半葉紫菜游離絲狀體培育技術(shù)

唐興本，陳百堯，連紹興，薛學(xué)坤，龔琪本，安健，伏光輝，孫苗苗

（1.連云港市海洋與水產(chǎn)科學(xué)研究所，江蘇連云港222046；2.中科院海洋研究所，山東青島266071；3.連云港市海洋與漁業(yè)局，江蘇連云港222000）

半葉紫菜游離絲狀體培育技術(shù)

唐興本1，陳百堯1，連紹興2，薛學(xué)坤3，龔琪本1，安健1，伏光輝1，孫苗苗1

（1.連云港市海洋與水產(chǎn)科學(xué)研究所，江蘇連云港222046；2.中科院海洋研究所，山東青島266071；3.連云港市海洋與漁業(yè)局，江蘇連云港222000）

中國是世界紫菜的主要生產(chǎn)國和出口國，而主要栽培種類只有條斑紫菜和壇紫菜兩個品種，養(yǎng)殖品種相對比較單一，而紫菜新品種的開發(fā)和利用首要解決的一個問題是苗種培育，也就是解決紫菜絲狀體的質(zhì)與量的問題。

我國的半葉紫菜主要分布在山東青島至遼寧大連的黃海西部海區(qū)，通過培養(yǎng)半葉紫菜的游離絲狀體，用游離絲狀體接種貝殼進行半葉紫菜苗種培育，或者將半葉紫菜游離絲狀體培養(yǎng)成熟，直接用游離絲狀體在半葉紫菜網(wǎng)簾上采集殼孢子，培養(yǎng)半葉紫菜的游離絲狀體，在一定程度上可以及時、足量、高質(zhì)量的解決網(wǎng)簾上半葉紫菜海上養(yǎng)殖的苗種供應(yīng)問題。

迄今為止，對半葉紫菜葉狀體的研究比較多，也有個別絲狀體培育成苗的研究，但未見關(guān)于半葉紫菜游離絲狀體培育技術(shù)方面的系統(tǒng)報道。

1　使用種菜、工具、用水的準備

1.1種菜準備

2013年2月15日上午，在山東省青島市附近島嶼的巖石上，找到有半葉紫菜葉狀體的巖石，先鏟掉巖石上的藤壺、牡蠣殼，撿掉雜草、塊狀物，反復(fù)用干凈的海水盡可能的清除巖石和半葉紫菜葉狀體上的浮泥，將全部的紫菜葉狀體采集放在水桶里，到一個安全方便的地方，再次挑選長度大于10 cm的葉狀體，要求葉狀體完整、無畸形、無病斑、無難以去除的附著物、表面具光澤，把葉狀體放在裝水的帶蓋的塑料桶內(nèi)，之后運到江蘇連云港的省紫菜良種繁育場，待處理。

1.2器具消毒準備

處理種菜、果孢子的用具有解剖盤、解剖刀、毛筆、紗布、脫脂棉、解剖剪刀、鑷子、一次性手套、玻璃培養(yǎng)皿、50 mL三角燒瓶20個等；擴增的用具有量筒、量杯，100 mL、250 mL、500 mL三角燒瓶，3 000 mL、10 000 mL細口玻璃瓶等；消毒用具有酒精燈、酒精噴壺、燒水的鍋、電爐、70%的消毒酒精等。

小型器皿放在燒水的鍋內(nèi)沸水消毒；不能加熱的器具酒精消毒；三角燒瓶蒸煮消毒；必要時用酒精噴壺消毒；房間用紫外線消毒，在半葉紫菜送到良種室前，做好上述消毒準備工作。

1.3培養(yǎng)海水的準備

所用海水符合養(yǎng)殖用水要求，鹽度28，經(jīng)過黑暗沉淀，再經(jīng)90℃加溫消毒處理，在半葉紫菜到良種室前，準備好兩份海水備用，一份是10 000 mL加熱消毒的海水，一份是10 000 mL添加營養(yǎng)鹽的培養(yǎng)液，前一份是處理種菜使用，后一份是將果孢子培養(yǎng)成游離絲狀體時使用。

2　制作半葉紫菜游離絲狀體

2.1處理種菜

2月16日上午，在保種室的操作車間的操作臺上，先選擇個體大的半葉紫菜葉狀體，平攤在解剖盤里，用脫脂棉蘸取消毒海水，反復(fù)正反兩面擦洗半葉紫菜葉狀體，操作2～3次。然后，在白瓷盤中裝消毒海水，用毛筆仔細逐個正反兩面洗刷葉狀體2～3次。用消毒鑷子夾半葉紫菜葉狀體放入帶蓋的廣口瓶中，注入消毒海水，加蓋，往復(fù)振蕩廣口瓶，洗滌半葉紫菜葉狀體。之后從廣口瓶中取出葉狀體，用濾紙吸掉藻體上海水，將紫菜葉狀體平擺在洗刷并消毒的笊簾中，用消毒紗布蓋在葉狀體上，進行陰干刺激24 h。

2.2種菜放散果孢子

2月17日，在多個三角燒瓶內(nèi)，分別添加40 mL培養(yǎng)液。

將種菜平攤在解剖盤中，用解剖刀在半葉紫菜葉狀體的端部和前部，各取5 cm2大小的葉狀體小塊，用鑷子夾入50 mL的三角燒瓶中，每個瓶子1塊，共在20個小三角燒瓶中投放半葉紫菜葉狀體小塊。每個三角燒瓶加上標簽，紀錄紫菜種的名稱、來源時間與地點、性狀等，整個操作爭取在在無菌的條件下進行。將三角燒瓶放在僻靜的地方，3～5 d搖動瓶子1次，一方面促進殼孢子大量放散，另一方面讓果孢子均勻的沉淀于瓶底，3月20日用鑷子把種菜取出。這期間，光線強度為50～200 lx，水溫15～20℃，鹽度28。

3　半葉紫菜游離絲狀體的擴增

3.1剛接種絲狀體的換瓶

4月30日—5月10日，挑選、整理三角燒瓶內(nèi)游離絲狀體，將肉眼觀察有明顯綠藻、硅藻、藍藻等污染以及肉眼還沒有觀察到絲狀體的瓶子，全部清理。通過統(tǒng)計，20個50 mL的三角燒瓶，硅藻污染7個，肉眼看不到游離絲狀體的5個，藍藻污染的1個，破碎瓶子1個，成功培育出無污染的游離絲狀體6個，成功率30%。

在室內(nèi)操作臺上，準備10個100 mL三角燒瓶和2 000 mL加熱處理的海水，在2 000 mL海水中加入營養(yǎng)液制成培養(yǎng)液。由于大部分半葉紫菜游離絲狀體貼附在三角燒瓶底部或瓶壁，操作時用消過毒的毛筆將藻絲刷離瓶底或瓶壁，然后將藻絲及其原培養(yǎng)液倒入準備好的100 mL三角燒瓶中，加入新的培養(yǎng)液到100 mL。用白紙封口放在適當位置，貼上預(yù)先準備好的標簽，這樣一個換瓶子的操作就結(jié)束了，在這里要特別說明的是整個操作要做到相互隔離，即每一個換瓶操作的器皿、工具、一次性手套等都是專用的，共同使用的器具在進行下一個操作時，要重新消毒處理；其二，在每一個換瓶操作中，每一個環(huán)節(jié)都要注意消毒處理，盡量減少每個環(huán)節(jié)出現(xiàn)絲狀體污染的可能性。

營養(yǎng)液的肥料主要為硝酸鈉、磷酸二氫鉀、檸檬酸鐵、碘化鉀等，施肥量為氮14×10-6、磷7×10-6、鐵1×10-6、鉀0.1×10-6，由于培養(yǎng)期間，培養(yǎng)液會不斷的蒸發(fā)，為了穩(wěn)定培養(yǎng)液的鹽度，在換水間隔期間，根據(jù)實際情況，在培養(yǎng)液中加入一定量的蒸餾水。在此期間，光線強度為150～300 lx，水溫15～20℃，鹽度28。

3.2游離絲狀體的擴種培養(yǎng)

5月25日以后，開始了半葉紫菜游離絲狀體的擴增操作，由于半葉紫菜養(yǎng)殖試驗、推廣尚處于探索階段，該良種場主要進行了半葉紫菜游離絲狀體保種和小規(guī)模的擴增，用果孢子培育的良種游離絲狀體數(shù)量也有限，具體擴增的方法參照條斑紫菜游離絲狀體培育的相關(guān)技術(shù)操作。

4　半葉紫菜游離絲狀體的保種

4.1半葉紫菜游離絲狀體保種方法

保種主要參照條斑紫菜游離絲狀體的保種方法。一級保種∶將純凈游離絲狀體分裝于試管或小三角燒瓶中，置于展示柜中，進行長年保存。二級保種∶取部分一級保存的游離絲狀體，分裝于100 mL三角燒瓶內(nèi)，置于10～15℃、100～120 lx環(huán)境中培養(yǎng)，控制游離絲狀體低速增長，保證隨時擴增需要。

4.2半葉紫菜游離絲狀體保種效果

采取液相低溫保存半葉紫菜游離絲狀體。從目前的情況看，保存的半葉紫菜游離絲狀體，絕大多數(shù)形態(tài)結(jié)構(gòu)正常、狀態(tài)良好，保持原種品系特性。

5　半葉紫菜游離絲狀體的形態(tài)特點

對半葉紫菜游離絲狀體、壇紫菜游離絲狀體、條斑紫菜游離絲狀體培育形態(tài)進行了觀察，并將它們的形態(tài)特點進行了比較，形成了一點粗淺的認識。

半葉紫菜游離絲狀體適應(yīng)溫度范圍比較廣，生長迅速，紫黑色，為豆粒狀的舒展開來的藻絲團，無明顯雜藻、無不健康藻絲團；壇紫菜游離絲狀體適應(yīng)溫度高、鹽度高，生長不成團，而是成單絲，長長的，容易纏在散氣石、氣管等地方；條斑紫菜游離絲狀體適應(yīng)溫度偏低，適應(yīng)環(huán)境能力因產(chǎn)地不同而不同，該保種室的游離絲狀體，以日本的條斑紫菜游離絲狀體適應(yīng)環(huán)境能力最強，生長速度最快。

doi:10.3969/j.issn.1004-2091.2016.03.013

收稿日期：（2015-07-09）