氣相色譜法測定冬瓜子中4種脂肪酸的含量

李慧峰，荊 然，程艷剛，裴妙榮

（1.山西中醫(yī)學(xué)院，山西太原030024； 2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江哈爾濱150040）

氣相色譜法測定冬瓜子中4種脂肪酸的含量

李慧峰1，荊 然1，程艷剛2，裴妙榮1

（1.山西中醫(yī)學(xué)院，山西太原030024； 2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江哈爾濱150040）

●中醫(yī)藥學(xué)在世界上首先發(fā)現(xiàn)了中藥并首創(chuàng)了方劑，醫(yī)方是“除疾保性命之術(shù)”，而劑則有“調(diào)百藥齊，和之所宜”之功。采用現(xiàn)代藥物制劑技術(shù)重新研究并升華古典方劑之術(shù)，開創(chuàng)未來藥物制劑技術(shù)和新劑型藥物研究的全新思維和方向。

目的：建立測定不同產(chǎn)地冬瓜子中4種脂肪酸含量的氣相色譜方法。方法：色譜柱為HP-FFAP（0.2 mm×50 m）毛細(xì)管色譜柱，載氣為氮氣，流速0.5 mg/mL，分流比為23∶1，空氣流速450 mg/mL，氫氣流速45 mg/mL。柱溫采取程序升溫，進(jìn)樣口溫度為250℃，F(xiàn)ID檢測器溫度為250℃。結(jié)果：冬瓜子中棕櫚酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.429%～2.977%，硬脂酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.217%～1.615%，油酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3.260%～4.287%，亞油酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10.752%～14.562%。結(jié)論：該方法準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好，可用于冬瓜子脂肪油中4種脂肪酸的質(zhì)量控制。

氣相色譜法；冬瓜子；油酸；亞油酸；棕櫚酸；硬脂酸

冬瓜子為葫蘆科植物冬瓜Benincasa hispida（Thunb.）Cogn.的干燥成熟種子。其味甘，性微寒，歸肺、大腸經(jīng)。具有清熱化痰、排膿利濕的功效，用于痰熱咳嗽、肺膿瘍、闌尾炎、白帶的治療［1］。冬瓜子中含有多種脂肪酸，本研究采用氣相色譜法，對冬瓜子脂肪油中的油酸、亞油酸、棕櫚酸和硬脂酸的含量進(jìn)行定量分析，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 實驗材料

1.1 實驗儀器

Agilent6890氣相色譜儀（美國Agilent公司），F(xiàn)ID檢測器；KQ3200E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；FA2014電子天平（萬分之一上海精科天平）。

1.2 實驗試劑

油酸（批號：111621-201203）、亞油酸（批號：111622-201203）、棕櫚酸（批號：190029-201001）、硬脂酸（批號：190032-201202）對照品均購自國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心，供含量測定用。其他試劑均為分析純。

1.3 實驗藥材

本實驗共采集12批冬瓜子藥材，均由山西中醫(yī)學(xué)院中藥學(xué)院中藥鑒定教研室裴香萍老師鑒定，見表1。

表1 樣品來源

2 方法與結(jié)果

2.1 脂肪油的提取

取不同產(chǎn)地冬瓜子樣品40 g，粉碎，精密稱定，置500 mL圓底燒瓶中，回流提取2次，分別加入石油醚（60℃～90℃）400 mL、300 mL，每次1 h，減壓濾過，合并濾液。濾液用蒸餾法回收石油醚（60℃～90℃），得深綠色脂肪油。

2.2 色譜條件

采用毛細(xì)管色譜柱HP-FFAP（0.2 mm，50 m），載氣為氮氣，流速0.5 mL/min，分流比為23∶1，空氣流速450 mL/min，氫氣流速45 mL/min。柱溫采取程序升溫［2］，進(jìn)樣口溫度為250℃，F(xiàn)ID檢測器溫度為250℃［3］?；旌蠈φ掌?、冬瓜子的色譜峰圖見圖1、圖2。

圖1 混合對照品氣相色譜圖

圖2 冬瓜子（20120927）供試品氣相色譜圖

2.3 對照品溶液的制備

精密稱定油酸、亞油酸、棕櫚酸、硬脂酸（分別為51.68 mg、31.90 mg、9.21 mg、20.77 mg），置于25 mL錐形瓶中，加入14%BF3甲醇溶液1.5 mL，于60℃水浴鍋中加熱15 min，取出，放冷，精密加入正辛烷2.5 mL，充分振搖后，加飽和食鹽水使正辛烷層置瓶頸處。抽取上層溶液過微孔濾膜，得混合對照品溶液（母液）。油酸、亞油酸、棕櫚酸、硬脂酸的質(zhì)量濃度分別為20.672 mg/mL、12.760 mg/mL、3.684 mg/mL、8.308 mg/mL。

2.4 供試品溶液的制備

取樣品脂肪油約80 mg，精密稱定，置25 mL錐形瓶中，加入0.5 mol/L KOH甲醇溶液1 mL，于60℃水浴鍋中加熱30 min，取出，放冷。加入14% BF3甲醇溶液1 mL，于60℃水浴鍋中加熱15 min，取出，放冷，精密加入正辛烷5 mL，充分振搖后，加飽和食鹽水使正辛烷層置瓶頸處。抽取上層溶液，微孔濾膜過濾，得供試品溶液。

2.5 線性關(guān)系的考察

分別精密吸取對照品溶液0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8mL，置1 mL容量瓶中，加正辛烷定容。搖勻后分別注入氣相色譜儀，測定峰面積。以其進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并分別得到4種脂肪酸的回歸方程。Y油酸= 353.46X+20.206（r=0.999 1），Y亞油酸=334.13X+ 16.348（r=0.999 5），Y硬脂酸=374.28X+6.935 5（r= 0.999 1），Y棕櫚酸=433.44X-4.994 7（r=0.999 3）。結(jié)果表明油酸在2.067～16.537 μg，亞油酸在1.276～10.208 μg，棕櫚酸在0.368～2.947 μg，硬脂酸在0.830～6.646 μg呈良好線性關(guān)系。

2.6 精密度實驗

取混合對照品重復(fù)進(jìn)樣6次，測定峰面積，結(jié)果油酸、亞油酸、硬脂酸、棕櫚酸的RSD分別為1.968%，1.877%，1.670%，1.829%。表明此法精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性實驗

精密稱取第10批冬瓜子油樣品1份，按2.4項下方法制備，0.45 μm微孔濾膜過濾后，于配制后0、2 h、4 h、8 h進(jìn)樣，測定峰面積積分值，結(jié)果棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸的RSD分別為1.53%，2.34%，1.41%，0.86%。表明樣品溶液在8 h基本穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性實驗

精密稱取第10批冬瓜子油樣品6份，按2.4項下的方法制備供試品溶液，測定峰面積，計算4種脂肪酸的含量及RSD，棕櫚酸平均含量為2.728%，RSD 2.72%；硬脂酸平均含量為1.462%，RSD 2.67%；油酸平均含量為3.989%，RSD 2.78%；亞油酸平均含量為10.752%，RSD 0.83%。結(jié)果表明此法重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收率實驗

精密稱取已知4種脂肪酸含量的第10批冬瓜子油樣品6份，每份40 mg，精密加入棕櫚酸1.2 mg、硬脂酸0.6 mg、油酸1.5 mg、亞油酸3.1 mg，按2.4項下方法制備供試品，測定其含量，并計算回收率，結(jié)果見表2。

表2 冬瓜子脂肪油中4種成分加樣回收實驗

2.10 樣品測定

取10個不同產(chǎn)地的冬瓜子樣品各80 mg，按照2.4項下的方法制備供試品溶液，按2.2項下方法測定峰面積，計算4種脂肪酸含量，結(jié)果見表3。

表3 冬瓜子脂肪油中4種脂肪酸成分含量測定 （%）

3 討論

在供試品脂肪油提取中，考察了提取0.5 h、1 h、1.5 h對提取率的影響，結(jié)果表明，0.5 h到1 h提取率升高，提取1 h和提取1.5 h對提取率影響差別不大。因此，為節(jié)省時間，選擇提取時間為1 h。液料比的選擇上，考察了8∶1、10∶1、12∶1，結(jié)果10∶1較8∶1的液料比提取率高，與12∶1的液料比提取率相差不大，因此選擇10：1的液料比［4］。

先后采用了多種色譜柱，PEG-20毛細(xì)管色譜柱（0.5 mm，15 m）、PEG-20毛細(xì)管色譜柱（0.25 mm，30 m）、HP-FFAP毛細(xì)管色譜柱（0.2 mm，50 m）等，實驗結(jié)果表明HP-FFAP色譜柱（0.2 mm，50 m）可使供試品中4種脂肪酸達(dá)到基線分離，分離度均＞1.5，因此本實驗選擇了HP-FFAP（0.2 mm，50 m）色譜柱。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010.

［2］張媛，王喆之.火麻仁揮發(fā)油的化學(xué)成分研究［J］.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2009（21）：259.

［3］劉海霞，裴香萍，李慧峰，等.氣相色譜法測定絲瓜子中4種脂肪酸的含量［J］.中國實驗方劑學(xué)雜志，2014，20（14），72-75.

［4］陳易彬，王維，陳萱，等.冬瓜子油的提取及其成分研究［J］.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2014（26）：1 430-1 433.

（編輯：翟春濤）

Determination of content of four kinds of fatty acids in Benincasa hispida seed by GC

Li Huifeng1，Jing Ran1，Cheng Yangang2，Pei Miaorong1
（1.Shanxi College of TCM，Taiyuan Shanxi 030024；2.Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin Heilongjiang 150040）

Objective：To establish a method for the determination of the content of four kinds fatty acids in benincasa hispida（Thunb.）Cogn.from different origins.Method：The GC was performed on HP-FFAP column（0.22 mm×50 m，0.3 μm），nitrogen gas was used as carrier and flow rate was 0.5 mL/min，split ratio was 23∶1，the air flow rate was 450 mL/ min，the hydrogen flow rate was 45 mL/min.The column temperature was taken programmed，and the temperature of injector and FID detector was both at 250℃.Result：The content of palmtinic acid，octadecanoic acid，oleic acid and linoleic acid in benincasa hispida seed were 2.325%～2.985%，1.198% ～1.771%，2.212%～5.159%，7.383%～13.578% respectively.Conclusion：The method can be used to control the quality of four kinds fatty acids in benincasa hispida seed，which is accurate，convenient and repeatable.

GC；benincasa hispida seed；oleic acid；linoleic acid；palmtinic acid；octadecanoic acid

R285

A

1671-0258（2016）04-0022-03

山西省中藥材、中藥飲片地方標(biāo)準(zhǔn)研究（2012009A）

李慧峰，助教，碩士，E-mail：lihuifeng2046@163.com

裴妙榮，博士生導(dǎo)師，教授，E-mai：peimr602@163.com