酸棗仁及其偽品滇棗仁的鑒別研究

北京市平谷區(qū)食品藥品安全監(jiān)控中心（101200）劉紅玉 張悅

酸棗仁為鼠李科植物酸棗ZiziphusjujubaMill. var.spinosa(Bunge)Hu ex H. F.Chou的干燥成熟種子[1]。味甘、酸，平，歸肝、膽、心經(jīng)。臨床主要用于寧心安神，養(yǎng)心補肝，斂汗，生津。用于治療虛煩不眠，驚悸多夢，體虛多汗及津傷口渴等。滇棗仁，又稱為理棗仁、緬棗仁，為同屬植物滇刺棗Ziziphus mauritianaLam.的干燥成熟的種子，是云南的地方習(xí)慣用藥，但與酸棗仁在性狀、成分及功效等方面均有差異。近年來，由于資源緊缺，市場上用滇棗仁冒充酸棗仁出售的現(xiàn)象日益增多，因此進行二者的鑒別研究非常重要。本文對近年來酸棗仁及滇棗仁鑒別的相關(guān)文獻進行梳理，為日常工作中鑒別酸棗仁與滇棗仁提供依據(jù)。

1 性狀鑒別

酸棗仁表面為紫紅色或紫褐色，而滇棗仁為棕黃色或棕色，色澤有差異。二者均呈扁圓形，一面隆起，另一面較平坦，但酸棗仁中間可見一條隆起的縱線紋，滇棗仁無此特征；二者表面平滑有光澤，有時有裂紋，質(zhì)堅硬，破開種皮后有白色種仁一枚，富油性。氣微，味淡[2]。酸棗仁與滇棗仁的表面特征略有差異，但差異不明顯。此法可作為鑒別二者的輔助方法，但本法只能用于外觀未破損的完整藥材，對酸棗仁粉末或者以酸棗仁入藥的中成藥不能鑒別，具有局限性。

2 顯微鑒別

取粉末，置顯微鏡下觀察，均具有種皮柵狀細胞、草酸鈣簇晶及較少的石細胞，二者并無明顯差異。觀察其組織結(jié)構(gòu)可以發(fā)現(xiàn)，酸棗仁的種皮柵狀細胞較長，子葉表皮細胞中含1～2個細小草酸鈣簇晶，營養(yǎng)層較寬。而滇棗仁的種皮柵狀細胞較短，子葉表皮細胞中不含細小草酸鈣簇晶，營養(yǎng)層較窄[3]。與性狀鑒別相同，顯微鑒別差異并不顯著，只適用于完整藥材，不適用于酸棗仁粉末及以酸棗仁入藥的中成藥。

3 理化鑒別

研究表明[4]，取粉末，甲醇提取，滴于濾紙，加氨水后置紫外燈光（365nm）下觀察，酸棗仁呈天藍色熒光，滇棗仁呈黃綠色熒光，可以將二者區(qū)別。此外，酸棗仁與滇棗仁對不同化學(xué)試劑，呈現(xiàn)不同顏色，可以用于二者鑒別[5]。例如取粉末加水微沸，過濾，取濾液用正丁醇萃取，萃取液置蒸發(fā)皿中蒸干，加冰醋酸，溶液傾入試管，加濃硫酸，二者均產(chǎn)生淡紅色環(huán)，但酸棗仁溶液上層呈淡棕黃色，而滇棗仁呈翠綠色。二者粉末用乙醚振搖提取后揮盡乙醚，殘渣加冰醋酸及濃硫酸，酸棗仁呈棕黃色，滇棗仁呈紫紅色。也可以取粉末，加乙醇加熱回流，濾液加入香草醛無水乙醇溶液，再加72%硫酸，酸棗仁溶液顯渾濁的黃棕色，久置呈灰棕黃色；滇棗仁溶液顯澄清的黃棕色，久置呈紅棕色。此方法操作簡單快速，結(jié)果明確，但是否適用于檢驗以酸棗仁入藥的中成藥還需進一步的實驗驗證，同時對于鑒別酸棗仁中摻入滇棗仁的摻偽品具有一定的難度。

4 薄層色譜鑒別

將酸棗仁與滇棗仁粉末的甲醇提取液作為供試品溶液進行薄層色譜鑒別。酸棗仁具有10個斑點，滇棗仁具有9個斑點，其中有8個斑點位置相同[6][7]。雖然二者的薄層色譜略有差異，但點樣量、顯色劑等因素會對薄層色譜的結(jié)果產(chǎn)生影響，故二者的鑒別需要進一步實驗驗證。除了采用薄層法對二者進行定性鑒別，也有人采用薄層掃描法對酸棗仁與滇棗仁中酸棗仁皂苷A、B進行定量分析，結(jié)果表明：酸棗仁中酸棗仁皂苷A、B的含量明顯高于滇棗仁[8]。此方法不僅可以用于鑒別酸棗仁藥材與飲片，也可以用于含有酸棗仁的中成藥。

5 紫外光譜鑒別

取二者粉末的無水乙醇提取液，用紫外分光光度法測量其最大吸收，可以發(fā)現(xiàn)，酸棗仁的最大吸收峰在212nm，226nm，而滇棗仁的最大吸收峰211nm[6]。此法操作簡單，結(jié)果明確，可以鑒別酸棗仁與滇棗仁，但對于酸棗仁中摻入滇棗仁的摻偽品，無法鑒別。有學(xué)者[9]對二者粉末的甲醇提取液進行紫外導(dǎo)數(shù)光譜測定，酸棗仁和滇棗仁的零階導(dǎo)數(shù)光譜雖然在327.0nm和272±1nm處各有二吸收峰，但二者各峰的吸收強度差別較大，且酸棗仁與滇棗仁的二階導(dǎo)數(shù)光譜在200～400nm范圍內(nèi)均無重疊，且信號尖銳，分辨率高，可以將二者鑒別開。

6 紅外光譜鑒別

取二者粉末，加石油醚脫脂，于60℃干燥至恒重，溴化鉀壓片，分別測定其紅外光譜，結(jié)果表明，酸棗仁與滇棗仁的紅外光譜在1000～3500cm-1范圍內(nèi)無顯著性差異[8]。

李彥文等取酸棗仁與滇棗仁的粉末，不脫脂直接進行溴化鉀壓片，測定其紅外光譜，結(jié)果表明，在1800～960cm-1間，二者峰數(shù)、峰位、峰形和峰強基本一致，在1651cm-1、1545cm-1、1454cm-1、1240cm-1等附近有強吸收。另外酸棗仁在1745cm-1與1160cm-1附近則出現(xiàn)油脂峰；滇棗仁在1710cm-1附近出現(xiàn)羧酸峰，二者均由CO振動產(chǎn)生。說明酸棗仁富含油脂成分，滇棗仁富含酸類成分，可以鑒別二者。將二者的圖譜做二階導(dǎo)數(shù)處理，發(fā)現(xiàn)二者的峰數(shù)、峰強、峰谷等均有明顯差異，也可以鑒別二者的不同。

7 HPLC-ELSD鑒別

采用蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)，通過多成分的含量測定及HPLC指紋圖譜的進行分析，對16批次酸棗仁、10批次的滇棗仁及1批次的摻偽品進行測定，研究結(jié)果表明，二者均可以檢測到斯皮諾素、酸棗仁皂苷A、酸棗仁皂苷B、白樺脂酸，但酸棗仁中酸棗仁皂苷A的含量約為0.3257～1.6724mg/g，酸棗仁皂苷B約為0.1486～0.2985mg/g；滇棗仁中酸棗仁皂苷A、B的含量極低，有些樣品中甚至檢測不到；而二者摻偽品含酸棗仁皂苷A為0.0940mg/g，酸棗仁皂苷B為0.1010mg/g。因此，酸棗仁皂苷A、B可以作為鑒別二者的依據(jù)。同時二者的指紋圖譜中，酸棗仁具有14個共有色譜峰，滇棗仁比酸棗仁多出3號峰及16號峰，這兩個特征峰也可以用于鑒別酸棗仁與滇棗仁，但仍需要進一步實驗鑒定其結(jié)構(gòu)。

8 高效毛細管電泳法鑒別

通過酸棗仁及滇棗仁的蛋白質(zhì)高效毛細管電泳譜圖可知，二者的酸性提取液、堿性提取液及中性提取液中，酸棗仁樣品與滇棗仁樣品有不同的強吸收峰，其圖譜存在顯著差異，可以用于鑒別二者。用高效毛細管電泳（HPCE）法對酸棗仁及滇棗仁中有效成分酸棗仁皂苷B進行含量測定，測定結(jié)果表明：兩者的酸棗仁皂苷B含量接近。HPCE法分離效率高，分析速度快，樣品和試劑用量少，易于實現(xiàn)自動化。

9 UPLC-QTOF/MS鑒別

采用超高效液相色譜-飛行時間質(zhì)譜法(UPLC-QTOF/MS法)鑒別酸棗仁與滇棗仁，此方法找出了酸棗仁與滇棗仁的專屬性特征離子峰，與對照藥材相結(jié)合，可以用于二者的鑒別，建立了酸棗仁和滇棗仁的離子鑒別方法。超高效液相色譜法分離能力高、靈敏度高、分析周期短，對二者的真?zhèn)舞b別及摻偽品的區(qū)分有一定優(yōu)勢。

10 DNA指紋圖譜鑒別

劉萍等人根據(jù)中藥材的遺傳多態(tài)性，運用隨機擴增DNA多態(tài)性(RAPD)分析技術(shù)，對酸棗仁及其易混淆品、偽品進行分析比較。DNA指紋圖譜可以看出，由于酸棗仁與滇棗仁來自同屬植物，遺傳基因具有一定的相似性，因此二者具有部分共同的譜帶，但同時二者又有各自的特征性譜帶，可以區(qū)別酸棗仁與滇棗仁，對于二者的摻偽品也可以進行鑒別。

從上可知，酸棗仁與滇棗仁的性狀及組織結(jié)構(gòu)存在差異，可以作為其鑒別方法，但只適用于外觀完整的中藥材，不能適用于藥材粉末以及以酸棗仁入藥的中成藥；理化鑒別方法較多，易于操作，結(jié)果明確，可以與其他方法一起聯(lián)合應(yīng)用，作為鑒別的輔助方法，但對于成分較為復(fù)雜的中成藥，中成藥中含有的其他成分可能會影響理化鑒別的結(jié)果；而薄層法用于定性鑒別時，由于受點樣量等因素的影響，作為二者的鑒別依據(jù)需要進一步實驗驗證；紫外光譜及紅外光譜均為定性鑒別，通過酸棗仁與滇棗仁最大吸收峰的差異或其光譜中各峰數(shù)、峰位及峰強的差異鑒別酸棗仁與滇棗仁，而酸棗仁與滇棗仁在未進行脫脂處理的情況下，可以采用紅外光譜或其二階導(dǎo)數(shù)光譜進行鑒別，但石油醚脫脂后的光譜無顯著差異。

HPLC-ELSD法測定了二者斯皮諾素、酸棗仁皂苷A、酸棗仁皂苷B、白樺脂酸的含量，結(jié)果表明，酸棗仁、滇棗仁及二者的摻偽品中的酸棗仁皂苷A、B含量不同；薄層色譜掃描法表明酸棗仁中酸棗仁皂苷A、B的含量明顯高于滇棗仁；高效毛細管電泳法認為二者的酸棗仁皂苷B含量接近。這三種方法不僅可以應(yīng)用于中藥材及飲片，也可以用于含酸棗仁的中成藥，2015版《中國藥典》中采用HPLC-ELSD法測定酸棗仁中酸棗仁皂苷A的含量[1]。

DNA圖譜法是根據(jù)中藥材的遺傳多態(tài)性，運用隨機擴DNA多態(tài)性(RAPD)分析技術(shù)鑒別酸棗仁與滇棗仁，靈敏性高，結(jié)果明確。但由于RAPD分析技術(shù)應(yīng)用于中藥仍具有一定的局限性，且對于不同生長年限造成的藥材差異尚無法進行鑒別，還需要進一步的研究。

以上的檢驗方法各有利弊，日常工作中可以將酸棗仁的各項鑒別方法相結(jié)合，定性定量方法相結(jié)合，以更好發(fā)揮各鑒別方法的優(yōu)勢。