龍牙楤木多糖在大鼠體內的藥代動力學研究

徐　倩　韓真賢　趙　宏3

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龍牙楤木多糖在大鼠體內的藥代動力學研究

徐倩1韓真賢2趙宏3

【摘要】目的研究龍牙楤木多糖在大鼠體內的藥代動力學。方法大鼠單次口服龍牙楤木多糖后，采用高效液相色譜與1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）柱前衍生方法測定大鼠血漿中的龍牙楤木多糖。色譜柱為Agilent Zorbax XDB-C18柱（5 μm，150 mm×4.6 mm），流動相為0.1mol/L磷酸鹽溶液（pH6.7）:乙腈=83:17。結果血清樣品中，龍牙楤木多糖的線性范圍為5.0～100.0 μg/ml（r=0.998 8）；高、中、低3種不同濃度的日內RSD值分別為4.12%、6.28%、6.93%；日間RSD值分別為4.07%，6.50%，6.85%；相對回收率分別為88.0%、93.6%、95.07%。單劑量給藥后，大鼠體內的藥代動力學過程符合開放2室模型，主要藥代動力學參數(shù)分別為Cmax：61.15 μg/ml，tmax：94.57 min，AUC：20421.60 min/ （μg·ml），t1/2ka：34.37，t1/2ke：149.17。結論高效液相色譜與PMP柱前衍生法測定大鼠血漿中的龍牙楤木多糖的方法專屬性強，結果可靠。

【關鍵詞】高效液相色譜；1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮；龍牙楤木多糖；大鼠；血漿

1大慶市第三醫(yī)院，黑龍江大慶163712

2大慶油田總醫(yī)院，黑龍江大慶163001

3佳木斯大學藥學院，黑龍江大慶154007

【Key words】High Performance Liquid Chromatography;PMP;Rats;Plasma;Aralia elata polysaccharide

龍牙楤木[Aralia elata(Miq.)Seem.]為五加科楤木屬植物，別名遼東楤木、刺老鴉，味辛、平，有小毒，據(jù)《本草綱目》記載其具有除風疾、治水瘤、補腎腰、壯筋骨等作用[1]，主治神經(jīng)衰弱、風濕性關節(jié)炎、糖尿病、胃痙攣、便秘、外傷出血、陽痿、肝炎。目前，國內外對龍牙楤木的皂苷類化合物、黃酮類化合物、揮發(fā)油類化合物及氨基酸等研究較多[2-4]，而對于龍牙楤木多糖（aralia elata polysaccharides,AEPS）的報道相對較少。藥理研究表明，AEPS對小鼠艾氏腹水癌、小鼠肉瘤、小鼠網(wǎng)狀組織細胞白血病均有抑制作用，可明顯延長患病小鼠的生存期并抑制腫瘤細胞增生[5]，具有抗輻射損傷作用[6]。但有關AEPS藥代動力學方面的報道[7-11]幾乎沒有。本研究采用高效液相色譜與PMP柱前衍生方法[11-15]測定口服給藥后AEPS在大鼠血漿中的濃度，就AEPS在大鼠體內的藥代動力學特點進行探討，現(xiàn)報道如下。

1　儀器與試劑

1.1儀器美國Agilent 1100 LC（美國安捷倫公司）；TGL-16M臺式高速冷凍離心機（長沙平凡儀器儀表有限公司）；DZG-6050型真空干燥箱（上海森信實驗儀器有限公司）。

1.2藥品與試劑AEPS由佳木斯大學藥學院提供（含量＞99%），批號：20140716；色譜純乙腈（山東禹王實業(yè)有限化工分公司）；色譜純甲醇（天津市北方天醫(yī)化學試劑廠）；1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP，天津市科密歐化學試劑開發(fā)中心）；其他試劑均為分析純。

1.3動物Wista大鼠，體重（180±10）g，由佳木斯動物實驗中心提供。

2　方法

2.1色譜條件色譜柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18（5 μm，150 mm×4.6 mm）；流動相：0.1 mol/L磷酸鹽溶液（pH6.7）:乙腈=83:17；流速：1.0 ml/min；λmax：245 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：50 μl。

2.2血清樣品處理取血清1 ml，加入5%高氯酸1 ml，混勻后，10 000 r/min，離心15 min（離心半徑為0.1 m），取上清液于55 ℃真空干燥箱內干燥，殘渣用1 ml蒸餾水溶解，加入1 ml三氟乙酸（2mol/L）水解110 ℃，2 h；水解后真空干燥，殘渣溶于1 ml氨水中。取100 μl氨水溶液與100 μl PMP甲醇溶液（0.5 mol/L）混合，70 ℃下反應30 min，取出后冷卻至室溫，加入0.5 ml蒸餾水，真空干燥，殘渣用1 ml蒸餾水與1 ml氯仿溶解，充分震蕩后除去有機相，重復3次，水相過0.22 μm微孔濾膜，取50 μl進樣。

2.3標準曲線制備取大鼠血清100 μl，精密加入不同量的葡萄糖貯備液，使其濃度分別為5.0、10.0、25.0、50.0、75.0、100.0 μg/ml，按2.2項下方法處理過程分析，以樣品峰面積（A）對濃度（C）做線性回歸。

泵站機電設備診斷故障的常用方式主要包括溫度檢測、鐵譜診斷、振動檢測等。溫度檢測通過測量機電設備的運行溫度和環(huán)境溫度，當溫度發(fā)生異常時溫度檢測系統(tǒng)將發(fā)出警報，此刻維護檢修人員將按照設備運行狀況對設備進行診斷。鐵譜診斷方法主要通過觀測設備元器件的潤滑程度以對機電設備的運行情況進行診斷，潤滑油能使得泵站機電設備在高梯度和強磁場環(huán)境下維持良好的運行形態(tài)，按照所提取的鐵屑密度制備光譜片，進而體現(xiàn)設備元件的磨損狀況。振動檢測主要利用振動頻率擴大器以促使傳感器振動信號被放大，接著監(jiān)測振動的峰值情況，設備檢修維護人員通過研究振動狀況統(tǒng)計結果，可清楚掌握設備的能量轉化狀況。

2.4回收率與精密度試驗取大鼠血清0.5 ml，精密加入不同量的AEPS貯備液，濃度分別為10.0、50.0、75.0 μg/ml。按2.2項下方法處理后，于同日內連續(xù)測定5次，5 d內重復測定，評價本方法回收率及日內、日間RSD。

2.5穩(wěn)定性試驗取大鼠血清0.5 ml，精密加入不同量的AEPS貯備液，濃度分別為10.0、50.0、75.0 μg/ml，一份置4 ℃冷藏保存，另一份置－20 ℃冷凍保存，連續(xù)5 d取樣，按2.2項下方法處理后，考察樣品在4 ℃及－20 ℃的穩(wěn)定性。

2.6試驗方案Wista大鼠15只，體重180～240 g，禁食12 h，隨機分為5組，按200 mg/kg口服AEPS溶液，于給藥前及給藥后20、40、60、90、120、150、180、210、240、300、360、720、1080、1440 min取大鼠眼底靜脈血，將血樣以10 000 r/min離心5 min（離心半徑為0.1 m），轉移上層血清，按2.2項下方法處理后進樣。

3　結果與討論

3.1標準曲線按2.3項下方法，結果表明血清中AEPS在5.0～100.0 μg/ml濃度范圍內線性關系良好，標準曲線回歸方程為y=51.097x+521.25（r=0.9988），見圖1

圖1　大鼠血清中的龍牙楤木多糖血藥濃度標準曲線

3.2回收率與精密度按2.4項下方法，大鼠血清中AEPS的高、中、低的相對回收率分別為88.0%、93.6%、95.07%。大鼠血清中，高、中、低3種不同濃度的日內RSD值分別為4.12%、6.28%、6.93%；日間RSD值分別為4.07%、6.50%、6.85%，見表1。

3.3穩(wěn)定性按2.5項下方法，大鼠血清中AEPS的穩(wěn)定性見表2。

3.5藥代動力學參數(shù)大鼠單劑口服龍牙楤木多糖溶液后，血藥濃度經(jīng)3P97生物等效性軟件處理，按二室開放模型計算藥代動力學參數(shù)，見表3。

表1　大鼠體內AEPS日內、日間RSD

表2　大鼠血清中AEPS在不同溫度下的穩(wěn)定性

圖2　大鼠灌胃龍牙楤木多糖后血藥濃度-時間曲線(n=5)

表3　大鼠灌胃給藥AEPS后的藥代動力學參數(shù)

由表3可知，大鼠灌胃給藥后的吸收相和消除相半衰期表明，AEPS在大鼠體內吸收較快，消除較慢，有效血藥濃度維持時間較長。本研究所獲得的體內藥代動力學參數(shù)，可為臨床藥學深入研究提供理論依據(jù)。

3.6小結本研究首次建立高效液相色譜與PMP

柱前衍生方法測定AEPS在大鼠體內藥代動力學，該方法反應條件較溫和[16-20]，樣品用量少，RSD和重現(xiàn)性均較好，操作簡單，能夠滿足龍牙楤木的藥代動力學研究。

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Pharmacokinetics of Aralia elata Polysaccharide in Rats

Xu QianHan ZhenxianZhao Hong

【Abstract】ObjectiveTo study the Pharmacokinetics of Aralia elata polysaccharide in Rats.MethodsFollowing p.o.administration to rats,the use of high-performance liquid chromatography with 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone (PMP)were used to determine pre-column derivatization in rat’s plasma polysaccharide Aralia elata.Agilent Zorbax XDB-C18column(5 μm,150 mm×4.6 mm I.D.)was used with a mobile phase consisting of 0.1 mol/L Phosphate solution (pH6.7):Acetonitrile=83:17.ResultsThe linear range of Aralia elata polysaccharide in serum was 5.0～100.0μg/ml (r=0.9988) and the High,the medium and the low concentrations of three different intraday RSD values were 4.12%,6.28%,6.93%;day RSD values were 4.07%,6.50%,6.85%;The relative recoveries were 88.0%,93.6%, 95.07%. After single dosage for medicine,the rats in vivo's medicine generation of dynamics process tallies opens the two room of models,the main medicine generation of dynamics parameter respectively is Cmax:61.15μg/ml,tmax: 94.57min, AUC: 20421.60 min(μg·ml),t1/2ka:34.37,t1/2ke:149.17.ConclusionThe methods of use high-performance liquid chromatography with PMP were used to determine pre-column derivatization in rat’s plasma polysaccharide Aralia elata is specific and reliable.

作者簡介：徐倩（1982.11-），碩士學位，主管藥師。研究方向：黃銅衍生物的提取及應用

【中圖分類號】R774.1

【文獻標志碼】A【DOI】10.12010/j.issn.1673-5846.2016.02.006