類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎血清植物性食物過敏原特異性IgG和IgE檢測

譚　寧，賀守第，倪慧婕，楊平常，劉志剛，黃勝光，吉瓊梅

(深圳市第六人民醫(yī)院中醫(yī)風(fēng)濕科，深圳 518060)

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種由多種因素誘發(fā)的常見、多發(fā)的自身免疫性疾病，病因涉及遺傳、感染、精神、神經(jīng)、內(nèi)分泌、外界環(huán)境刺激等多個方面[1]。研究發(fā)現(xiàn)，食物過敏與RA發(fā)病具有一定相關(guān)性，Haugen等[2]研究表明，接近1/3的包括RA在內(nèi)的自身免疫性疾病患者的病情與食物過敏有密切聯(lián)系。目前國內(nèi)關(guān)于RA食物過敏因素的臨床研究報道甚少，因此本研究旨在觀察臨床RA患者血清多種食物過敏原IgG、IgE水平，研究其與食物過敏的相關(guān)性。

資料與方法

一般資料

50例處于疾病活動期的RA患者均來自2013年9月至2014年5月深圳市第六人民醫(yī)院中醫(yī)風(fēng)濕科住院部，其中男12例，女38例；平均年齡52歲。疾病診斷均符合2010年ACR/EULARRA診斷標準[3]，活動期評估按照疾病活動(disease activity score，DSA)28評分：根據(jù)人體28個關(guān)節(jié)壓痛指數(shù)、腫脹計數(shù)、C反應(yīng)蛋白(C-reactive protein,CRP)水平以及患者自身情況評估，其中壓痛或者有腫脹的關(guān)節(jié)1分，壓痛同時有腫脹的關(guān)節(jié)2分，然后將所有數(shù)據(jù)加起來，代入公式計算，DAS28評分將疾病活動分為四級：緩解(DSA28<2.6)、輕度活動(2.6≤DSA28<3.2)、中度活動(3.2≤DSA28<5.1)和重度活動(DSA28≥5.1)。將DSA28≥2.6疾病活動患者納入該研究，45例正常人來自深圳市第六人民醫(yī)院體檢科，其中男14例，女31例；平均年齡45歲。

材料

4種植物性食物過敏原粗蛋白(花生、大豆、榛子、小麥)由深圳大學(xué)醫(yī)學(xué)院過敏免疫變態(tài)反應(yīng)室提供，HRP-山羊抗人IgG(Santa cruz)，HRP-鼠抗人IgE(Santa cruz)，酶標分析儀(Thermo Fisher)，TMB(阿拉丁公司)。

方法

空腹靜脈抽血，3 500 r/min離心10 min，分離血清，-80 ℃保存，采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)間接法測量血清8種食物過敏原OD值。

血清食物過敏原IgG檢測：以花生、大豆、小麥、榛子等4種植物性食物過敏原粗蛋白5 μg/ml(稀釋于碳酸鹽)37 ℃包被3 h，用5%的BSA/PBS于4 ℃封閉過夜，以1%的BSA/PBST稀釋血清(1∶200)，37 ℃孵育2 h，PBST洗板5次，加入二抗HRP-山羊抗人IgG(1∶5 000稀釋于PBST)，37 ℃孵育2 h，PBST洗板5次，經(jīng)TMB顯色后H2SO4終止反應(yīng)，酶標儀讀取A450OD值。

血清食物過敏原IgE檢測：以花生、大豆、小麥、榛子等4種食物過敏原粗蛋白5 μg/ml(稀釋于碳酸鹽)37 ℃包被3 h，用1%的BSA/PBS于4 ℃封閉過夜，以1%的BSA/PBST稀釋血清(1∶10)，37 ℃孵育2 h，PBST洗板3次，加入二抗HRP-鼠抗人IgE(1∶1 500稀釋于PBST)，37℃孵育2 h，PBST洗板3次，TMB顯色后H2SO4終止反應(yīng)，酶標儀讀取A450OD值。

統(tǒng)計學(xué)處理

結(jié)　　果

RA組與正常組食物過敏原特異性IgG比較

RA組與正常組血清花生、大豆特異性IgG比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，血清榛子、小麥特異性IgG比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)(表1)。

RA組與正常組食物過敏原特異性IgE比較

RA組與正常組血清花生、大豆、榛子、小麥特異性IgE比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)(表2)。

老年性類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎組與非老年性類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎組食物過敏原比較

老年性(≥60歲)與非老年性(<60歲)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清花生、大豆、榛子、小麥特異性IgG、IgE比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)(表3、4)。

分組例數(shù)食物過敏原花生大豆榛子小麥正常組451.08±0.351.07±0.321.17±0.411.31±0.39RA組501.31±0.36*1.22±0.33*1.12±0.391.24±0.38

*與正常組相比，P<0.01

分組例數(shù)食物過敏原花生大豆榛子小麥正常組450.13±0.050.11±0.050.11±0.060.12±0.04RA組500.12±0.050.10±0.030.10±0.060.11±0.05

分組例數(shù)食物過敏原花生大豆榛子小麥NERA組381.34±0.341.22±0.321.14±0.401.26±0.40ERA組121.20±0.381.20±0.341.07±0.331.17±0.29

NERA: 非老年性類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎；ERA:老年性類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎

分組例數(shù)食物過敏原花生大豆榛子小麥NERA組380.13±0.050.09±0.020.11±0.050.12±0.04ERA組120.12±0.040.10±0.030.11±0.040.12±0.03

NERA: 非老年性類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎；ERA:老年性類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎

討　　論

近年來，隨著社會發(fā)展，食物過敏成為人們?nèi)找骊P(guān)注的問題。研究報道，食物過敏能誘發(fā)或加重自身免疫性疾病，如復(fù)發(fā)性風(fēng)濕病[4]、炎癥性腸病[5]、幼年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎[6]。早在1979年和1986年，Skoldstam等[7- 8]通過試驗證實飲食控制可以減輕RA患者疾病活動度和癥狀。2006年，Karatay等[9]通過食物飲食結(jié)構(gòu)控制對比20例食物過敏陽性RA患者和食物過敏陰性RA患者發(fā)病情況，發(fā)現(xiàn)個人食物膳食能影響RA疾病活動度。2010年Liden等[10]報道33%RA患者的病情與食物過敏有密切聯(lián)系，攝入某些食物過敏原，如小麥、玉米、牛奶、牛肉等可加重RA病情，食物過敏可能是RA疾病的影響因素。

食物過敏主要包括IgE介導(dǎo)的速發(fā)型過敏反應(yīng)和IgG介導(dǎo)的遲發(fā)型過敏反應(yīng)，本研究檢測了50例RA患者血清花生、大豆、榛子、小麥特異性IgG、IgE，結(jié)果發(fā)現(xiàn)RA患者血清花生、大豆IgG明顯高于正常人(P<0.01)，而特異性IgE無明顯差異。又通過比較老年、青年型RA 4種食物過敏原特異性IgG、IgE，發(fā)現(xiàn)年齡間無明顯差異。根據(jù)試驗結(jié)果，可知食物不耐受與RA有一定的相關(guān)性，本文檢測到花生、大豆特異性IgG與RA相關(guān)性較大。目前廣泛認可的食物不耐受機制是德國科學(xué)家Fooker博士闡述的食物進入腸道，由于腸道缺乏某種酶類或者功能紊亂產(chǎn)生食物特異性的IgG抗體，IgG抗體和食物分子結(jié)合形成免疫復(fù)合物進入血液循環(huán)而引起的免疫反應(yīng)。RA也屬于一種以免疫復(fù)合物沉積為特征的自身免疫性疾病。猜測食物不耐受誘發(fā)RA的機制可能是產(chǎn)生的食物特異性IgG免疫復(fù)合物與RA免疫復(fù)合物存在某種相似性，能夠沉積于關(guān)節(jié)，誘發(fā)RA疾病產(chǎn)生；或者是花生、大豆中含有某種特征性抗原決定簇與RA患者體內(nèi)免疫復(fù)合物表面抗原決定簇相似，被人體免疫系統(tǒng)識別，引起自身免疫性疾病。綜上，到食物過敏與RA疾病具有相關(guān)性，將來可進一步深入研究RA患者體內(nèi)食物相關(guān)性免疫復(fù)合物的種類和含量，為RA的預(yù)防和治療提供新的方法。

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