柿葉黃酮對腎性高血壓大鼠血管緊張素、醛固酮、降鈣素基因相關(guān)肽的影響

鄧海英， 賴為國（欽州市第二人民醫(yī)院藥劑科，廣西欽州535099）

?

柿葉黃酮對腎性高血壓大鼠血管緊張素、醛固酮、降鈣素基因相關(guān)肽的影響

鄧海英， 賴為國
（欽州市第二人民醫(yī)院藥劑科，廣西欽州535099）

摘要：目的 對柿葉黃酮對腎性高血壓大鼠模型的作用機制進行探討。方法 50只SD大鼠采用結(jié)扎左腎血管法進行腎性高血壓大鼠模型造模。造模4周后測血壓，將造模成功的大鼠隨機分為模型組，卡托普利組，柿葉黃酮高（400 mg/kg）、中（200 mg/kg）、低劑量組（100 mg/kg），每組各10只大鼠。另設(shè)空白組大鼠10只?？ㄍ衅绽M、柿葉黃酮組每天灌胃給藥一次，連續(xù)給藥12周，空白組和模型組給予等體積的生理鹽水。末次給藥2 h后，使用無創(chuàng)血壓測量系統(tǒng)對各組大鼠血壓進行測量，放射免疫法測大鼠血漿中血管緊張素Ⅰ（AngⅠ）、血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）、醛固酮（ALD）、降鈣素基因相關(guān)肽（CGIP）及主動脈組織中AngⅡ的含有量。稱量左腎與右腎的總質(zhì)量，計算左腎重與右腎重比值（LK/IK）。結(jié)果 與空白組相比，模型組的血壓顯著升高（P＜0.05），AngⅠ、AngⅡ、ALD、CGIP的含有量也顯著升高（P＜0.05），左腎重與右腎重的比值下降（P＜0.05）。與模型組相比，卡托普利組、柿葉黃酮組的大鼠的血壓以及血漿中AngⅡ、ALD含有量較模型組低，AngⅠ和CGIP的含有量較模型組高（P＜0.05）?？ㄍ衅绽M、柿葉黃酮組主動脈中AngⅡ的含有量較模型組低（P＜0.05），左腎重與右腎重的比重有所增加（P＜0.05）。結(jié)論 柿葉黃酮具有良好的降血壓效果，能通過增加血漿中AngⅠ、CGIP的含有量并降低AngⅡ、ALD和主動脈組織中的AngⅡ含有量，從而調(diào)節(jié)腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（IAAS），舒張血管平滑肌，使血管收縮力減弱而達到降壓的效果。

關(guān)鍵詞：柿葉黃酮；腎性高血壓；血管緊張素；醛固酮；降鈣素基因相關(guān)肽

腎性高血壓是一種與腎臟實質(zhì)性病以及腎動脈病變等其他多種因素所引起的患者血壓升高的心血管疾病。腎性高血壓屬于繼發(fā)性高血壓，其病發(fā)人群多為30歲前或50歲后［1］。臨床癥狀常表現(xiàn)為病程短、進展快舒張期常伴隨腰酸背痛［2］。目前臨床上治療腎性高血壓的手段以藥物治療為主。常用的治療藥物有鈣離子通道阻滯劑、利尿劑、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制、β受體阻滯劑、α受體阻滯劑、硝酸脂類降壓藥［3］。

經(jīng)廣西中醫(yī)藥研究院鑒定柿葉為柿樹科（Ebenaceae）柿樹屬（Diospyros）植物柿（Diospyros kaki L.f.）的新鮮或干燥葉［4］。其味苦、性寒。柿葉含有黃酮甙、鞣質(zhì)、酚類、多糖、揮發(fā)油、有機酸等物質(zhì)。具有抗菌消炎、生津止渴、清熱解毒、潤肺強心、鎮(zhèn)咳止血、抗癌防癌等多種功能［5］。本研究主要研究探討柿葉黃酮對腎性高血壓大鼠模型的作用機制，為柿葉黃酮的研究開發(fā)提供科學(xué)的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 SD大鼠，SPF級，雌雄各半，體質(zhì)量（200±20）kg，由廣西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，試驗動物生產(chǎn)許可證號SCXK（桂）2009-0002，試驗動物合格證號SCXK（桂）2009-0005。

1.2 儀器與試劑 Ge1 doc 2000低溫高速離心機（德國西門子公司）；BL-420生物機能實驗系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司）；-40℃低溫冰箱（青島海爾股份有限公司）；DFM-96眾成γ計數(shù)儀；卡托普利片（汕頭金石制藥總廠，批號140617）；血管緊張素Ⅰ（北京北方生物技術(shù)研究所，批號20140705）；血管緊張素Ⅱ（北京北方生物技術(shù)研究所，批號20140709）；醛固酮（北京北方生物技術(shù)研究所，批號20140628）；降鈣素基因相關(guān)肽放射免疫試劑盒（北京北方生物技術(shù)研究所，批號20140704）。

1.3 實驗方法

1.3.1 腎性高血壓大鼠模型建立［6］3%戊巴比妥鈉（45 mg/kg）腹腔注射到SD大鼠體內(nèi)，用75%酒精對大鼠腹部左側(cè)皮膚消毒，切口，沿左季肋下1.5～2.0 cm，距脊柱約1.0 cm處用玻璃棒小心分離左腎動脈，用縫線對左腎動脈進行結(jié)扎，對肌肉及皮膚逐層縫合?？p合后腹腔注射青霉素鈉2×105U預(yù)防術(shù)后傷口感染。空白組10只SD大鼠進行不結(jié)扎左腎動脈的假手術(shù)操作。術(shù)后4周測定手術(shù)大鼠尾動脈收縮壓，高于160 mmHg的大鼠可視為腎性高血壓模型成功。

1.3.2 柿葉黃酮提?。?］新鮮柿葉用80%乙醇在80℃下回流提取2 h，乙酸乙酯將乙醇對提取液萃取分離后用聚酰胺樹脂將乙酸乙酯萃取液吸附分離出柿葉黃酮，含有量達73%。

1.3.3 給藥及給藥方法 將50只腎性高血壓大鼠隨機分為5組，即模型組，卡托普利組（40 mg/kg），柿葉黃酮

高、中、低劑量組（400、200、100 mg/kg），每組10只。另設(shè)空白組大鼠10只。灌胃給藥，每天1次，連續(xù)給藥12周。空白組與模型組每天灌胃給予等體積的生理鹽水。

1.3.4 觀察指標(biāo) 末次給藥2 h后，對各組大鼠血壓進行測量，頸椎脫臼處死大鼠。取血，分離血漿。放射免疫法測大鼠血漿中血管緊張素Ⅰ（AngⅠ）、血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）、醛固酮（ALD）、降鈣素基因相關(guān)肽（CGIP）的含有量。切取0.1 g胸主動脈組織，勻漿后測定AngⅡ的含有量。

1.3.5 統(tǒng)計學(xué)方法 本研究數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 18.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)分析。數(shù)據(jù)以（±s）表示，多樣本均數(shù)間比較采用one-way ANOVA分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對腎性高血壓大鼠血壓的影響 與空白組比較，模型組的血壓明顯升比空白組高，證明造模成功（P＜0.05）；與模型組比較，各治療組大鼠的血壓均有所下降（P＜0.05）。見表1。

表1 柿葉黃酮對腎性高血壓大鼠血壓的影響（±s，n＝10，1 mm Hg＝0.133 kPa）

表1 柿葉黃酮對腎性高血壓大鼠血壓的影響（±s，n＝10，1 mm Hg＝0.133 kPa）

注：與空白組比較，1）P＜0.01；與術(shù)前比較，2）P＜0.01；與術(shù)后4周比較，3）P＜0.05，4）P＜0.01

組別 　　劑量/（mg·kg-1）　　血壓/mmHg術(shù)前　　術(shù)后4周　　給藥6周空白組120.42±15.72　118.96±16.88　118.85±17.46模型組　-　119.83±17.31　169.42±24.271）2）　170.35±23.411）卡托普利組　40　120.25±15.56　170.33±20.142）　129.87±22.764）柿葉黃酮組　400　119.87±19.97　170.07±19.322）　140.24±21.894）柿葉黃酮組　200　120.12±15.42　168.42±17.962）　148.73±22.724）柿葉黃酮組　100　119.94±16.85　169.38±19.222）　155.61±20.873）-

2.2 柿葉黃酮對腎性高血壓大鼠血漿中AngⅠ、AngⅡ、ALD、CGIP的影響 與空白組相比，模型組血漿中AngⅠ、AngⅡ、ALD、CGIP的含有量顯著升高（P＜0.05）；與模型組相比，各給藥治療組大鼠的血漿中AngⅡ、ALD含有量有所降低，AngⅠ、CGIP的含有量增加（P＜0.05）。見表2。

表2 柿葉黃酮對腎性高血壓大鼠血漿中AngⅠ、AngⅡ、ALD、CGRP的影響（±s，n＝10）

表2 柿葉黃酮對腎性高血壓大鼠血漿中AngⅠ、AngⅡ、ALD、CGRP的影響（±s，n＝10）

注：與空白組比較，1）P＜0.05，2）P＜0.01；與模型組比較，3）P＜0.05，4）P＜0.01

組別　　劑量/（mg·kg-1）　AngⅠ/（ng·L-1）　AngⅡ/（ng·L-1）　ALD/（μg·L-1）　CGIP/（pg·mL-1）空白組10.53±2.26　390.28±38.56　0.21±0.02　82.76±20.54模型組　-　14.35±3.041）　1 292.11±37.952）　0.30±0.031）　115.16±37.862）卡托普利組　40　15.74±2.651）3）　356.81±40.754）　0.16±0.031）3）　126.83±26.972）3）柿葉黃酮高劑量組　400　15.65±3.432）3）　368.43±36.524）　0.22±0.023）　153.51±24.182）4）柿葉黃酮中劑量組　200　15.14±2.811）3）　429.65±34.931）4）　0.23±0.043）　140.72±23.512）3）柿葉黃酮低劑量組　100　14.75±2.961）3）　573.74±48.592）4）　0.25±0.021）　133.68±23.892）3）-

2.3 柿葉黃酮對腎性高血壓大鼠主動脈組織中AngⅡ的影響 與空白組相比，模型組主動脈組織中AngⅡ的含有量顯著升高（P＜0.05）；與模型組相比，各給藥治療組大鼠的主動脈組織中AngⅡ的含有量均下降（P＜0.05）。見表3。

2.4 柿葉黃酮對腎性高血壓大鼠左腎重與右腎重比值的影響 與空白組相比，模型組左腎重與右腎重比值明顯降低（P＜0.01）；與模型組相比，各給藥治療組左腎重與右腎重比值均有增加（P＜0.05）。見表4。

表3 柿葉黃酮對腎性高血壓大鼠主動脈組織中AngⅡ的影響（±s，n＝10）

表3 柿葉黃酮對腎性高血壓大鼠主動脈組織中AngⅡ的影響（±s，n＝10）

注：與空白組比較，1）P＜0.05，2）P＜0.01；與模型組比較，3）P＜0.05，4）P＜0.01

組別　　劑量/（mg·kg-1）　AngⅡ/（ng·L-1）空白組538.82±58.54模型組　-　1 027.91±72.862）卡托普利組　40　602.68±66.794）柿葉黃酮高劑量組　400　650.43±57.431）4）柿葉黃酮中劑量組　200　721.85±68.161）4）柿葉黃酮低劑量組　100　826.37±73.982）3）-

表4 柿葉黃酮對腎性高血壓大鼠左腎重與右腎重比值的影響（±s，n＝10）

表4 柿葉黃酮對腎性高血壓大鼠左腎重與右腎重比值的影響（±s，n＝10）

注：與空白組比較，1）P＜0.05，2）P＜0.01；與模型組比較，3）P＜0.05

-1左腎重與右腎重比值空白組組別　　劑量/（mg·kg）　　左腎/mg　　右腎/mg 1 435.86±68.40　1 439.95±72.47　0.99±0.01模型組　-　902.41±65.522）　1 526.83±70.83　0.59±0.022）卡托普利組　40　1 035.37±52.471）3）　1 560.87±65.81　0.66±0.031）3）柿葉黃酮高劑量組　400　1 006.82±56.311）3）　1 549.04±79.84　0.64±0.021）3）柿葉黃酮中劑量組　200　987.43±69.572）　1 558.49±81.67　0.63±0.022）柿葉黃酮低劑量組　100　942.75±57.792）　1 551.78±60.75　0.60±0.032）-

3 討論

造模后的大鼠左腎重量和左腎重與右腎重比值較空白組明顯降低，而右腎的重量則明顯高于空白術(shù)組，證明造模術(shù)后的大鼠左腎明顯萎縮，右腎出現(xiàn)了代償性肥大說明動物模型復(fù)制成功。

通過對大鼠左腎動脈進行結(jié)扎，腎動脈血流量減少，激活腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（IAAS）。IAAS失去平衡后，由肝臟產(chǎn)生的血管緊張素原被釋入靜脈血中的腎素水解為AngⅠ，再經(jīng)肺循環(huán)中血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）的催化轉(zhuǎn)化為AngⅡ。AngⅡ含有量增加，小動脈平滑肌收縮，外周阻力增加。同時刺激腎上腺皮質(zhì)球狀帶，使ALD分泌增加，從而使腎小管遠端集合管鈉再吸收增強，導(dǎo)致體內(nèi)水與鈉潴留，引起血壓升高［6，8-9］。

AngⅠ在正常的血漿濃度下無生理活性，只作為轉(zhuǎn)換酶的底物，的含有量能夠反映生成底物的含有量［10］。AngⅠ需通ACE的催化才能轉(zhuǎn)化成AngⅡ。由于卡托普利是一種血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑，抑制ACE的活性，因此AngⅠ向AngⅡ的轉(zhuǎn)換受阻，血漿中剩余AngⅠ增多，故卡托普利組血漿AngⅠ含有量比模型組的高，AngⅡ含有量降低。實驗檢測結(jié)果顯示柿葉黃酮組的AngⅠ含有量也比模型組高，AngⅡ含有量低于模型組。推測柿葉黃酮通過抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶，減少AngⅠ向AngⅡ的轉(zhuǎn)換，使血管收縮力減弱而使血壓下降。ALD的生成主要受AngⅡ、促腎上腺皮質(zhì)激素以及體液中Na＋、K＋水平調(diào)節(jié)［11］。AngⅡ的含有量下降A(chǔ)LD的含有量也隨之降低，故卡托普利組與柿葉黃酮組中ALD的含有量較模型組低。CGIP是一種具有強大生理活性的舒血管因子。CGIP的含有量上升可使腎動脈舒張、外周阻力降低，血壓下降。實驗結(jié)果顯示，柿葉黃酮組CGIP的含有量比模型組高，推測柿葉黃酮提高血漿CGIP的含有量，舒張血管平滑肌使血壓下降。

參考文獻：

［1］ Sou1ez G，O1iva V L，Turpin S，et al.Imaging of renovascu1ar hypertension：respective va1ues of rena1 scintigraphy，rena1 Dopp1er US，and MI AngⅠography［J］.Radiographics，2000，20（5）：1355-1368.

［2］ 薛志強.腎性高血壓臨床特點及治療對策［J］.臨床和實驗醫(yī)學(xué)雜志，2010，9（24）：1845-1846.

［3］ 秦秋華，楊昭堅，譚紅妮，等.山麥膠囊對腎性高血壓大鼠血壓的影響［J］.中國實驗方劑學(xué)雜志，2013，19（12）：250-253.

［4］ 鄭 皓，魯周民，劉月梅，等.柿葉的藥理作用研究進展及開發(fā)利用現(xiàn)狀［J］.西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2007，35（12）：81-86.

［5］ 馬新博，宮汝飛.柿葉黃酮藥理作用研究進展［J］.中醫(yī)藥學(xué)報，2012，40（4）：130-132.

［6］ 何自育，楊育紅，王洪新.黃芪甲苷對腎性高血壓大鼠腎臟的保護作用及機制研究［J］.中藥新藥與臨床藥理，2014，25（4）：446-450.

［7］ 張勝海，王英姿，段飛鵬，等.柿葉中黃酮類成分的化學(xué)研究［J］.天津中醫(yī)藥，2014，31（8）：501-503.

［8］ 郭云良，楊學(xué)偉，肖盛元，等.四逆湯對腎性高血壓大鼠血壓的調(diào)節(jié)作用和機制［J］.中國藥理學(xué)通報，2008，24 （1）：79-83.

［9］ 劉力生.中國高血壓防治指南［J］.中華高血壓雜志，2011，19（8）：701-708.

［10］ 高 揚，胡元會，禇瑜光，等.高血壓病患者中醫(yī)證候與血清AngⅠ、AngⅡ、ALD相關(guān)性研究［J］.北京中醫(yī)藥，2012，31（1）：20-22.

［11］ 李 琳，陳良華，宋尚明，等.醛固酮拮抗劑在頑固性高血壓治療中的地位［J］.心血管病學(xué)進展，2010，31（1）：55-58.

作者簡介：鄧海英（1970—），女，主管藥師，從事腎性高血壓基礎(chǔ)研究工作。Te1：13977776009，E-mai1：denghaiying2012@163.com

基金項目：廣西高校科學(xué)技術(shù)研究項目（LX2014085）

收稿日期：2014-12-24

doi：10.3969/j.issn.1001-1528.2016.03.044

中圖分類號：I966

文獻標(biāo)志碼：B

文章編號：1001-1528（2016）03-0680-03