鄂西北地區(qū)三枝九葉草藥用價值考察

王　娟　　李洪亮袁2　　汪選斌袁2　　歐陽露袁2.湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬人民醫(yī)院中藥藥理實驗室，湖北十堰　442000；2.湖北醫(yī)藥學(xué)院藥學(xué)院，湖北十堰　442000

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鄂西北地區(qū)三枝九葉草藥用價值考察

王娟1李洪亮1袁2汪選斌1袁2歐陽露1袁2
1.湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬人民醫(yī)院中藥藥理實驗室，湖北十堰442000；2.湖北醫(yī)藥學(xué)院藥學(xué)院，湖北十堰442000

[摘要]目的考察鄂西北地區(qū)淫羊藿屬植物三枝九葉草藥用價值。方法以淫羊藿苷和總黃酮含量作為考察指標，采用高效液相色譜法和紫外-可見分光光度法進行檢測。采用ODSPhenomenex GeminiC18柱（250mm×4.6mm，5μm），以乙腈-水（30∶70）為流動相，檢測波長：270 nm，流速：1.0mL/min，柱溫：30℃。結(jié)果按干燥品計算淫羊藿苷含量和總黃酮含量分別為0.51%和5.05%，均達到《中國藥典》標準。結(jié)論鄂西北地區(qū)淫羊藿屬植物三枝九葉草具有較高藥用價值。

[關(guān)鍵詞]三枝九葉草曰鄂西北地區(qū)曰淫羊藿苷曰總黃酮

三枝九葉草（Epimedium sagittatum）屬小檗科淫羊藿屬多年生草本植物?！吨袊参镏尽酚涊d其有補精強壯，祛風(fēng)濕，治陽痿、關(guān)節(jié)風(fēng)濕痛等癥的功效。淫羊藿（Herbaepimedii）是一種傳統(tǒng)的補益中藥。性味辛、甘、溫，歸肝、腎經(jīng)，具有補腎陽、強筋骨、祛風(fēng)濕的功能?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究結(jié)果證實，淫羊藿具有多種重要的藥理作用：淫羊藿的有效成分具有擬雌激素樣作用，能增加骨密度；淫羊藿對心腦血管方面有降血壓、降血脂的作用；可以影響腫瘤細胞周期調(diào)控原癌基因和抑癌基因并誘導(dǎo)凋亡；可以直接增加免疫細胞的數(shù)量，提高免疫細胞淋巴因子的分泌，增強免疫力；淫羊藿還可以改善記憶力，影響神經(jīng)系統(tǒng)等[1-11]。

淫羊藿的化學(xué)成分包括黃酮類、木脂素類、酚苷類、生物堿類、色酮類、菲、蒽醌、鞣質(zhì)、倍半萜、甾醇等上百種成分。其中淫羊藿總黃酮有抗骨質(zhì)疏松、促進免疫調(diào)節(jié)、改善心臟血液流變性、抗心肌缺氧、促進雄性生殖系統(tǒng)和生殖內(nèi)分泌功能、抗炎、抗腫瘤、抗衰老等作用，其是淫羊藿中的主要有效成分。而淫羊藿苷則為黃酮類的代表性成分，具有降低動脈粥樣硬化患者血栓形成概率及調(diào)血脂、促進雌性激素體內(nèi)生物合成、保護受損神經(jīng)元及恢復(fù)記憶力等藥理活性[12-15]。因此本課題以淫羊藿苷和淫羊藿總黃酮的含量作為指標考察鄂西北地區(qū)三枝九葉草的藥用價值，為該地區(qū)淫羊藿藥用植物資源的開發(fā)和保護提供參考。

1　儀器與試藥

1.1儀器

高效液相色譜儀（LC-20AD泵、SIL-20A自動進樣器、SPD-M20A紫外檢測器、LC-Solution色譜工作站）（日本島津公司）；KQ-500PV型數(shù)控超聲波清洗器（蘇州博德超聲設(shè)備有限公司）；TU-1901型雙光束紫外可見光光度儀（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；FA2004型電子天平（上海精科公司）。

1.2試藥

淫羊藿苷對照品（中國藥品生物制品檢定所；批號：110737-200415）。

三枝九葉草樣品于2015年4月采集于十堰市郊的牛頭山，經(jīng)湖北醫(yī)藥學(xué)院藥學(xué)院中藥藥理教研室張曉燕副教授鑒定為小檗科淫羊藿屬植物Epimedium sagittatum。樣品晾干打粉，過4號篩備用。

甲醇（分析純），乙腈（色譜純），水為超純水。

2　方法與結(jié)果

2.1淫羊藿苷的含量測定

2.1.1色譜條件

色譜柱：ODSPhenomenex GeminiC18柱（250mm× 4.6mm，5μm）。流動相：乙腈-水（30∶70）；流速：1.0mL/min；檢測波長：270 nm；進樣量：10μL，柱溫：30℃。色譜圖見圖1。

圖1　各溶液的H P L C色譜圖

2.1.2溶液的配制

2.1.2.1淫羊藿苷對照品溶液的配制取淫羊藿苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每毫升含0.1mg的淫羊藿苷溶液，搖勻即得。

2.1.2.2三枝九葉草供試品溶液的配制取三枝九葉草樣品粉末約0.2 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入50%乙醇20mL，精密稱定，超聲1 h，放冷至室溫，以50%乙醇補足失重，搖勻濾過，續(xù)濾液用0.45μm微孔濾膜濾過，即得。

2.1.3線性關(guān)系考察

分別精密吸取“2.1.2.1”項下制備的淫羊藿苷對照品溶液1.0、2.0、5.0、8.0、10.0 mL置于10 mL容量瓶中，甲醇定容搖勻，制得濃度為10.0、20.0、50.0、80.0、100.0μg/mL的對照品系列溶液，0.45μm微孔濾膜濾過，分別精密吸取10μL，注入液相色譜儀，以質(zhì)量濃度對峰面積進行線性回歸，得線性范圍和回歸方程，淫羊藿苷進樣量在0.1～1.0μg之間線性關(guān)系良好。回歸方程Y=4.776957×10-8X-1.254898×10-4（r= 0.9989）。

2.1.4精密度試驗

取“2.1.2.1”項下制備的淫羊藿苷對照品溶液，按照“2.1.1”項下色譜條件下進樣10μL，重復(fù)6次，以淫羊藿苷峰面積計算RSD為0.22%，表明儀器精密度良好。

2.1.5重復(fù)性試驗

取樣品6份，按照“2.1.2.2”項下方法制備6份供試品溶液，按照“2.1.1”項下色譜條件進樣10μL，測定淫羊藿苷的峰面積，RSD為1.58%，說明該法重復(fù)性好。

2.1.6穩(wěn)定性試驗

取同一樣品溶液，分別在0、1、2、4、8、12 h進樣10μL，按照“2.1”項下色譜條件測定峰面積，計算淫羊藿苷的含量，RSD為0.34%，說明樣品供試品溶液12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.1.7加樣回收率試驗

取已知淫羊藿苷含量的樣品粉末6份，精密稱定，置100mL容量瓶中，精密加入淫羊藿苷對照品溶液適量，按照“2.1.2.2”項下方法制備樣品溶液，按照“2.1.1”項下色譜條件測定含量，求得淫羊藿苷的回收率，結(jié)果見表1。

表1　加樣回收率試驗結(jié)果（n=6）

2.1.8樣品含量測定

精密稱取樣品3份，按照“2.1.2.2”項下方法制備樣品溶液，按照“2.1.1”項下色譜條件測定含量，結(jié)果見表2。

取樣量（g）淫羊藿苷量（mg）百分含量（%）平均百分含量（%）RSD （%）0.2516 0.2269 0.2401 1.18 1.16 1.25 0.47 0.51 0.52 0.51　0.03

2.2總黃酮含量測定

分別精密量取“2.1.2.2”項下供試品溶液0.5 mL 3份，分別置于50mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另精密量取“2.1.2.1”項下淫羊藿苷對照品溶液1mL置10mL容量瓶中，加甲醇制成每毫升含10μg的淫羊藿苷溶液作為對照品溶液。分別取供試品溶液和對照品溶液，以相應(yīng)試劑為空白，照紫外-可見分光光度法在270 nm波長處測定吸光度，結(jié)果見表3。

表3　總黃酮含量測定結(jié)果（n=3）

3　討論

淫羊藿始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，已有2000多年的歷史，為使用最早的滋補類中藥之一，并且使用十分廣泛，是《中國藥典》收載來源最多的植物中藥材之一。淫羊藿由于其多種藥理活性一直受到國內(nèi)外學(xué)者的高度重視，是多年來重點研究的藥用植物和最具開發(fā)潛力的中藥之一。淫羊藿的生長習(xí)性為海拔650～3500米處林下、溝邊灌叢中或山坡陰濕處。鄂西北地處鄂、豫、陜、渝四?。ㄊ校┙唤?，漢江中游的秦巴山區(qū)腹地，東有武當山，南有以“華中屋脊”之稱的神農(nóng)架原始大森林，具有得天獨厚的地理優(yōu)勢：地處亞熱帶季風(fēng)區(qū)，氣侯濕潤溫和，雨量充沛，四季分明，日照充足，無霜期長，這種特殊的地理位置及氣侯條件特別適宜于三枝九葉草的生長，因此三枝九葉草資源十分豐富。

2015年版《中國藥典》規(guī)定，藥用淫羊藿中淫羊藿苷含量不低于0.5%；總黃酮含量不低于5.0%[16]。本實驗結(jié)果顯示，鄂西北地區(qū)淫羊藿屬植物三枝九葉草的淫羊藿苷與總黃體酮含量分別為0.51%和5.05%，均達到《中國藥典》規(guī)定，說明鄂西北地區(qū)的三枝九葉草的有效成分含量達到藥用標準，具有較高的藥用價值。

目前，我國淫羊藿藥材幾乎全部來源于野生資源，各產(chǎn)區(qū)品種質(zhì)量參差不齊，嚴重影響療效。隨著市場需求的不斷增長，長期依賴于野生資源使其儲量日益減少，因此，對于淫羊藿藥用植物資源的開發(fā)和保護迫在眉睫。鄂西北地區(qū)淫羊藿屬植物三枝九葉草資源十分豐富，本實驗的考察結(jié)果為實現(xiàn)淫羊藿的人工馴化栽培和規(guī)范化種植基地建設(shè)奠定了基礎(chǔ)，對增強本地經(jīng)濟發(fā)展、促進中草藥資源的可持續(xù)利用具有重要意義。

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M edicinal valuable assessment of Epimedium sagittatum in northwest Hubei Province

WANG Juan1LIHongliang1,2WANG Xuanbin1,2OUYANG Lu1,2
1.Laboratory of Chinese Herbal Pharmacology,the Affiliated Renmin Hospital Hubei Univeristy of Medicine,Hubei Province,Shiyan 442000,China;2.School of Pharmacy,Hubei Univeristy of Medicine,Hubei Province,Shiyan 442000,China

[Abstract]Objective To assess the medicinal value of wild Epimedium sagittatum in northwest Hubei Province. M ethods High performance liquid chromatography and UV-Vis pectrophotometer were conducted with contents of icariin and total flavonoids as determining indexes.HPLC was conducted at a column temperature of 30℃with a column of ODS Phenomenex Gemini C18(250 mm×4.6 mm,5μm)and acetonitrile-water(30∶70,V/V)as the mobile phase,with a wave length at 270 nm and a flow speed at 1.0mL/min.Results Content of icariin and total flavonoids in dried Epimedium sagittatum was 0.51%and 5.05%respcetively,which reached the criteria of the Chinese Pharmacopeia.Conclusion Wild Epimedium sagittatum in northwest Hubei Province has highmedical value.

[Key words]Epimedium sagittatum;Northwest Hubei Province;Icariin;Total flavonoids

收稿日期：（2015-09-23本文編輯：趙魯楓）

[通訊作者]歐陽露（1972.10-），女，碩士，副教授，副主任藥師；研究方向：中藥新制劑研發(fā)。

[基金項目]湖北省教育廳項目（B2015487）；湖北省2011協(xié)同創(chuàng)新中心基金（4）；湖北省高等學(xué)校優(yōu)秀中青年科技創(chuàng)新團隊計劃項目（T201510）；湖北省自然科學(xué)基金面上項目（2014CFB642）；湖北醫(yī)藥學(xué)院優(yōu)秀中青年團隊項目（2014C XG03）。

[中圖分類號]R927.2

[文獻標識碼]A

[文章編號]1673-7210（2016）01（a）-0046-03