芪藶強心膠囊對阿霉素心衰大鼠心功能及心室重構(gòu)的影響*

陳　莉　任　越

河北省保定市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院(保定 071000)

?

芪藶強心膠囊對阿霉素心衰大鼠心功能及心室重構(gòu)的影響*

陳莉任越△

河北省保定市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院(保定 071000)

摘要目的：探討芪藶強心膠囊對阿霉素誘導(dǎo)的充血性心力衰竭大鼠心功能及心室重構(gòu)的影響。方法：將45只SD大鼠隨機分為模型組(A組)、芪藶強心組(B組)、對照組(C組)。采用鹽酸阿霉素誘導(dǎo)制作心力衰竭大鼠模型。于藥物干預(yù)第8周時測定大鼠心臟血流動力學(xué)、心功能參數(shù)、心肌基質(zhì)金屬蛋白酶-2、-9(MMP-2、-9)進行比較分析。結(jié)果：大鼠經(jīng)過灌胃8周后，B組大鼠左心室EF值和FS值較A組明顯上升。實驗干預(yù)8周后，與C組大鼠比較，A組與B組大鼠SAP、DAP、LVMI、LVEDP較模型組顯著升高，±dp/dtmax較模型組顯著降低。與A組大鼠比較，B組大鼠SAP、DAP、LVEDP、LVMI較A組明顯下降，±dp/dtmax顯著升高。各組大鼠實驗干預(yù)8周后，B組大鼠MMP-2的活性較A組明顯減低(1.38±0.11 vs 1.81±0.24)。B組大鼠MMP-9的活性較A組明顯減低(1.17±0.26 vs 2.09±0.31)。結(jié)論：芪藶強心膠囊能夠改善鹽酸阿霉素誘導(dǎo)的心力衰竭大鼠心臟血流動力學(xué)、心功能并能改善大鼠左心室重構(gòu)。

主題詞 心力衰竭@芪藶強心膠囊@阿霉素大鼠

慢性心力衰竭(CHF)是各種心臟疾病的嚴(yán)重階段，死亡率甚至超過了某些惡性腫瘤。心室重構(gòu)異常也是導(dǎo)致心衰難以控制的重要原因，大鼠心肌基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)異常能反映大鼠心室重構(gòu)的判斷[1]。臨床除傳統(tǒng)強心、利尿治療外，血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(ACEI)和β受體阻滯劑的聯(lián)合治療推動了心衰治療，而傳統(tǒng)中醫(yī)藥治療在西醫(yī)治療的基礎(chǔ)上以其獨特的作用強化了這一過程。芪藶強心膠囊能起到西醫(yī)治療心力衰竭的強心、利尿、擴血管的作用，其具有益氣溫陽、活血通絡(luò)、瀉肺利水功效能更好的改善心力衰竭患者的預(yù)后[2]。本實驗通過阿霉素誘導(dǎo)建立心力衰竭大鼠模型，應(yīng)用芪藶強心膠囊治療8周以后，觀察其對心衰大鼠血流動力學(xué)、心功能及心室重構(gòu)的影響，探討芪藶強心膠囊通過對心肌基質(zhì)金屬蛋白酶-2、-9(MMP-2、-9)的作用治療心力衰竭的可能機制。

1材料1.1實驗動物45只雄性SD大鼠(清潔級Ⅱ)，體重(200±25)g，購于河北省動物實驗中心，實驗動物許可證：SCXK(冀)2008-1-003。飼養(yǎng)條件：溫度(23±2)℃、濕度(55±10)%，12/12h 光照黑暗循環(huán)，常規(guī)攝食飲水，常規(guī)喂養(yǎng)1周后用于實驗。

1.2材料及儀器芪藶強心膠囊(主要成分人參、黃芪、丹參、紅花、附子、澤瀉、玉竹、陳皮等，0.3g/粒，批號：國藥準(zhǔn)字：Z20040141)；鹽酸阿霉素(10mg/支，批號：國藥準(zhǔn)字H44024359)；BL-420E+生物信號采集系統(tǒng)；GEViVid7型超聲儀；12L高頻淺表探頭；LGR10-4.2型離心機；大鼠心肌基質(zhì)金屬蛋白酶-2、-9(MMP-2、-9)試劑盒(GMS30071.1v.A，GENMED SCIENTIFICS INC.USA)。

2方法2.1模型建立及分組采用隨機數(shù)字表法將實驗用45只SD大鼠隨機分為3組：模型組(A組)、芪藶強心組(B組)、對照組(C組)。模型制備[3]：注射用水5mL溶解鹽酸阿霉素加入0.9%的生理鹽水，配置成1mL生理鹽水含有鹽酸阿霉素0.8mg，避光低溫存放備用。A組與B組大鼠于第1周、3周、5周通過腹腔注射鹽酸阿霉素0.3mg/100g體重，于第2周、4周、6周通過腹腔注射鹽酸阿霉素0.2mg/100g體重，共6次；對照組同時注射等量生理鹽水。

2.2給藥方法自注射鹽酸阿霉素5周后，各組大鼠開始給予藥物干預(yù)，A組、C組給予給予生理鹽水4mL/d灌胃，B組給予芪藶強心膠囊0.6g/(kg·d)加生理鹽水至4mL灌胃。術(shù)后常規(guī)喂養(yǎng)、灌胃8周后，大鼠出現(xiàn)明顯呼吸頻率增快、呼吸幅度加深、飲食減少、皮毛干枯無光、爪背紫紺水腫、尿少等心力衰竭癥狀。8周后取各實驗組剩余的大鼠為研究對象。A組、B組、C組各死亡大鼠3只、2只、2只。

2.3指標(biāo)檢測及方法2.3.1大鼠心臟超聲檢測：經(jīng)灌胃給藥8周后，戊巴比妥鈉50mg/kg經(jīng)腹腔注射麻醉，大鼠仰臥固定于鼠板，胸前區(qū)剃毛，固定高年資主任醫(yī)師行心臟超聲檢查。圖像采集定位于左室短軸乳頭肌平面，使用M型超聲進行檢查，應(yīng)用Teichholtz方法測量大鼠左心室射血分?jǐn)?shù)(LVEF%)和左心室短軸縮短率(LVFS%)。所有大鼠心臟資料均保存后進行脫機分析，分別測量大鼠3個心動周期的數(shù)據(jù)取平均值，用計數(shù)資料分析。

2.3.2血流動力學(xué)測定：大鼠心臟超聲數(shù)據(jù)檢測完畢后，連接BL-420E+生物信號數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)后進入軟件血流動力學(xué)模塊。將大鼠固定于鼠臺上，頸部去毛，常規(guī)碘伏消毒，取頸部正中入路，逐層切開組織顯露右側(cè)頸總動脈，經(jīng)右側(cè)頸總動脈插管，待壓力穩(wěn)定后，描記頸動脈收縮壓(SAP)、舒張壓(DAP)等。記錄完畢繼續(xù)推入導(dǎo)管4.5～5.0 cm至左心室，描記左心室舒張末壓(LVEDP)、收縮期左心室內(nèi)壓上升的最大變化速率(+dp/dtmax)，舒張期左心室內(nèi)壓下降的最大變化速率(-dp/dtmax)。采集數(shù)據(jù)完畢后，立即剖胸取出心臟，將左、右心房及右心室剪掉，預(yù)冷PBS液沖洗，濾紙拭干后稱左心室質(zhì)量，計算左室重量指數(shù)(LVMI)=左心室重量/體重。

2.3.3心肌基質(zhì)金屬蛋白酶-2、-9檢測：取100mg大鼠心肌組織，使用眼科剪刀剪碎，加入裂解緩沖液，在冰水混合物容器中使用勻漿管勻漿致無明顯肉眼可見心肌組織，將制作好的心肌勻漿液吸入另一預(yù)冷的離心管中，4℃下低溫離心機12000rpm離心15min后取上清液吸入另一預(yù)冷的離心管，即可得到總蛋白，BCA法測定蛋白濃度，取含蛋白量60μg的標(biāo)本，應(yīng)用MMP-2、-9檢測試劑盒按照說明書嚴(yán)格操作，檢測活性并記錄。

2.4統(tǒng)計學(xué)方法有關(guān)實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差來表示，各組在相同時間段的實驗結(jié)果應(yīng)用單因素方差分析，用SPSS16.0統(tǒng)計軟件分析。

3結(jié)果3.1各組大鼠心功能比較大鼠經(jīng)過灌胃8周后，A組(模型組)和B組(芪藶強心組)大鼠左心室EF值、FS值與C組(對照組)比較明顯下降(P<0.05)，提示經(jīng)阿霉素誘導(dǎo)后大鼠出現(xiàn)明顯心功能減低；經(jīng)過灌胃8周后，B組大鼠左心室EF值、FS值較A組明顯上升(P<0.05) ，見表1。

3.2各組大鼠血流動力學(xué)比較實驗干預(yù)8周后，與C組大鼠比較，A組與B組大鼠SAP、DAP、LVMI、LVEDP較模型組顯著升高，+dp/dtmax、-dp/dtmax較模型組顯著降低(P<0.05)，提示A組及B組大鼠存在明顯的心力衰竭。與A組大鼠比較，經(jīng)芪藶強心膠囊治療后，B組大鼠SAP、DAP、LVEDP、LVMI較A組明顯下降(P<0.05)，+dp/dtmax、-dp/dtmax顯著升高(P<0.05) ，見表2。

4討論中醫(yī)藥學(xué)將心力衰竭歸于水腫、喘證、痰飲、心悸等范疇，心力衰竭的病機在祖國醫(yī)學(xué)研究中，可以概括為本虛標(biāo)實，虛實夾雜，本虛則以氣虛及陰陽虛為主。芪藶強心膠囊能增加心肌收縮力、心輸出量、腎血流量，利尿消腫的作用[4-5]。細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)是一類含有鋅離子的內(nèi)源性蛋白水解酶，MMP-2，-9作用在底物為IV 型膠原及變性膠原，研究發(fā)現(xiàn)心臟MMP-2、-9的表達異常與心臟收縮功能障礙及心室重構(gòu)相關(guān)[6-7]。阿霉素是常用的抗腫瘤藥物，其心臟毒性基礎(chǔ)是氧自由基的形成，并且可以通過引起細(xì)胞內(nèi)游離Ca2+升高導(dǎo)致細(xì)胞鈣超載和抑制ERKl/2信號通路的激活而加劇細(xì)胞凋亡來發(fā)揮毒性作用導(dǎo)致心臟增大、心力衰竭。通過腹腔注射阿霉素建立心力衰竭模型，目前已成為國際上比較公認(rèn)的建模方法。

芪藶強心膠囊黃芪益氣利水，丹參活血祛瘀，人參補氣通絡(luò)，葶藶子瀉肺行水，紅花活血化瘀，五加皮強心、利尿，玉竹養(yǎng)心陰以防利水傷正，澤瀉健脾滲濕、利水消腫，桂枝、陳皮補氣健脾[8]。具有益氣溫陽、活血通絡(luò)、瀉肺利水功效，同時具有雍補滯氣、防利水傷正的作用，起到改善患者心功能，增加心肌收縮力、減輕心臟負(fù)荷的作用[9]。本實驗研究結(jié)果提示，大鼠經(jīng)過灌胃8周后，A組和B組大鼠左心室EF值和FS值與C組比較明顯下降，說明阿霉素誘導(dǎo)后大鼠出現(xiàn)明顯心功能減低，B組大鼠心功能較A組明顯上升，說明大鼠經(jīng)芪藶強心膠囊治療后心功能改善。實驗干預(yù)8周后，A組與B組大鼠SAP、DAP、LVMI、LVEDP較模型組顯著升高，±dp/dtmax較模型組顯著降低，與A組大鼠比較，經(jīng)芪藶強心膠囊治療后，B組大鼠SAP、DAP、LVEDP、LVMI較A組明顯下降(P<0.05)，±dp/dtmax顯著升高，提示經(jīng)芪藶強心治療后大鼠血流動力學(xué)好轉(zhuǎn)。B組大鼠MMP-2MMP-9的活性較A組明顯減低。據(jù)此，我們提出芪藶強心膠囊對阿霉素誘導(dǎo)的心力衰竭有明顯的治療作用，可能機制是通過對心肌細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶-2及-9的影響而改善左心室重構(gòu)，但具體作用靶點仍需進一步深入研究。

參考文獻

[1]安欣,孫媛媛,王歸圣.溫陽補心湯對慢性收縮性心力衰竭患者腦利鈉肽水平影響的臨床研究[J].陜西中醫(yī),2015,36(8):969-970.

[2]車宗華,徐有林,丁大植,等.米力農(nóng)聯(lián)合芪藶強心膠囊治療充血性心力衰竭的療效觀察[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2012,21(16):1761-1762.

[3]魏偉,吳西美,李元建,等.藥理實驗方法學(xué)[M].第4版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2010.

[4]王科軍,張秀榮,蘇德成,等.古代醫(yī)家對慢性心衰病因病機的認(rèn)識[J].吉林中醫(yī)藥,2011,21(8):124-125.

[5]潘湦,劉東艷,王妤,等.芪藶強心膠囊治療短暫性腦缺血發(fā)作120例療效觀察[J].陜西醫(yī)學(xué)雜志,2014,43(12):1674-1675.

[6]李紅梅,張萬玲.芪藶強心膠囊治療冠心病慢性心衰36例[J].陜西中醫(yī),2015,36(1):43-44.

[7]王靜,吳時達,閆亞非,等.溫陽法、滋陰法、活血法及復(fù)合法對慢性心力衰竭心室重構(gòu)及MMP-9、TIMP-1的影響[J].陜西中醫(yī),2015,36(9):1140-1142.

[8]王曉剛,鹿艷群,仲秉吉.芪藶強心膠囊聯(lián)合鹽酸曲美他嗪治療慢性心力衰竭40例臨床觀察[J].河北中醫(yī),2014,36(1):19-21.

[9]李凌華,左英,汪君,等.芪藶強心膠囊治療慢性心力衰竭的療效及對腦鈉素和血清炎性因子的影響[J].陜西中醫(yī),2015,36(7):824-825.

(收稿2015-10-21；修回2015-12-10)

通訊作者：△河北省保定市第五醫(yī)院(保定 071000)

【中圖分類號】R541

【文獻標(biāo)識碼】A

doi:10.3969/j.issn.1000-7369.2016.03.049

*河北省自然科學(xué)基金資助項目(H2014104023)