接骨靈貼膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

袁 杰， 劉道芳（.安徽省食品藥品檢驗(yàn)研究院，安徽合肥3005；.安徽安科余良卿藥業(yè)有限公司，安徽合肥30088）

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接骨靈貼膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

袁 杰1， 劉道芳2
（1.安徽省食品藥品檢驗(yàn)研究院，安徽合肥230051；2.安徽安科余良卿藥業(yè)有限公司，安徽合肥230088）

摘要：目的 建立接骨靈貼膏（當(dāng)歸、骨碎補(bǔ)、續(xù)斷等）的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法 TLC法對(duì)接骨靈貼膏中的當(dāng)歸進(jìn)行定性鑒別；GC法對(duì)其中冰片、樟腦、桉油精和水楊酸甲酯的含有量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果 薄層色譜斑點(diǎn)清晰分離度良好，無(wú)陰性干擾。冰片、樟腦、桉油精和水楊酸甲酯的回收率（n＝6）分別為96.7%（ISD＝3.1%）、96.8%（ISD＝1.3%）、96.4%（ISD＝1.6%）和98.4%（ISD＝1.4%）。結(jié)論 TLC法和GC法能有效監(jiān)控接骨靈貼膏的質(zhì)量。

關(guān)鍵詞：接骨靈貼膏；當(dāng)歸；冰片；樟腦；桉油精；水楊酸甲酯；TLC；GC

KEY W 0RDS：Jiegu1ing Emp1astrum；Angelicae Sinensis Radiχ；borneo1；camphor；cineo1；methy1 sa1icy1ate；TLC；GC

接骨靈貼膏最初收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十三冊(cè)［1］中，由骨碎補(bǔ)、續(xù)斷、土鱉蟲(chóng)、羌活、天南星、乳香、沒(méi)藥、當(dāng)歸、桃仁、五加皮、蒲公英、紅花、冰片、樟腦、水楊酸甲酯、桉油（主要成分為桉油精）16味藥材組成，經(jīng)煎煮、滲漉、涂膏、蓋襯等工藝，切成小塊而得，可活血化瘀，舒筋通絡(luò)，消腫止痛，主要用于各種閉合性新骨折、跌打損傷、扭挫傷等軟組織損傷。前期曾有關(guān)于接骨靈貼膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的文獻(xiàn)報(bào)道，對(duì)其中羌活、蒲公英、樟腦等成分進(jìn)行了定性鑒別試驗(yàn)，并對(duì)骨碎補(bǔ)中的柚皮苷進(jìn)行了含有量測(cè)定［2］，但部頒標(biāo)準(zhǔn)中只有“鑒別”和“含膏量”等簡(jiǎn)單的項(xiàng)目?？紤]到貼膏劑制備過(guò)程中的特點(diǎn)，為了保證臨床療效，本實(shí)驗(yàn)制定了當(dāng)歸的薄層色譜（TLC）鑒別方法，并采用氣相色譜（GC）法對(duì)其中易揮發(fā)的冰片、樟腦、桉油精、水楊酸甲酯進(jìn)行含有量測(cè)定，以建立較全面的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器、試劑與試藥

島津GC-2014C氣相色譜儀，包括氫火焰離子檢測(cè)器、GC So1ution色譜工作站（日本島津公司）。毛細(xì)管色譜柱以聚乙二醇20000（PEG-20M）為固定相（柱長(zhǎng)30 m，內(nèi)徑0.53 mm，膜厚度0.5 μm）。硅膠G薄層板（青島海洋化工有限公司、煙臺(tái)大學(xué)生物科學(xué)與工程研究所、德國(guó)Merck公司）；薄層成像文件系統(tǒng)（瑞士CAMAG公司）。

內(nèi)標(biāo)環(huán)己酮（批號(hào)111674-200401）、冰片（批號(hào)110743-200504，供含有量測(cè)定用）、樟腦（批號(hào)110747-201008，純度99.0%）、桉油精（批號(hào)110788-201004，純度99.6%）和水楊酸甲酯（批號(hào)110707-201011，純度99.9%）對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院）。所用試劑均為分析純。接骨靈貼膏（批號(hào)20140901、20140902、20140903，安徽安科余良卿藥業(yè)有限公司）。

2 TLC法鑒別接骨靈貼膏中的當(dāng)歸

2.1 供試品溶液制備 取本品5片，加三氯甲烷40 mL，不時(shí)振搖以使貼膏脫膏，傾取膏液，加甲醇30 mL，邊加邊攪拌，離心5 min，取上清液，低溫蒸干，殘?jiān)蛹状? mL溶解，離心（10 000 r/min）2 min，取上清液，即得。

2.2 對(duì)照品溶液制備 取當(dāng)歸藥材0.5 g，加乙醇10 mL，超聲10 min，濾過(guò)，濾液即為對(duì)照品溶液。2.3 陰性對(duì)照溶液制備 取原藥材適量，按處方制得缺當(dāng)歸的陰性樣品，按“2.1”項(xiàng)下方法制得陰性對(duì)照溶液。

2.4 TLC鑒別 吸取供試品、對(duì)照品、陰性對(duì)照溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（4∶1）為展開(kāi)劑展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。結(jié)果，供試品色譜在與對(duì)照品相應(yīng)的位置上，呈相同顏色的熒光斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照品在相應(yīng)的位置無(wú)斑點(diǎn)。由此可知，該方法陰性對(duì)照無(wú)干擾，可以用于鑒別當(dāng)歸，見(jiàn)圖1。

3 冰片、樟腦、桉油精、水楊酸甲酯含有量測(cè)定

3.1 色譜條件 聚乙二醇20000（PEG-20M）毛細(xì)管柱（柱長(zhǎng)30 m，內(nèi)徑0.53 mm，膜厚度0.5 μm）。進(jìn)樣口溫度230℃；檢測(cè)器溫度240℃；氮?dú)怏w積流量2 mL/min，氫氣40 mL/min，氧氣400 mL/min；程序升溫（初始90℃，保持4 min，以6℃/min的速率升至170℃，保持10 min。理論塔板數(shù)按樟腦峰計(jì)算，應(yīng)不低于10 000。

3.2 溶液制備方法

圖1 接骨靈貼膏中當(dāng)歸的薄層色譜圖Fig.1 TLC chromatogram s of Angelicae Sinensis Radiχ in Jieguling Em plastrum

3.2.1 對(duì)照品溶液制備 精密稱取環(huán)己酮適量，加乙酸乙酯制成每1 mL含25 mg樣品的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。另取樟腦25 mg、冰片5 mg、桉油精6 mg和水楊酸甲酯12.5 mg，置同一25 mL量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1 mL，加乙酸乙酯溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得。

3.2.2 供試品溶液制備 取本品5片，剪成小塊，除去蓋襯，置1 000 mL燒瓶中，連接揮發(fā)油測(cè)定器，自測(cè)定器上端加水400 mL，使水充滿刻度部分，再加乙酸乙酯4 mL，加熱回流2 h，放冷，分取刻度中的乙酸乙酯，揮發(fā)油測(cè)定器用適量乙酸乙酯洗滌，合并乙酸乙酯液。通過(guò)鋪有2 g無(wú)水硫酸鈉的漏斗，轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1 mL，再加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，即得。3.2.3 陰性對(duì)照溶液制備 按處方量制成缺樟腦、冰片、桉油精、水楊酸甲酯的陰性對(duì)照品，按“2.1”項(xiàng)下方法操作，即得。

3.3 含量測(cè)定的專屬性試驗(yàn) 分別精密吸取“3.2”項(xiàng)下對(duì)照品、供試品和陰性對(duì)照溶液各1 μL，注入氣相色譜儀中，記錄色譜圖，見(jiàn)圖2。由圖可知，在供試品色譜中，呈現(xiàn)與對(duì)照品保留時(shí)間相同的色譜峰，而陰性對(duì)照溶液色譜中未呈現(xiàn)，并且無(wú)干擾物質(zhì)。

圖2 GC色譜圖Fig.2 GC chromatograms

3.4 線性關(guān)系考察 精密稱取環(huán)己酮適量，加乙酸乙酯制成每1 mL含10 mg樣品的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。精密稱取樟腦62.01 mg、冰片46.51 mg、桉油精21.89 mg和水楊酸甲酯對(duì)照品33.38 mg，置于同一25 mL量瓶中，加乙酸乙酯溶解，制成混合對(duì)照品溶液。分別精密吸取0.5、1、2、3、5、 8 mL混合對(duì)照品溶液，置于10 mL量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1 mL，加乙酸乙酯溶解，并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取1 μL，注入氣相色譜儀，記錄色譜峰。以對(duì)照品質(zhì)量濃度與內(nèi)標(biāo)質(zhì)量濃度的比值為橫坐標(biāo)（X），峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值為縱坐標(biāo)（Y）進(jìn)行線性回歸，得到接骨靈貼膏中4種成分的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程、相關(guān)系數(shù)（r）和線性范圍，結(jié)果見(jiàn)表1，表明四者在一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)均有良好的線性關(guān)系。

表1 接骨靈貼膏中4種成分的線性關(guān)系Tab.1 Linear relationships of four consituents in Jieguling Em p lastrum

3.5 精密度試驗(yàn) 取“3.4”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積，計(jì)算校正因子。結(jié)果，樟腦ISD為0.56%、冰片ISD為0.51%、桉油精I(xiàn)SD為0.76%、水楊酸甲酯ISD為0.65%，表明儀器精密度良好。

3.6 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一樣品（批號(hào)20140901）6份，按“3.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果，樟腦平均含有量3.675 mg/片，ISD為0.83%；冰片1.068 mg/片，ISD 為0.98%；桉油精0.823 mg/片，ISD為1.03%；水楊酸甲酯1.324 mg/片，ISD為0.49%，表明該方法重復(fù)性良好。

3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱取同一樣品（批號(hào)20140901）1份，按“3.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別在0、1、2、4、8、12 h進(jìn)樣1 μL，測(cè)定峰面積。結(jié)果，樟腦的峰面積ISD為0.34%，冰片為0.65%、桉油精為0.97%、水楊酸甲酯為0.79%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.8 加樣回收率試驗(yàn) 取含有量已知的樣品（批號(hào)20140901，樟腦3.675 mg/片，冰片1.068 mg/片，桉油精0.823 mg/片，水楊酸甲酯1.324 mg/片）6份，各2片，除去蓋襯，剪成小塊，置于1 000 mL燒瓶中，加水300 mL，加入混合對(duì)照品溶液（含7.654 mg/mL樟腦、2.142 mg/mL冰片、1.763 mg/mL桉油精、2.578 mg/mL水楊酸甲酯）1 mL，按“3.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，吸取1 μL，注入氣相色譜儀，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表2。

3.9 含有量測(cè)定 取3批樣品，按上述方法進(jìn)行分析測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 含有量測(cè)定結(jié)果Tab.3 Results of content determ ination

4 討論

樟腦、冰片、桉油精和水楊酸甲酯是在基質(zhì)融化（70℃左右）時(shí)加入，根據(jù)樣品的測(cè)定數(shù)據(jù)可以發(fā)現(xiàn)，樟腦、冰片、桉油精和水楊酸甲酯等成分有一定程度的揮發(fā)。另外，批間的差異性較小，說(shuō)明工藝較穩(wěn)定，加上臨床使用多年，療效確切，故可以認(rèn)為處方和工藝較合理［3］。

同時(shí)，對(duì)以上4種成分進(jìn)行含有量測(cè)定，由于篇幅所限，沒(méi)有把缺每味藥的陰性對(duì)照?qǐng)D譜一一列出，而在實(shí)驗(yàn)中分別作了缺單味藥材的陰性對(duì)照，結(jié)果證明均無(wú)干擾［4-14］。而且，采用了《中國(guó)藥典》2010版一部揮發(fā)油測(cè)定的方法，應(yīng)注意各部件裝配的嚴(yán)密性問(wèn)題，不能有漏氣現(xiàn)象，否則測(cè)定結(jié)果不準(zhǔn)確［15］。

表2 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab.2 Results of recovery tests

接骨靈貼膏中的冰片使用的是合成龍腦，為左旋和右旋龍腦的混合物，在氣相色譜中出現(xiàn)兩個(gè)峰，故以兩峰的峰面積之和來(lái)計(jì)算其含有量。

該制劑由16味藥組成，本實(shí)驗(yàn)還對(duì)骨碎補(bǔ)、羌活、乳香、沒(méi)藥等進(jìn)行了薄層色譜研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，骨碎補(bǔ)、羌活陰性樣品有干擾，而乳香、沒(méi)藥的薄層結(jié)果沒(méi)有找到專屬性強(qiáng)的斑點(diǎn)，因此無(wú)法準(zhǔn)確進(jìn)行鑒別。

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［成分分析］

Quality standard for Jieguling Em plastrum

YUAN Jie1， LIU Dao-fang2

（I.Anhui Provincial Institute for Food and Drug Control，Hefei23OO5I，China；2.Anhui Anke Yuliangqing Pharmaceuticl Co.，Ltd.，Hefei23OOSS，China）

ABSTRACT：AIM To estab1ish a qua1ity standard for Jiegu1ing Emp1astrum（Angelicae Sinensis Iadix，Drynariae Rhizoma，Dipsaci Radiχ，etc.）.METH0DS A.Sinensis in Jiegu1ing Emp1astrum was identified by TLC. The contents of borneo1，camphor，cineo1and methy1 sa1icy1ate in this preparation were determined by GC.RESULTS The c1ear TLC spots showed good reso1ution without interference from negative samp1es.The average recoveries（n＝6）of borneo1，camphor，cineo1 and methy1 sa1icy1ate were 96.7%（ISD＝3.1%），96.8% （ISD＝1.3%），96.4%（ISD＝1.6%）and 98.4%（ISD＝1.4%），respective1y.C0NCLUSI0 N TLC and GC can be app1ied tomonitoring the qua1ity of Jiegu1ing Emp1astrum.

作者簡(jiǎn)介：袁 杰（1974—），男，碩士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹兴幉募爸谐伤庂|(zhì)量分析。Te1：13865959337，E-mai1：dsyuanjie@ 126.com

收稿日期：2015-06-23

doi：10.3969/j.issn.1001-1528.2016.03.020

中圖分類號(hào)：I927.2

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1001-1528（2016）03-0575-04