基于腹瀉模型藥效學(xué)試驗(yàn)的白術(shù)飲片等級(jí)研究*

杜洪志，鄭 英，陳志琳，王建科，張 敏，劉亞琴，李 瑋▲

(1貴州中醫(yī)藥大學(xué)，貴州 貴陽(yáng) 550025；2國(guó)藥集團(tuán)同濟(jì)堂(貴州)制藥有限公司，貴州 貴陽(yáng) 550000)

白術(shù)為菊科植物白術(shù)(AtractylodesmacrocephalaKoidz.)的干燥根莖，其性溫、味甘，入脾、胃二經(jīng)，具有健脾益氣、燥濕利水、固表止汗、安胎之功效[1]。為臨床常用的大宗傳統(tǒng)藥材，因其藥性平和，又有補(bǔ)益作用，《神農(nóng)本草經(jīng)》中將其列為上品。白術(shù)中主要含有內(nèi)酯類、苷類、多糖類、揮發(fā)油以及氨基酸等成分[2-5]，具有免疫調(diào)節(jié)、利水、降血脂、降血糖、安胎等藥理作用[6-10]。

中藥飲片質(zhì)量的優(yōu)劣，傳統(tǒng)以外觀性狀為主要判斷依據(jù)，即是“辨狀論質(zhì)”評(píng)價(jià)中藥質(zhì)量[11]。白術(shù)為常用的大宗傳統(tǒng)特色藥材，臨床運(yùn)用廣泛，市場(chǎng)交易量較大，有文獻(xiàn)報(bào)道，白術(shù)商品藥材市場(chǎng)上多按個(gè)頭大小進(jìn)行分等，在1984年版衛(wèi)生部頒布的《七十六種藥材商品規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)》中[12]，白術(shù)藥材以大小為主要?jiǎng)澐忠罁?jù)分為四等，但有研究報(bào)道該商品規(guī)格劃分不符合市場(chǎng)情況，并提出相關(guān)分級(jí)依據(jù)[13]。但是，分級(jí)依據(jù)多為外觀性狀和內(nèi)在質(zhì)控指標(biāo)進(jìn)行綜合分析，由于中藥飲片最終的目的是用于實(shí)際臨床，質(zhì)量的好壞不僅注重內(nèi)在和外在質(zhì)量，更要結(jié)合臨床療效進(jìn)行評(píng)價(jià)，建立藥效學(xué)評(píng)價(jià)模式，進(jìn)一步完善中藥飲片“按質(zhì)論價(jià)”“按質(zhì)應(yīng)用”，從而保證臨床用藥的安全有效，而目前，結(jié)合藥效學(xué)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行白術(shù)飲片等級(jí)劃分的相關(guān)研究未見(jiàn)報(bào)道。

基于此，本文以白術(shù)飲片為研究對(duì)象，根據(jù)傳統(tǒng)外觀性狀的主要評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行等級(jí)劃分，采用番瀉葉“苦寒瀉下”法，建立小鼠腹瀉模型，研究白術(shù)不同等級(jí)飲片對(duì)小鼠腹瀉的改善作用。研究結(jié)果為進(jìn)一步完善白術(shù)飲片等級(jí)評(píng)價(jià)模式和指導(dǎo)臨床用藥提供科學(xué)依據(jù)，同時(shí)，也為其他飲片的等級(jí)質(zhì)量評(píng)價(jià)提供新的研究思路。

1 材料

1.1 動(dòng)物

KM小鼠，SPF級(jí)，體重18～22 g，由長(zhǎng)沙市天勤生物技術(shù)有限公司提供，試驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(湘)2014-0011，分開(kāi)籠子飼養(yǎng)，自由進(jìn)食飲水，室溫20～25 ℃，相對(duì)濕度40%～60%，12 h明暗交替。

1.2 試藥

鹽酸洛哌丁胺膠囊(批號(hào)：170417811，西安楊森制藥有限公司)，生理鹽水(批號(hào)：178040726，辰新藥業(yè)股份有限公司)。白術(shù)飲片采集或采購(gòu)于四川保新、浙江杭州、河北唐山、安徽亳州、貴州遵義共5批，經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)魏升華教授鑒定為菊科植物白術(shù)AtractylodesmacrocephalaKoidz.的干燥根莖。

2 方法和結(jié)果

2.1 白術(shù)飲片傳統(tǒng)等級(jí)劃分要點(diǎn)及方法

通過(guò)文獻(xiàn)資料的查閱及2015版《中國(guó)藥典》對(duì)白術(shù)外觀性狀的描述，將收集的白術(shù)生品飲片進(jìn)行等級(jí)初步劃分，每個(gè)批次擬分成三個(gè)等級(jí)進(jìn)行研究，白術(shù)生品飲片不同等級(jí)劃分指標(biāo)及樣品圖見(jiàn)表1和圖1。

表1 白術(shù)生品飲片不同等級(jí)劃分指標(biāo)

圖1 白術(shù)生品飲片不同等級(jí)樣品圖

2.2 動(dòng)物分組

取體重為18～22 g的健康KM小鼠180只，適應(yīng)環(huán)境5 d后，隨機(jī)分為18組，每組10只，雌雄各半。即正常對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、四川保新一級(jí)飲片組、四川保新二級(jí)飲片組、四川保新三級(jí)飲片組、浙江杭州一級(jí)飲片組、浙江杭州二級(jí)飲片組、浙江杭州三級(jí)飲片組、河北唐山一級(jí)飲片組、河北唐山二級(jí)飲片組、河北唐山三級(jí)飲片組、安徽亳州一級(jí)飲片組、安徽亳州二級(jí)飲片組、安徽亳州三級(jí)飲片組、貴州遵義一級(jí)飲片組、貴州遵義二級(jí)飲片組、貴州遵義三級(jí)飲片組。

2.3 模型建立

除空白對(duì)照組正常喂養(yǎng)，其他組每天給藥9%番瀉葉，給藥量為0.3 mL/10g，連續(xù)灌胃10 d，建立小鼠腹瀉模型。

2.4 給藥方法

陽(yáng)性對(duì)照組灌胃鹽酸洛哌丁胺藥液，空白對(duì)照及模型組灌胃生理鹽水10 mL/kg，給藥量以生藥量計(jì)算20 g/kg，給藥容量為0.2 mL/10g。持續(xù)給藥7 d，于末次給藥后1 h，將已禁食(不禁水)24 h的小鼠灌胃給予墨汁，每只0.2 mL/10g，20 min后脫頸椎處死小鼠，開(kāi)腹，取出小腸及脾臟將小腸拉成直線，測(cè)量小腸的全長(zhǎng)及幽門至黑色前沿的距離。以幽門至黑色前沿的距離占小腸全長(zhǎng)的百分率為小腸推進(jìn)率。

墨汁推進(jìn)率=墨汁在腸內(nèi)推進(jìn)距離(cm)/小腸全長(zhǎng)(cm)×100%

2.5 藥效試驗(yàn)結(jié)果

觀察記錄各組小鼠體重、墨汁推進(jìn)率和脾臟重量，采用SPSS20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，研究白術(shù)不同等級(jí)飲片對(duì)小鼠的健脾作用的影響，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 白術(shù)不同等級(jí)樣品對(duì)小鼠腸推進(jìn)、體質(zhì)量、以及脾臟指數(shù)測(cè)定結(jié)果(n=10)

對(duì)小鼠腸推進(jìn)率的影響：模型組與空白組比較具有極顯著性差異(P<0.01)，結(jié)果表明腹瀉病理模型基本建立；與模型組比較，陽(yáng)性對(duì)照組和白術(shù)不同等級(jí)飲片給藥組均有極顯著性差異(P<0.01)，表明陽(yáng)性藥組與白術(shù)不同等級(jí)飲片給藥組均均有良好的改善小鼠腹瀉的作用。同時(shí)，白術(shù)一級(jí)飲片的改善效果均高于二級(jí)、三級(jí)飲片(P<0.05)，二級(jí)飲片與三級(jí)飲片之間無(wú)顯著性差異(P>0.05)。

對(duì)小鼠體質(zhì)量的影響：模型組與空白組比較具有顯著性差異(P<0.05)，結(jié)果表明腹瀉病理模型對(duì)小鼠體質(zhì)量有顯著影響；與模型組比較，陽(yáng)性對(duì)照組和不同產(chǎn)地白術(shù)一級(jí)飲片組均有顯著性差異(P<0.05)，二級(jí)飲片與三級(jí)飲片組無(wú)顯著性差異(P>0.05)，但體質(zhì)量大部分高于模型組，表明白術(shù)飲片能增加小鼠體重，改善腹瀉模型小鼠的體質(zhì)量。

對(duì)小鼠脾臟指數(shù)的影響：模型組與空白組比較具有顯著性差異(P<0.05)，結(jié)果表明腹瀉病理模型對(duì)小鼠脾臟指數(shù)有顯著影響；與模型組比較，陽(yáng)性對(duì)照組和不同等級(jí)給藥組均有顯著性差異(P<0.05)，且白術(shù)一級(jí)飲片的脾臟指數(shù)均高于二級(jí)、三級(jí)飲片，二級(jí)飲片與三級(jí)飲片組無(wú)顯著性差異(P>0.05)，說(shuō)明白術(shù)一級(jí)飲片對(duì)小鼠脾臟指數(shù)改善作用優(yōu)于二級(jí)、三級(jí)飲片。

3 結(jié)論與討論

通過(guò)白術(shù)不同等級(jí)飲片對(duì)小鼠腹瀉模型的改善作用，與模型組比較，不同等級(jí)給藥組對(duì)小鼠腸推進(jìn)率、體質(zhì)量、脾臟指數(shù)的影響均具有顯著性差異(P<0.05)，表明白術(shù)不同等級(jí)給藥組均有改善小鼠腹瀉作用。同時(shí)，一級(jí)飲片對(duì)小鼠腹瀉模型的改善作用優(yōu)于二級(jí)、三級(jí)飲片(P<0.05)，且二級(jí)、三級(jí)飲片的藥效作用無(wú)顯著性差異(P>0.05)，結(jié)果表明根據(jù)傳統(tǒng)外觀性狀進(jìn)行白術(shù)等級(jí)劃分的結(jié)果中，可將二級(jí)和三級(jí)飲片合并為一個(gè)等級(jí)，即白術(shù)飲片分為兩個(gè)等級(jí)，一級(jí)飲片：長(zhǎng)度(直徑)3～9 cm，厚度2～4 cm，斷面深紅棕色或深褐色，具有多且密集的油室，蜂窩狀，有裂隙，具有較明顯的“菊花紋理”，質(zhì)地較堅(jiān)硬，不易折斷，香氣濃烈；二級(jí)飲片：長(zhǎng)度(直徑)2～8 cm，厚度2～4 cm，斷面紅褐色、紅棕色或黃白色，油室較少且稀疏，或無(wú)油室，蜂窩狀較少或無(wú)蜂窩狀，少有裂隙或無(wú)裂隙，部分具有“菊花紋理”，質(zhì)地堅(jiān)硬，易折斷，有香氣或香氣較淡。

目前，直接用于臨床的白術(shù)飲片，在中藥飲片市場(chǎng)和企業(yè)都以統(tǒng)貨形式進(jìn)行銷售，導(dǎo)致前期藥材的等級(jí)劃分不能有效應(yīng)用于實(shí)際臨床，未能“按質(zhì)應(yīng)用”，從而不能保證臨床用藥的安全有效。通過(guò)文獻(xiàn)資料查閱，已有相關(guān)白術(shù)商品藥材等級(jí)質(zhì)量評(píng)價(jià)的研究報(bào)道[13]，但均以外觀性狀和部分質(zhì)控指標(biāo)為主要?jiǎng)澐忠罁?jù)，然中藥飲片屬于特殊商品，其主要目的和價(jià)值在于治病救人，若沒(méi)有相關(guān)的藥效作支撐，中藥飲片等級(jí)劃分的結(jié)果將與作為藥品的特殊價(jià)值和意義不相符。因此，在傳統(tǒng)等級(jí)劃分的基礎(chǔ)上，結(jié)合相關(guān)的藥效學(xué)試驗(yàn)進(jìn)行考證，找到其中的共性規(guī)律，研究的結(jié)果更接近于實(shí)際臨床，使中藥飲片等級(jí)劃分的依據(jù)更具有科學(xué)性和合理性。

中藥材及中藥飲片的等級(jí)劃分多采用傳統(tǒng)方法與現(xiàn)代科學(xué)方法相結(jié)合的分級(jí)方法，既可以為傳統(tǒng)分級(jí)方法提供科學(xué)的現(xiàn)代科技支撐，也能滿足分級(jí)方法簡(jiǎn)便、實(shí)用的行業(yè)需求。本實(shí)驗(yàn)將外觀性狀和藥效學(xué)試驗(yàn)結(jié)果的有機(jī)結(jié)合起來(lái)，進(jìn)行評(píng)價(jià)分析，從藥效學(xué)角度對(duì)白術(shù)不同等級(jí)飲片進(jìn)行研究，該方法為白術(shù)生品飲片的等級(jí)劃分提供一定參考。同時(shí)，也為其他飲片的“按質(zhì)論價(jià)”提供新的思路。由于收集樣品數(shù)量有限，未來(lái)仍需進(jìn)行更多批次的樣品研究，以進(jìn)一步豐富和完善白術(shù)生品飲片等級(jí)質(zhì)量評(píng)價(jià)體系。