馬錢苷、莫諾苷對(duì)高糖致心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)機(jī)制研究

趙文望， 皮文霞， 蔡寶昌， 封曉鵬

（南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇南京210023）

?

馬錢苷、莫諾苷對(duì)高糖致心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)機(jī)制研究

趙文望， 皮文霞*， 蔡寶昌， 封曉鵬

（南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇南京210023）

摘要：目的 觀察馬錢苷、莫諾苷對(duì)高糖誘導(dǎo)損傷的心肌細(xì)胞增殖、凋亡以及心肌細(xì)胞蛋白表達(dá)的影響來研究其對(duì)心肌細(xì)胞的保護(hù)作用。方法 體外培養(yǎng)乳大鼠原代心肌細(xì)胞，建立模型組（葡萄糖終濃度為30 mmo1/L），空白組（不加藥及葡萄糖），馬錢苷和莫諾苷低、中、高劑量組（培養(yǎng)基中加入終質(zhì)量濃度25、50、100 μg/mL），依次用四唑鹽比色法（MTT法）、DNA斷裂的原位末端標(biāo)記法（TUNEL法）觀察心肌細(xì)胞增殖和凋亡情況、蛋白質(zhì)印跡法（Western b1ot法）觀察心肌細(xì)胞的B淋巴細(xì)胞瘤-2基因（Bc1-2）、Bc1-2相關(guān)X蛋白（Bax）和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 （Caspase-3）蛋白表達(dá)水平。結(jié)果 MTT法顯示，與模型組比較，不同劑量馬錢苷組和莫諾苷組，對(duì)糖尿病心肌細(xì)胞的增殖有不同程度的促進(jìn)作用。TUNEL法表明馬錢苷、莫諾苷均顯著抑制心肌細(xì)胞凋亡，與模型組比較有顯著差異。Western b1ot法中，馬錢苷、莫諾苷能促進(jìn)Bc1-2蛋白表達(dá)，抑制Bax蛋白表達(dá)和Caspase-3酶活性，來抑制心肌細(xì)胞的凋亡。結(jié)論 馬錢苷和莫諾苷均具有促進(jìn)心肌細(xì)胞增殖、抑制其凋亡的現(xiàn)象，具有保護(hù)心肌細(xì)胞的作用。

關(guān)鍵詞：馬錢苷；莫諾苷；心肌細(xì)胞；糖尿病心肌病；保護(hù)機(jī)制

近年來，糖尿病的病發(fā)率逐年升高，繼發(fā)于糖尿病的糖尿病心肌?。╠iabetic cardiomyopathy，DCM）也逐漸成為糖尿病患者死亡的主要原因之一，其發(fā)病率高，危害性大，特發(fā)于糖尿病患者、除外冠心病、高血壓等疾病，以心室舒張或收縮功能障礙及心臟結(jié)構(gòu)改變?yōu)橹饕憩F(xiàn)，最終進(jìn)展為心力衰竭的一種疾?。?］。

山茱萸是山茱萸科植物山茱萸（Cornus officinalis Sieb.et Zucc.）干燥成熟果肉［2］，主治腰膝酸痛、崩漏帶下、內(nèi)熱消渴等，屬中醫(yī)常用的治消渴良藥之一［3］。其主要成分為馬錢苷、莫諾苷、熊果酸等?，F(xiàn)代研究中，Yamabe［4］等表明，山茱萸中環(huán)烯醚萜總苷能促進(jìn)糖尿病并發(fā)的腎臟損傷有關(guān)物質(zhì)的代謝。劉洪［5］等表示山茱萸環(huán)烯醚萜總苷對(duì)II型糖尿病并發(fā)心臟病變有一定的保護(hù)作用。故本實(shí)驗(yàn)主要研究環(huán)烯醚萜總苷中主要活性成分馬錢苷和莫諾苷對(duì)高糖致心肌細(xì)損傷的保護(hù)作用。通過高糖刺激乳大鼠原代心肌細(xì)胞，培養(yǎng)模擬人體糖尿病誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷模型，通過MTT法、TUNEL法和Western b1ot法觀察不同濃度的馬錢苷、莫諾苷對(duì)糖尿病心肌細(xì)胞的增值和凋亡的影響，初步闡明馬錢苷、莫諾苷治療糖尿病心肌病的作用機(jī)制。

1 材料與儀器

1.1 動(dòng)物 新生1～2 d齡SD大鼠，雌雄不限，由南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)SCXK（蘇）2008-0004。

1.2 儀器 YXQ-LS-50立式壓力鍋（上海博訊實(shí)業(yè)有限公司）；SW-CJ-1F超凈工作臺(tái)（江蘇蘇凈集團(tuán)有限公司）；3111 CO2恒溫培養(yǎng)箱（美國FORMA公司）；TGL-16M離心機(jī)（長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)有限公司）；THZ-312臺(tái)式恒溫振蕩器（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；HY-4脫色搖床（江蘇正基儀器有限公司）；IX51生物倒置顯微鏡（OLYMPUS，日本）；XW-80A渦旋振蕩器（江蘇海門其林貝爾儀器制造有限公司）；BL310分析天平（德國Sartorius公司）；UV-2450紫外光度儀（日本SHIMADZU公司）。

1.3 藥品與試劑 青、鏈霉素混合液（批號(hào)KGY002）、SDS-PAGE凝膠電泳試劑盒（批號(hào)KGP113）購自南京凱基生物科技發(fā)展有限公司；胰蛋白酶-EDTA消化液（批號(hào)KGY001）、Western b1ot檢測(cè)試劑盒（批號(hào)KGP1201）、ECL檢測(cè)試劑盒（批號(hào)KGP1123）、Braford蛋白含量檢測(cè)試劑盒（批號(hào)KGA801）均購自南京凱基生物科技發(fā)展有限公司；二甲基亞砜（上海久億化學(xué)試劑有限公司）；DMEM培養(yǎng)基和胎牛血清（美國Gibco公司）；四甲基偶氮唑鹽（北京索來寶科技公司）；PBS（無Ca2 +、Mg2 +，pH 7.2）：NaC1 8.0 g，Na2HPO4.12H2O 2.9 g，KC1 0.2 g，KH2PO40.2 g，加超純水至1 000 mL，攪拌使完全溶解，調(diào)整pH至7.2，0.22 μm濾膜過濾，4℃保存。馬錢苷、莫諾苷由本實(shí)驗(yàn)室從山茱萸中分離、純化得到，經(jīng)HPLC檢測(cè)，純度＞99％。

2 方法

2.1 馬錢苷和莫諾苷的提取分離 取山茱萸生品500 g，6～8倍75％乙醇水浴回流提取2次，每次1 h，過濾，合并2次濾液，減壓回收溶劑至無醇味，得山茱萸提取液。稱取2倍生藥量的大孔樹脂，用95％乙醇浸泡過夜，樹脂處理干凈后，裝柱，用水洗脫至無醇味。取山茱萸提取液過徑高比為1∶12的HPD400的大孔樹脂柱，收集8倍量30％乙醇洗脫劑，減壓濃縮至500 mL。用等體積正丁醇萃取5次，60℃減壓濃縮正丁醇萃取液至適量，轉(zhuǎn)移至蒸發(fā)皿蒸干，得浸膏。用5％甲醇水溶液溶解浸膏，通過YMC反相硅膠柱層析，使用甲醇-水溶劑系統(tǒng)按5％、10％、20％甲醇-水梯度洗脫，收集餾分。根據(jù)TLC法檢驗(yàn)，合并斑點(diǎn)相同的餾分。將10％和20％部位洗脫的相同斑點(diǎn)的收集液冷凍干燥，經(jīng)重結(jié)晶后得馬錢苷和莫諾苷單體，經(jīng)HPLC檢測(cè)，純度＞99％。

2.2 實(shí)驗(yàn)分組 取原代乳鼠培養(yǎng)的心肌細(xì)胞隨機(jī)分為（1）空白組，不加藥及葡萄糖；（2）模型組，葡萄糖終濃度為30 mmo1/L；（3）給藥組，葡萄糖終濃度為30 mmo1/L，馬錢苷、莫諾苷以不同濃度給藥（培養(yǎng)基中加入終質(zhì)量濃度25、50、100 μg/mL），分為低、中、高劑量組。

2.3 新生大鼠心肌細(xì)胞培養(yǎng) 新生1～2 d齡SD大鼠，在75％酒精中浸泡5 min。左手抓握乳鼠，右手持眼科剪，在無菌條件下剪開胸骨劍突下稍左側(cè)的皮膚。換眼科剪，在胸骨劍突下稍左側(cè)打開胸腔，左手輕輕用力，心臟躍出，用眼科彎鑷取心臟心尖部，置于預(yù)溫的PBS中，漂洗3次。將漂洗后的心尖在少量PBS中用眼科剪剪成約1 mm3的小塊，靜止2 min棄上清，向剩余的心肌組織中加入0.125％胰酶溶液10～15 mL，消化10 min，重復(fù)消化，待組織塊基本消失時(shí)，將消化后的細(xì)胞懸液以1 000 r/min離心5 min，加入適量DMEM+10％ FBS重懸細(xì)胞，細(xì)胞懸液用無菌200目過濾器過濾至培養(yǎng)皿中，置37℃、5％ CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2.4 MTT顯色法 分別取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，消化、計(jì)數(shù)、配置成5×104/mL的細(xì)胞懸液，按100 μL每孔接種于96孔板中（每孔5×103個(gè)細(xì)胞），設(shè)3個(gè)復(fù)孔，置于37℃，5％ CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后棄去培養(yǎng)液，PBS清洗2次，用完全培養(yǎng)基稀釋藥物至所需濃度，加入含有不同質(zhì)量濃度藥物的培養(yǎng)基200 μL，模型組加入含有0.2％ DMSO的培養(yǎng)基200 μL，空白組只加200 μL DMEM培養(yǎng)基，置于37℃，5％ CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 h后，每孔加入5 g/LMTT溶液20 μL，繼續(xù)培養(yǎng)4 h后，棄去培養(yǎng)液，加入150 μL DMSO/孔終止反應(yīng)，振蕩10 min，使活細(xì)胞中被MTT還原的甲瓚結(jié)晶完全溶解。在酶聯(lián)儀讀取光密度值（D值），檢測(cè)波長(zhǎng)490 nm。

2.5 TUNEL染色法 將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞消化接種到6孔板中，次日，待細(xì)胞貼壁后，根據(jù)“2.2”項(xiàng)設(shè)置組別與劑量加入相應(yīng)的含藥培養(yǎng)基，同時(shí)設(shè)立空白組。待藥物作用72 h后，用0.25％胰酶（不含EDTA）消化收集細(xì)胞。用PBS洗滌細(xì)胞2次（2 000 r/min離心5 min），收集不多于1×106的細(xì)胞。將細(xì)胞涂于載玻片上，自然晾干細(xì)胞涂片；再將細(xì)胞涂片浸入固定液，室溫（15～25℃）固定1 h，然后PBS漂洗2次。細(xì)胞涂片浸入封閉液中，室溫（15～25℃）封閉10 min，PBS漂洗2次。細(xì)胞涂片浸入通透液中，冰上（2～8℃）促滲2 min，每個(gè)樣本滴加100 μL末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶（TdT）反應(yīng)液，避光濕潤37℃反應(yīng)1 h，在PBS浸泡5 min，清洗3次。加酶標(biāo)親和素，用DAB法顯色，終止顯色，再經(jīng)復(fù)染和封片，最后在光學(xué)顯微鏡觀察。

2.6 Western b1ot法檢測(cè)蛋白表達(dá) 將體外培養(yǎng)的心肌細(xì)胞，吸去培養(yǎng)基后，冷PBS洗2次，在加入適量胰蛋白酶消化液，37℃消化，離心。處理之后按照試劑盒的要求將細(xì)胞裂解液、蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑按比例混合好之后，分別加至各培養(yǎng)皿中，置于4℃搖床平臺(tái)上，溫和振蕩15 min，14 000 r/min，4℃離心15 min，取上清為全蛋白提取物，分裝保存于-70℃。Bradford法通過繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線，測(cè)得蛋白濃度。將樣品蛋白上清與1oading buffer按比例混合好之后，SDS-PAGE膠進(jìn)行電泳，轉(zhuǎn)膜結(jié)束后，將硝酸纖維素（NC）膜放入培養(yǎng)皿中，加入含5％脫脂奶粉的封閉液，搖床振蕩1.5～2 h進(jìn)行封閉，之后洗膜，然后先后加入二抗，ECL化學(xué)發(fā)光檢測(cè)蛋白條帶，使用Ge1-Pro32軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行灰度分析。

2.7 統(tǒng)計(jì)分析 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析完成，計(jì)量數(shù)據(jù)資料先進(jìn)行正態(tài)分布檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布者，兩組間比較采用獨(dú)立t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析；不符合正態(tài)分布者進(jìn)行數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化使其符合正態(tài)分布或采用非參數(shù)檢驗(yàn)。以P＜0.05、P＜0.01作為顯著性和極顯著性差異的標(biāo)準(zhǔn)。

3 結(jié)果

3.1 MTT法檢測(cè)馬錢苷、莫諾苷對(duì)高糖致心肌細(xì)胞的增殖的影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示，30 mmo1/L的葡萄糖作用心肌細(xì)胞24 h后，其凋亡率增加（P＜0.05）。與模型組比較，馬錢苷和莫諾苷可以明顯促進(jìn)糖尿病心肌細(xì)胞的增殖，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，糖尿病心肌細(xì)胞的增殖情況不同。作用24 h后，馬錢苷和莫諾苷低、中、高劑量組促進(jìn)糖尿病心肌細(xì)胞的增殖不顯著（P＞0.05）；作用48 h后，馬錢苷高、中組促進(jìn)糖尿病心肌細(xì)胞增殖顯著（P＜0.05），莫諾苷高劑量組促進(jìn)糖尿病心肌細(xì)胞增殖顯著（P＜0.05）；作用72 h后，馬錢苷和莫諾苷低、中、高劑量組促進(jìn)糖尿病心肌細(xì)胞的增殖非常顯著（P＜0.01）。

3.2 TUNEL法檢測(cè)馬錢苷、莫諾苷對(duì)高糖致心肌細(xì)胞凋亡的影響 如表2和圖1所示，模型組中糖尿病心肌細(xì)胞凋亡率增加，與空白組比較，有顯著性差異（P＜0.01）。與模型組比較，馬錢苷低、中、高劑量組能降低糖尿病心肌細(xì)胞的凋亡率，與模型組比較有顯著差異（P＜0.05）；莫諾苷低、中、高劑量組能降低糖尿病心肌細(xì)胞的凋亡率，與模型組比較有顯著差異（P＜0.05）。

表1　馬錢苷和莫諾苷對(duì)高糖致心肌細(xì)胞增殖的影響（x± s，n=6）

表2　Tunel法檢測(cè)莫諾苷和馬錢苷對(duì)高糖致心肌細(xì)胞凋亡的影響（±s，n=3）

表2　Tunel法檢測(cè)莫諾苷和馬錢苷對(duì)高糖致心肌細(xì)胞凋亡的影響（±s，n=3）

注：與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別　　細(xì)胞凋亡率/％莫諾苷　　馬錢苷空白組　0.000±0.000**　0.000±0.000**模型組　100.000±0.000　 100.000±0.000低劑量組　57.667±3.512*　59.667±5.508*中劑量組　45.000±3.606*　51.000±4.583*高劑量組　32.000±2.000*　37.000±2.646*

圖1　TUNEL染色法檢測(cè)糖尿病心肌細(xì)胞凋亡的影響

3.3 Western b1ot法檢測(cè)莫諾苷和馬錢苷對(duì)高糖致心肌細(xì)胞蛋白表達(dá)的影響 為了各組數(shù)據(jù)方便平行比較，實(shí)驗(yàn)中將空白組中Caspase-3/β-ACTIN與Bc1-2/Bax的比值設(shè)定為1，其他高糖組與高中低劑量組數(shù)據(jù)按等比例轉(zhuǎn)換處理而得。由表3可知，心肌細(xì)胞經(jīng)高糖造模后，與空白組比較Caspase-3/β-ACTIN值增加，有顯著性差異（P＜0.01）。馬錢苷與模型組比較，低劑量組Caspase-3/β-ACTIN減少，但不顯著（P＞0.05），中、高劑量組Caspase-3/β-ACTIN顯著減少（P＜0.05，P＜0.01）；馬錢苷低劑量組Bc1-2/ Bax增加，但增加不顯著（P＞0.05），中、高劑量組Bc1-2/Bax顯著增加（P＜0.01）。

莫諾苷與模型組比較，低劑量組Caspase-3/β-ACTIN減少，但不顯著（P＞0.05），中、高劑量組Caspase-3/β-ACTIN顯著減少（P＜0.05，P＜0.01）；莫諾苷低、中劑量組Bc1-2/Bax增加，但增加不顯著（P＞0.05），高劑量組Bc1-2/Bax顯著增加（P＜0.05）。

表3　W estern blot法檢測(cè)馬錢苷和莫諾苷對(duì)高糖致心肌細(xì)胞蛋白表達(dá)的影響（±s，n=3）

表3　W estern blot法檢測(cè)馬錢苷和莫諾苷對(duì)高糖致心肌細(xì)胞蛋白表達(dá)的影響（±s，n=3）

注：與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別　Caspase-3/β-ACTIN　Bc1-2/Bax空白組　1.000±0.000**　1.000±0.000**模型組　3.092±1.322　0.105±0.067馬錢苷低劑量組　3.012±1.311　0.163±0.005馬錢苷中劑量組　2.405±0.903*　0.425±0.018**馬錢苷高劑量組　1.936±0.539**　0.516±0.061**莫諾苷低劑量組　2.920±1.273　0.134±0.046莫諾苷中劑量組　2.440±1.136*　0.218±0.056莫諾苷高劑量組　2.260±1.307**　0.343±0.020*

4 討論

糖尿病心肌病是糖尿病重要的并發(fā)癥之一，目前已明確刺激和促進(jìn)糖尿病心肌病各種并發(fā)癥發(fā)作的重要因素是高血糖。糖尿病大鼠模型在大于16.6 mmo1/L的高血糖狀態(tài)下5～7 d即可出現(xiàn)特異性心肌病變［6］。故實(shí)驗(yàn)體外培養(yǎng)乳大鼠原代心肌細(xì)胞建立高血糖模型，模擬人體糖尿病環(huán)境構(gòu)建糖尿病性心肌細(xì)胞損傷模型，旨在觀察馬錢苷和莫諾苷對(duì)高糖誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞的保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)中30 mmo1/L的葡萄糖作用心肌細(xì)胞24 h后，其凋亡率均增加，與空白組比較，差異顯著，說明本次實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ头€(wěn)定可靠。糖尿病心肌病確切的發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，但導(dǎo)致其發(fā)病的根本原因大致為心肌細(xì)胞糖脂代謝異常、心肌細(xì)胞異常凋亡、胰島素抵抗和鈣穩(wěn)態(tài)失衡，心肌纖維化以及心臟自主神經(jīng)調(diào)節(jié)異常等。而其中心肌細(xì)胞的增殖和凋亡對(duì)糖尿病心肌病的病變發(fā)展起著重要的作用。在高血糖環(huán)境下，氧化應(yīng)激增加導(dǎo)致信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑改變，引起異?；虮磉_(dá)，能激活細(xì)胞的程序化死亡［7］，其機(jī)制可能為血糖濃度的升高導(dǎo)致胰島B細(xì)胞表面凋亡基因Bad、Bik、Bax、Bid的過度表達(dá)而抑制凋亡抑制基因Bc1-2的表達(dá)，從而誘導(dǎo)胰島B細(xì)胞的凋亡［8］。因此，能否促進(jìn)心肌細(xì)胞增殖與抑制其凋亡成為治療糖尿病心肌病的關(guān)鍵。于是本實(shí)驗(yàn)采用MTT法、TUNEL法和Western b1ot法對(duì)山茱萸的有效成分馬錢苷和莫諾苷對(duì)高糖致?lián)p傷的心肌細(xì)胞的增殖與凋亡的影響進(jìn)行研究。

MTT法中馬錢苷和莫諾苷作用于糖尿病心肌細(xì)胞48 h 和72 h內(nèi)，隨時(shí)間加長(zhǎng)，促進(jìn)心肌細(xì)胞增值越明顯，且心肌細(xì)胞也隨著馬錢苷、莫諾苷劑量增加，效果更明顯。TUNEL法染色之后，與模型組相比，馬錢苷和莫諾苷給藥組低、中、高劑量組均能降低心肌細(xì)胞的凋亡率，且與模型組比較有顯著差異，與MTT法結(jié)果一致，說明馬錢苷和莫諾苷具有抑制心肌細(xì)胞凋亡，具有保護(hù)心肌細(xì)胞的作用。本實(shí)驗(yàn)Western b1ot法主要觀察高糖誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞的Bc1-2、Bax和Caspase-3蛋白表達(dá)水平。其中，Bc1-2主要功能是促進(jìn)細(xì)胞的生存，抑制細(xì)胞的凋亡［9］，Bax的增高則促進(jìn)細(xì)胞凋亡。在正常細(xì)胞中Bc1-2與Bax-2二者相互協(xié)調(diào)以維持細(xì)胞的生存，故通過檢測(cè)二者的比值可推斷細(xì)胞凋亡的變化情況［10］。另外，Caspase-3是凋亡的核心，活化的Caspase-3能特異性地切割不同底物導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。本實(shí)驗(yàn)中馬錢苷、莫諾苷給藥組中，Bc1-2蛋白的表達(dá)明顯增加，Bax蛋白的表達(dá)降低，Caspase-3酶活性降低，使得Bc1-2/ Bax值增加，Caspase-3/β-ACTIN值降低，進(jìn)而減少細(xì)胞的凋亡。日本學(xué)者Park C H［11］等研究馬錢苷對(duì)II型糖尿病db/db類小鼠肝中高血糖激活的信號(hào)通路的抵抗作用中，發(fā)現(xiàn)馬錢苷能通過增加蛋白Bc1-2的表達(dá)對(duì)抗II型糖尿病相關(guān)肝病的氧化應(yīng)激反應(yīng)，這與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果相似，說明馬錢苷、莫諾苷具有抑制細(xì)胞的凋亡，延長(zhǎng)細(xì)胞壽命作用，改善其心功能。

3個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果均一致表明山茱萸的有效成分馬錢苷和莫諾苷起到保護(hù)心肌細(xì)胞的作用，作用機(jī)制可能表現(xiàn)為啟動(dòng)心肌細(xì)胞的增殖活性，改變氧化應(yīng)激，調(diào)節(jié)Bc1-2、Bax 和Caspase-3蛋白的表達(dá)而抑制心肌細(xì)胞凋亡。因此，可以推測(cè)馬錢苷和莫諾苷在增強(qiáng)心臟功能，治療糖尿病心肌病上有巨大的潛力，有待作進(jìn)一步開發(fā)研究。

參考文獻(xiàn)：

［1］ Murarka S，Movahed M R.Diabetic cardiomyopathy［J］.J Card Fail，2010，16（12）：971-979.

［2］ 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：2010年版一部［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

［3］ 宋尚華.山茱萸活性成分提取分離及其治療糖尿病并發(fā)癥研究［D］.重慶：西南大學(xué)，2013.

［4］ Yamabe N，Kang K S，Matsuo Y，etal.Identification ofantidiabetic effectof iridoid g1ycosides and 1ow mo1ecu1arweight po1ypheno1 fraction of Corni Fructus，a constituent of Hachimi-jiogan，in STZ induced diabetic rats［J］.Biol Pharm Bull，2007，30（7）：1289-1296.

［5］ 劉 洪，許慧琴，時(shí) 艷.山茱萸環(huán)烯醚萜總苷對(duì)2型糖尿病心臟病變大鼠胰島素抵抗及血脂含量的影響［J］.中藥藥理與臨床，2007，23（3）：36-39.

［6］ Schaffer S W，Ba11ard C C，Boerth S，et al.Mechanisms under1ying depressed Na+/Ca2 +exchanger activity in the diabetic heart［J］.Cardiovasc Res，1997，34（1）：129-136.

［7］ 趙凌云，田紹前，劉曉紅，等.糖尿病心肌病的發(fā)病機(jī)制［J］.中國糖尿病雜志，2013，21（6）：571-573.

［8］ Federici M，Hriba1M，Perego I，et al.High g1ucose causes apoptosis in cu1tured human pancreatic is1ets of Langerhans，a potentia1 ro1e for regu1ation of specific Bc1 fami1y genes toward an apoptotic ce11death program［J］.Diabetes，2001，50（6）：1290-1301.

［9］ 趙莉平，安 榮，丁 雯，等.糖心樂對(duì)糖尿病心肌病大鼠心功能及心肌細(xì)胞凋亡的影響［J］.陜西中醫(yī)，2014，5 （5）：615-618.

［10］ Aksaka1E，Akaras N，Kurt M，et al.The ro1e of oxidative stress in diabetic cardiomyopathy：an experimenta1 study［J］. Eur Rev Med Pharmacol Sic，2011，15（11）：1241-1246.

［11］ Park CH，Tanaka T，Kim JH，et al.Hepato-protective effects of 1oganin，iridoid g1ycoside from Corni Fructus，against hyperg1ycemia-activated signa1ing pathway in 1iver of type 2 diabetic db/db mice［J］.Toxicology，2013，290（1）：14-21.

*通信作者：皮文霞（1968—），女，副教授，研究方向?yàn)橹兴帉W(xué)。Te1：（025）85811512，E-mai1：piwenxia@163.com

作者簡(jiǎn)介：趙文望（1990—），女，碩士生，研究方向?yàn)橹兴帉W(xué)。Te1：18351895679，E-mai1：zhaowenwang100@sina.cn

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（81274056）；江蘇高校優(yōu)勢(shì)學(xué)科建設(shè)工程資助項(xiàng)目（DE63063683）

收稿日期：2015-01-22

doi：10.3969/j.issn.1001-1528.2016.01.036

中圖分類號(hào)：R966

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

文章編號(hào)：1001-1528（2016）01-0160-04