小麥低聚肽對大黃所致大鼠脾虛證的影響

胡明華，潘靜華，汪文來，張方珍，趙宏艷，劉梅潔，鞠大宏△

(1．無限極(中國)有限公司，廣州 510665;2．中國中醫(yī)科學(xué)院中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究所，北京 100700)

小麥低聚肽對大黃所致大鼠脾虛證的影響

胡明華1，潘靜華2，汪文來2，張方珍2，趙宏艷2，劉梅潔2，鞠大宏2△

(1．無限極(中國)有限公司，廣州 510665;2．中國中醫(yī)科學(xué)院中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究所，北京 100700)

目的:探討小麥低聚肽是否具有健脾作用。方法:先將48只大鼠隨機分為空白對照組12只，造模組36只2組，雌雄各半。給予造模組大鼠灌服10 g生藥/kg體質(zhì)量的大黃水溶液，每天1次，連續(xù)2周。然后，再將造模組大鼠隨機分為模型組、小麥低聚肽低劑量組和高劑量組3組各12只，雌雄各半。小麥低聚肽低劑量組和高劑量組分別給予0.277 g/kg體質(zhì)量和0.554 g/kg體質(zhì)量的小麥低聚肽，每日1次，連續(xù)7周。在給藥同時除空白對照組外，其余各組大鼠繼續(xù)灌胃相同劑量的大黃水溶液，隔天1次，連續(xù)7周。實驗結(jié)束后，將各組大鼠處死取材進(jìn)行各項指標(biāo)檢測。結(jié)果:與模型組比較，小麥低聚肽高劑量組大鼠的脾虛癥狀得到明顯改善，大鼠胃黏膜厚度均明顯增加，外周血清中D-XY、AMY水平均明顯增高。結(jié)論:小麥低聚肽能夠改善大黃所致的大鼠脾虛證并具有健脾作用。

小麥低聚肽;大黃;脾虛證;大鼠

本實驗以大黃所致的脾虛大鼠為模型，觀察小麥低聚肽是否具有健脾作用，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 采用SPF級 SD大鼠48只，雌雄各半，體質(zhì)量198 g～221 g，由中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心提供(許可證號SCXK-(軍)2012-0004)，飼養(yǎng)于中國中醫(yī)科學(xué)院中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究所清潔級實驗動物室(實驗動物使用許可證號SYXK-(京)2010-0032)。

1.1.2 藥品 小麥低聚肽由無限極(中國)有限公司提供(批號130731)，臨用前用純凈水分別配制成濃度0.0213 g/ml和0.0426 g/ml的溶液。

大黃產(chǎn)地四川，購自北京景弘康泰海馨大藥房有限公司，經(jīng)中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所生藥室鑒定，為蓼科大黃屬掌葉大黃Rheum palmatum L．的干燥根及根莖的切片。大黃水溶液制備:將大黃切片粉碎，過40目篩，加10倍水?dāng)噭颍曁崛? h，水溫控制不超過50℃，靜置過夜。離心4500 r/10 min取上清液，75℃水浴濃縮成濃度為1 g生藥/ml的水溶液，－20℃冰箱保存，臨用前用溫水浴融化、搖勻。

1.1.3 主要試劑 大鼠D-木糖(D-Xylose，DXY)、大鼠α-淀粉酶(α-Amylase，α-AMY)ELISA試劑盒北京科盈美科技有限公司提供(批號為14062205和14063004)。

1.1.4 主要儀器 Multiskan Mk3酶標(biāo)儀，Wellwash 4 Mk2洗板機，Mutifuge X3離心機，美國Thermo公司;DM 6000B正置顯微鏡，Qwin Pro V3.5.0圖像分析系統(tǒng)，德國Leica公司。

1.2 方法

1.2.1 動物分組及處理 采用Excel軟件的隨機數(shù)字功能分別對雌雄大鼠進(jìn)行隨機分組，先分為空白對照組12只，造模組36只，雌雄各半。參照文獻(xiàn)［1］方法，采用大黃對造模組大鼠進(jìn)行造模。給大鼠灌胃給予1 g生藥/ml的大黃水溶液，1 ml/100 g體質(zhì)量，劑量為10 g生藥/kg體質(zhì)量。每天灌胃1次，連續(xù)2周。每周大鼠稱重1次，據(jù)此調(diào)整給予的大黃溶液量?？瞻讓φ战M按同法灌胃給予等體積純凈水。造模2周后，造模組大鼠出現(xiàn)便溏、肛門污穢、進(jìn)食不積極、精神倦怠、瞇眼、蜷縮、不活潑、反應(yīng)遲緩、四肢無力、毛發(fā)欠光澤、疏松等癥狀，而空白對照組大鼠大便正常，進(jìn)食積極，精神狀態(tài)良好，行為活潑，毛發(fā)光澤，表明脾虛模型制作成功。

采用Excel軟件的隨機數(shù)字功能，按體質(zhì)量將造模組雌雄大鼠分為模型組、小麥低聚肽低劑量組和高劑量組3組各12只，雌雄各半。然后各給藥組開始灌胃給藥，小麥低聚肽低劑量組和高劑量組分別灌胃給予濃度0.0213 g/ml、0.0426 g/ml的小麥低聚肽溶液，給藥體積均為13 ml/kg體質(zhì)量，給藥劑量分別為0.277 g/kg體質(zhì)量和0.554 g/kg體質(zhì)量。以上給藥每日1次，連續(xù)7周。空白對照組、模型組按同法給予等體積純凈水。給藥同時除空白對照組外，其余各組大鼠繼續(xù)灌胃大黃水溶液(給藥濃度、體積及劑量同上)，隔日1次，連續(xù)7周?？瞻讓φ战M按同法給予等體積純凈水。每周大鼠稱重1次，據(jù)此調(diào)整給藥量以及給予的大黃溶液量。

在給藥7周后，在大鼠處死前各組大鼠禁食不禁水12 h。在麻醉前1 h，按照文獻(xiàn)［2］的方法，各組大鼠灌胃給予3%D-XY溶液，1 ml/100 g體質(zhì)量，劑量為0.3 g/kg體質(zhì)量。給D-XY 1 h后，將各組大鼠以45 mg/kg體質(zhì)量劑量的戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉。沿腹中線打開腹腔，腹主動脈取血靜置2 h，3000 r/min離心15 min取血清，－80℃冰箱保存待測。將大鼠處死取出胃置于福爾馬林中固定。

1.2.2 指標(biāo)檢測 ①D-XY、AMY水平檢測:檢測前，從冰箱中取出凍存的大鼠外周血清，室溫下復(fù)溫。采用 ELISA法，按照試劑盒說明書，用Multiskan Mk3酶標(biāo)儀檢測外周血清中 D-XY和AMY水平;②胃黏膜厚度檢測:分別將胃組織標(biāo)本從福爾馬林中取出，于幽門上0.5 cm處切取厚度為3 mm的胃體組織，用乙醇逐級脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，用切片機切取厚度為5 μm的切片;HE染色，光學(xué)樹脂封片。采用Qwin Pro V3.5.0圖像分析系統(tǒng)，在4倍物鏡下測量胃黏膜厚度。

1.2.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，實驗結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示。

2 結(jié)果

2.1 一般狀況

空白對照組大鼠精神狀態(tài)良好，行為活潑，被毛光澤，進(jìn)食積極，大便正常。模型組大鼠便溏，肛門污穢，精神狀態(tài)差，倦怠，瞇眼，蜷縮，不活潑，反應(yīng)遲緩，四肢無力，被毛疏松欠光澤，進(jìn)食不積極。小麥低聚肽低劑量組大鼠的狀況與模型組相當(dāng)。小麥低聚肽高劑量組大鼠大便的性狀明顯好于模型組，有的雖軟但成形;與模型組比較，大鼠精神狀態(tài)明顯變好，活動增加，反應(yīng)性增強，四肢較有力，毛色也較模型組光澤且進(jìn)食積極。

2.2 小麥低聚肽對脾虛大鼠胃黏膜厚度的影響

表1顯示，與空白對照組比較，模型組以及小麥低聚肽高、低劑量組大鼠胃黏膜厚度均顯著減少。與模型組比較，小麥低聚肽高劑量組胃黏膜厚度明顯增加，低劑量組則無顯著性變化。小麥低聚肽高劑量組與其低劑量組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

表1 各組大鼠胃黏膜厚度變化

2.3 小麥低聚肽對脾虛大鼠外周血清中DXY水平的影響

圖1顯示，模型組以及小麥低聚肽高、低劑量組大鼠外周血清中D-XY水平均明顯低于空白對照組。小麥低聚肽高劑量組D-XY水平明顯高于模型組，低劑量組與模型組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。小麥低聚肽高劑量組與其低劑量組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

圖1 各組大鼠外周血清中D-XY水平的變化

2.4 小麥低聚肽對脾虛大鼠外周血清中AMY水平的影響

圖2顯示，模型組以及小麥低聚肽高、低劑量組大鼠外周血清中AMY水平較空白對照組均明顯降低。小麥低聚肽高劑量組的AMY水平與模型組比較明顯增高，低劑量組與之比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。與小麥低聚肽低劑量組比較，高劑量組的AMY水平雖有增高的趨勢但無統(tǒng)計學(xué)意義。

圖2 各組大鼠外周血清中AMY水平的變化

3 討論

中醫(yī)理論認(rèn)為，脾主運化即是指脾具有把水谷(飲食物)化為精微，并將精微物質(zhì)轉(zhuǎn)輸至全身的生理功能。脾的運化功能旺盛，機體的消化吸收功能才能健全，才能為化生精、氣、血、津液提供足夠的養(yǎng)料，才能使臟腑、經(jīng)絡(luò)、四肢百骸、筋肉皮毛等得到充分滋養(yǎng)，從而進(jìn)行正常的生理活動。若脾虛運化功能減弱，則機體的消化吸收功能也因之失常，而出現(xiàn)便溏、食欲不振、倦怠、消瘦和氣血生化不足等癥狀。本實驗結(jié)果顯示，采用大黃造模后大鼠出現(xiàn)便溏、肛門污穢、進(jìn)食不積極、精神狀態(tài)差、倦怠、瞇眼、蜷縮、不活潑、反應(yīng)遲緩、四肢無力、被毛疏松、欠光澤等明顯的脾虛癥狀，而小麥低聚肽高劑量能使上述癥狀得到明顯改善。所以從癥狀來看，小麥低聚肽能改善大黃所致的大鼠脾虛證而具有健脾作用。

本實驗結(jié)果顯示，采用大黃造模9周，可使大鼠胃黏膜厚度顯著減少、變薄，而小麥低聚肽高劑量能使其明顯增加。這從組織形態(tài)角度證明，小麥低聚肽對大黃所致的大鼠脾虛證具有明顯改善作用。

D-XY吸收實驗?zāi)軌驕?zhǔn)確地反映小腸的消化、吸收功能，D-XY水平的變化是目前較公認(rèn)的反映脾虛狀態(tài)的重要指標(biāo)之一。臨床研究表明，脾虛證患者的D-XY排泄率顯著低于健康人［3-4］。本實驗結(jié)果顯示，采用大黃造模9周，大鼠外周血清中DXY水平顯著降低，表明大鼠的小腸吸收功能減弱，發(fā)生了脾虛;而小麥低聚肽高劑量能使D-XY含量明顯增高，說明小麥低聚肽能夠增強脾虛大鼠小腸的吸收功能而改善脾虛證，達(dá)到健脾的作用。

AMY是公認(rèn)的反映脾虛狀態(tài)的另一個重要指標(biāo)。其不需激活就具有活性，可將淀粉、糖原和大多數(shù)其他碳水化合物水解為糊精、麥芽糖以及麥芽寡糖［5］182;若其合成或分泌不足，就不能使食物得到充分消化，進(jìn)而導(dǎo)致小腸對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收減少。臨床研究表明，脾氣虛證患者血清中的AMY水平明顯降低［6］。本實驗結(jié)果顯示，采用大黃造模9周，大鼠外周血清中的AMY水平顯著降低。這一結(jié)果說明，大黃可使AMY水平下降，進(jìn)而妨礙小腸對食物的消化與吸收，這是大黃之所以能夠?qū)е缕⑻撟C發(fā)生的機理之一;而小麥低聚肽高劑量能使其水平明顯增高，說明小麥低聚肽可通過提高AMY的水平而增強小腸的消化與吸收功能，進(jìn)而改善脾虛證，達(dá)到健脾的作用。

綜上所述，小麥低聚肽高劑量(0.554 g/kg體質(zhì)量)能使大黃所致脾虛大鼠的癥狀得到改善，使變薄的胃黏膜厚度增加，使外周血清中低下的D-XY和AMY水平增高，表明小麥低聚肽能夠改善大黃所致的大鼠脾虛證而具有健脾作用。

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R285．5

B

1006-3250(2016) 02-0184-02

2015-06-12

胡明華(1981-)，女，遼寧東港人，中級工程師，從事保健食品功能因子開發(fā)研究。

△通訊作者:鞠大宏(1963-)，男，遼寧鳳城人，研究員，醫(yī)學(xué)博士，博士研究生導(dǎo)師，從事中醫(yī)基礎(chǔ)理論的研究，Tel:010-64014411-2564，E-mail:judahong@sohu．com。