苦參堿納米柔性脂質(zhì)體的制備及包封率測定

趙 寧， 李偉澤，2*

（1.西安醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，陜西西安710021；2.煙臺威特納瑞醫(yī)藥科技有限公司，山東煙臺264000）

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苦參堿納米柔性脂質(zhì)體的制備及包封率測定

趙 寧1， 李偉澤1，2*

（1.西安醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，陜西西安710021；2.煙臺威特納瑞醫(yī)藥科技有限公司，山東煙臺264000）

摘要:目的 制備苦參堿納米柔性脂質(zhì)體并測定其包封率，并與苦參堿普通脂質(zhì)體比較。方法 以1，2-丙二醇為膜柔軟劑，用薄膜分散法制備苦參堿納米柔性脂質(zhì)體，采用激光粒度分布儀和透射電子顯微鏡考察其藥劑學(xué)性質(zhì)，采用葡聚糖凝膠G-50分離脂質(zhì)體，并用高效液相色譜（HPLC）法測定其對苦參堿的包封率。結(jié)果 苦參堿納米柔性脂質(zhì)體的外觀為橢球形或圓球形，粒徑為219.2 nm，表面電位為-48.5 mV，其包封率（80.48±1.82）％是普通脂質(zhì)體（50.79±2.24）％的1.58倍。結(jié)論 薄膜分散法制備的納米柔性脂質(zhì)體與普通脂質(zhì)體相比，對苦參堿具有更好的包封效果，而且穩(wěn)定性較理想，可作為苦參堿的一種新型給藥載體。

關(guān)鍵詞:苦參堿；納米柔性脂質(zhì)體；包封率；薄膜分散法；HPLC

dol:10.3969/j.issn.1001-1528.2016.02.048

苦參堿（Matrine）為喹諾里西啶類生物堿，是豆科植物苦參等的主要藥效成分之一。臨床藥理研究表明，苦參堿具有良好的藥理作用，如抗菌、抗炎、抗病毒、抗纖維化、保肝、抗腫瘤、抗心律失常與鎮(zhèn)痛等多種活性［1］，有著非常廣泛的應(yīng)用前景。目前，對苦參堿的新劑型研究大多集中在抗肝損傷及肝纖維化、抗腫瘤、抗心血管疾病與婦科感染等方面，其中外用新型給藥系統(tǒng)的研究成為熱點。

柔性脂質(zhì)體是一種新型的透皮與透黏膜的給藥載體，是在脂質(zhì)體的雙分子層中加入不同的柔軟劑，使得脂質(zhì)體膜具有較強的柔順性和變形性，其變形能力比普通脂質(zhì)體大5個數(shù)量級，可通過自身大小1/5的小孔，因此可作為不同極性與分子量藥物的載體，具有快速、滲透性強的特點［2-3］，還可在一定程度上提高藥物穩(wěn)定性，因而具有廣闊的開發(fā)潛力。柔性脂質(zhì)體中常用的柔軟劑主要有聚山梨酯類［4］、去氧膽酸鹽［5-6］、乙醇與1，2-丙二醇［7-8］等，其中據(jù)報道［9］，以1，2-丙二醇為柔軟劑的納米柔性脂質(zhì)體具有更佳的穩(wěn)定性和包封率。本實驗建立苦參堿的HPLC含有量測定方法，制備苦參堿納米柔性脂質(zhì)體，并比較其與普通脂質(zhì)體的包封率，可為該制劑的深入研究與進一步應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 RE-2000A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）；FJ-200高速分散勻質(zhì)機（上海標(biāo)本模型廠）；TDL-80-2B低速臺式離心機（上海安亭科學(xué)儀器廠）；FA1004B電子天平（上海越平科學(xué)儀器有限公司）；JEM-1400透射電子顯微鏡（德國西門子公司）；ZEN3600 Zetasizer激光粒度分布儀（英國馬爾文儀器有限公司）；Agi1ent 1260高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；UV-160A紫外分光光度儀（日本島津公司）；KQ5200E超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥 苦參堿標(biāo)準(zhǔn)品（中國食品藥品檢定研究院，批號110805-200508）；苦參堿（純度98％，西安開來生物工程有限公司，批號K121225）；大豆卵磷脂（天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心）；膽固醇（上海山浦化工有限公司）；葡聚糖凝膠G-50（上海藍(lán)季科技有限公司，100～200目）。所用試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 苦參堿納米柔性脂質(zhì)體的制備工藝 精密稱取處方量的卵磷脂、膽固醇與苦參堿，置于250 mL干燥潔凈的茄形瓶中，加入無水乙醇80 mL，溶解均勻后于50℃水浴中減壓蒸發(fā)除掉乙醇，直至在瓶壁上形成均勻的脂質(zhì)膜。取1，2-丙二醇20 mL，溶于處方量的純化水中，混合均勻，得到水相，50℃水浴預(yù)熱后，緩慢滴注于茄形瓶內(nèi)，于旋轉(zhuǎn)條件下與磷脂膜水合60 min，將所得混懸液經(jīng)高速勻質(zhì)5 min后，0.22 μm微孔濾膜循環(huán)2次，即得苦參堿納米柔性脂質(zhì)體混懸液，4℃冰箱保存。同法不加1，2-丙二醇，制備苦參堿普通脂質(zhì)體，備用。

2.2 苦參堿納米柔性脂質(zhì)體的外觀形狀 將苦參堿納米柔性脂質(zhì)體樣品用純化水稀釋后，滴于銅載網(wǎng)上，自然晾干，1.5％磷鎢酸溶液負(fù)染色，自然晾干，置于透射電子顯微鏡下觀察，并拍照記錄。結(jié)果顯示，苦參堿納米柔性脂質(zhì)體外觀形狀為橢圓或圓球形，見圖1。

圖1　苦參堿納米柔性脂質(zhì)體的透射電鏡圖

2.3 苦參堿納米柔性脂質(zhì)體粒徑分布與表面電位 將苦參堿納米柔性脂質(zhì)體及普通脂質(zhì)體樣品分別用純化水稀釋，取1 mL，測定其粒徑與表面Zeta電位。結(jié)果顯示，苦參堿納米柔性脂質(zhì)體的粒徑約為219.2 nm，分布均勻，表面Zeta電位為-48.5 mV，而苦參堿普通脂質(zhì)體的粒徑約為220.8 nm，與前者差異不大，但表面Zeta電位為-8.70 mV，表明前者表面具有較多的凈電荷，故脂質(zhì)體由于微粒之間較大的靜電排斥力而具有較強的物理穩(wěn)定性［10］，見圖2和圖3。

圖2　苦參堿納米柔性脂質(zhì)體的粒徑分布

圖3　苦參堿納米柔性脂質(zhì)體的Z e t a電位分布

2.4 苦參堿體外含有量測定方法的建立

2.4.1 色譜條件 HC-C18色譜柱（5.0 μm，4.6 mm× 150 mm）；流動相為甲醇-0.2％三乙醇胺（65∶35）；檢測波長為220 nm；體積流量為1.0 mL/min；進樣量為20 μL；柱溫25℃。

2.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱取苦參堿標(biāo)準(zhǔn)品適量，無水乙醇溶解，制備成質(zhì)量濃度分別為20、40、60、100、200、400 μg/m L的梯度標(biāo)準(zhǔn)溶液，0.22 μm微孔濾膜過濾，備用。分別精密量取20 μL，注入液相色譜儀，以樣品濃度（C）與峰面積（A）進行線性回歸，得回歸方程A=11.976C+67.993，r=0.999 9，表明苦參堿在20～400 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4.3 精密度試驗 精密吸取200 μg/m L苦參堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液20 μL，在“2.4.1”項色譜條件下測定，重復(fù)進樣5次。結(jié)果，苦參堿峰面積RSD為0.86％（n =5），表明儀器精密度良好。

2.4.4 加樣回收率試驗 精密量取苦參堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液適量，按比例加入空白柔性脂質(zhì)體1.0 mL，用流動相配成高、中、低3種質(zhì)量濃度的苦參堿脂質(zhì)體溶液，每種5份，Triton-100破壞柔性脂質(zhì)體，稀釋定容至刻度，搖勻，離心5 min，吸取上清液，在“2.4.1”項色譜條件下測定。結(jié)果，回收率分別為97.8％、97.5％、98.1％。

2.5 苦參堿納米柔性脂質(zhì)體的包封率測定

2.5.1 柔性脂質(zhì)體在SePhadex G-50凝膠柱中的洗脫曲線的制備 稱取SePhadex G-50 5 g，蒸餾水溶脹，倒去上層清液與顆粒后裝柱，排除氣泡，平衡后備用。精密吸取空白脂質(zhì)體0.4 m L，經(jīng)SePhadex G-50柱，蒸餾水洗脫，使凝膠柱達(dá)到平衡，再精密吸取苦參堿柔性脂質(zhì)體0.4 mL，上柱，蒸餾水洗脫，體積流量1 mL/min，逐管收集，每管2 mL，收集30管，并做標(biāo)記。然后，分別加入消解液（含12％ Triton X-100的甲醇溶液）至4 mL，搖勻，精密吸取1 mL，過濾，在“2.4.1”項色譜條件下測定。以管號（N）為橫坐標(biāo)、峰面積（A）為縱坐標(biāo)作洗脫曲線，見圖4。

注:前者為柔性脂質(zhì)體，后者為游離藥物圖4　Se p h a d e x G-5 0凝膠柱中的洗脫曲線

2.5.2 苦參堿納米柔性脂質(zhì)體的包封率測定［11-12］精密吸取苦參堿納米柔性脂質(zhì)體0.40 m L，上SePhadex G-50柱，蒸餾水洗脫，體積流量1 mL/min，50 mL量瓶收集有乳光的部分，加入等體積脂質(zhì)體消解液至刻度，搖勻，充分消解后精密吸取1 mL，過濾，在“2.4.1”項色譜條件下測定苦參堿含有量，連續(xù)測定3批，結(jié)果見表1。

表1　苦參堿納米柔性脂質(zhì)體包封率

包封率計算公式為包封率=（W包裹/W總量）×100％，其中W總量為實際投料量，W包裹為脂質(zhì)體包封藥量。

2.5.3 苦參堿普通脂質(zhì)體的包封率測定 精密吸取苦參堿普通柔性脂質(zhì)體樣品0.40 mL，按“2.5.2”項下方法測定其包封率，連續(xù)3批，結(jié)果見表2。

表2　苦參堿普通脂質(zhì)體包封率

藥物包封率是脂質(zhì)體給藥體系安全、有效與實現(xiàn)靶向治療的重要基礎(chǔ)，故其是脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)中的重要設(shè)計參數(shù)。結(jié)果表明，本實驗制備的苦參堿納米柔性脂質(zhì)體包封率（80.48±1.82）％為其普通脂質(zhì)體（50.79±2.24）％的1.58倍，可見后者對藥物的包封率明顯高于前者（P＜0.05），其原因可能是由于1，2-丙二醇為一種溶解能力較強、范圍較廣的雙親性溶劑，可滲入到脂質(zhì)體磷脂膜雙分子層中，降低層內(nèi)環(huán)境的疏水性，同時在內(nèi)水相，它和水可以形成混合溶劑，從而增加對藥物的溶解能力。因此，苦參堿既可在水相分布，也可在油相分布，使得納米柔性脂質(zhì)體具有更好的包封效果，為進一步的應(yīng)用研究奠定了基礎(chǔ)。

3 討論

納米柔性脂質(zhì)體是近年來一種新型外用給藥體系，可以促進包封與未包封的藥物通過皮膚或黏膜吸收［13］。本實驗以1，2-丙二醇為柔軟劑，制備得到苦參堿納米柔性脂質(zhì)體，其外觀為橢圓形或圓球形，粒徑為219.2 nm，分布均勻，對苦參堿的包封率為（80.48±1.82）％，表明1，2-丙二醇的加入提高了脂質(zhì)體對藥物的包封率，但具體機理還有待作進一步研究。

表面Zeta電位為-48.5 mV，一般當(dāng)其絕對值大于30 mV時，由于納米粒子表面富有凈電荷，故彼此間存在較強的靜電排斥力，會進一步提高納米制劑的物理穩(wěn)定性［14-15］。本實驗為苦參堿的透皮與透黏膜給藥提供了一種新型、高效的給藥載體，拓寬了其臨床應(yīng)用的技術(shù)手段，將促進苦參堿在外用給藥領(lǐng)域的發(fā)展，因而具有廣闊的應(yīng)用前景。

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*通信作者:李偉澤（1979—），男，博士，副教授，研究方向為中藥新劑型與新技術(shù)。Te1: 18629409280，E-mai1: weize1i@126.com

作者簡介:趙 寧（1985—），女，碩士，講師，研究方向為中藥新劑型與新技術(shù)。Te1: 18629409280，E-mai1: zhaoning-haPPy@ 163.com

基金項目:國家自然科學(xué)基金項目（81303231）；陜西省科技廳項目（2014JQ4145）

收稿日期:2014-12-01

中圖分類號:R944

文獻標(biāo)志碼:B

文章編號:1001-1528（2016）02-0444-03