在线播放av一区| 免费观看性生交大片5| 国产伦精品一区二区三区四那| 少妇人妻 视频| 欧美高清性xxxxhd video| 午夜福利网站1000一区二区三区| 性色avwww在线观看| 波野结衣二区三区在线| 国产黄片视频在线免费观看| 国产色婷婷99| 国产精品欧美亚洲77777| 一个人免费看片子| 黑人猛操日本美女一级片| 我的老师免费观看完整版| 国产黄色视频一区二区在线观看| 欧美精品一区二区免费开放| 久久精品国产亚洲av天美| 男人舔奶头视频| 免费看av在线观看网站| 国产成人精品久久久久久| 人妻少妇偷人精品九色| 日日啪夜夜撸| 日韩 亚洲 欧美在线| 日本与韩国留学比较| 国产美女午夜福利| 国产精品无大码| 午夜激情福利司机影院| av国产免费在线观看| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 欧美日韩精品成人综合77777| 少妇熟女欧美另类| 欧美日韩精品成人综合77777| 人妻系列 视频| 街头女战士在线观看网站| 日本欧美国产在线视频| 日韩一本色道免费dvd| 免费观看的影片在线观看| 22中文网久久字幕| 国产精品熟女久久久久浪| 日韩av在线免费看完整版不卡| 春色校园在线视频观看| 亚洲精品aⅴ在线观看| 亚洲四区av| 22中文网久久字幕| 黄色视频在线播放观看不卡| 日本与韩国留学比较| 丝袜脚勾引网站| 久久久午夜欧美精品| 国产人妻一区二区三区在| 国产伦在线观看视频一区| 久久 成人 亚洲| 欧美三级亚洲精品| 插阴视频在线观看视频| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 日本爱情动作片www.在线观看| 欧美最新免费一区二区三区| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜 | 欧美zozozo另类| 青春草视频在线免费观看| 高清日韩中文字幕在线| 国产在线男女| 亚洲精品国产色婷婷电影| 久久久久国产网址| 天堂8中文在线网| av天堂中文字幕网| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 国产高潮美女av| 一本久久精品| 国产乱人视频| 国产淫片久久久久久久久| av在线观看视频网站免费| 在线 av 中文字幕| 亚洲欧美日韩无卡精品| 在现免费观看毛片| 永久免费av网站大全| 美女主播在线视频| 韩国高清视频一区二区三区| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 国产在线一区二区三区精| 一边亲一边摸免费视频| 久久久欧美国产精品| 成人特级av手机在线观看| 亚洲性久久影院| 欧美成人一区二区免费高清观看| 边亲边吃奶的免费视频| 国产中年淑女户外野战色| av播播在线观看一区| 亚洲高清免费不卡视频| 国产乱人视频| 中文字幕免费在线视频6| 国产精品无大码| 成年av动漫网址| 国产一区亚洲一区在线观看| 美女高潮的动态| 国产成人免费观看mmmm| av专区在线播放| av又黄又爽大尺度在线免费看| 中国美白少妇内射xxxbb| 亚洲国产精品专区欧美| 免费看不卡的av| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜 | 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 晚上一个人看的免费电影| 蜜臀久久99精品久久宅男| 午夜精品国产一区二区电影| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 成年免费大片在线观看| 日韩精品有码人妻一区| 美女中出高潮动态图| 日韩一区二区视频免费看| av黄色大香蕉| 日本黄色片子视频| 极品少妇高潮喷水抽搐| 少妇精品久久久久久久| 免费看不卡的av| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 国产久久久一区二区三区| 亚洲人成网站高清观看| 亚洲性久久影院| av福利片在线观看| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 少妇被粗大猛烈的视频| 国产一区亚洲一区在线观看| 日日摸夜夜添夜夜爱| 99热全是精品| 亚洲图色成人| 亚洲久久久国产精品| 91狼人影院| 亚洲av日韩在线播放| 成人黄色视频免费在线看| 日韩中文字幕视频在线看片 | 久久精品久久精品一区二区三区| 色婷婷久久久亚洲欧美| 妹子高潮喷水视频| 亚洲第一av免费看| 久久亚洲国产成人精品v| 国产真实伦视频高清在线观看| 亚洲精品久久午夜乱码| 国模一区二区三区四区视频| 婷婷色av中文字幕| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 国产色婷婷99| 老司机影院毛片| 日韩一本色道免费dvd| www.色视频.com| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 最近手机中文字幕大全| 亚洲av不卡在线观看| 国产又色又爽无遮挡免| 欧美最新免费一区二区三区| 亚洲熟女精品中文字幕| 激情五月婷婷亚洲| 99久国产av精品国产电影| 一个人免费看片子| 亚洲精品视频女| 搡老乐熟女国产| 秋霞在线观看毛片| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 在线观看av片永久免费下载| 麻豆国产97在线/欧美| 亚洲成人一二三区av| 高清视频免费观看一区二区| 我的老师免费观看完整版| 一级毛片 在线播放| 卡戴珊不雅视频在线播放| 97精品久久久久久久久久精品| 国产日韩欧美在线精品| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 我要看日韩黄色一级片| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 国产极品天堂在线| 日韩伦理黄色片| 一二三四中文在线观看免费高清| 超碰97精品在线观看| 久久久精品免费免费高清| 日本-黄色视频高清免费观看| 十分钟在线观看高清视频www | 精品少妇久久久久久888优播| 秋霞在线观看毛片| 中文字幕久久专区| 精品人妻视频免费看| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 女性生殖器流出的白浆| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 欧美成人a在线观看| 高清毛片免费看| h日本视频在线播放| 美女国产视频在线观看| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 最近最新中文字幕大全电影3| 黑丝袜美女国产一区| 精品久久久久久电影网| 亚洲人与动物交配视频| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 久久久亚洲精品成人影院| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 最近手机中文字幕大全| tube8黄色片| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 少妇人妻久久综合中文| 国产精品嫩草影院av在线观看| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国产伦理片在线播放av一区| 草草在线视频免费看|