食品中蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ檢測(cè)方法的研究

□劉向前 李 明 季華國(guó) 麗江市食品藥品檢驗(yàn)所

食品中蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ檢測(cè)方法的研究

□劉向前 李 明 季華國(guó) 麗江市食品藥品檢驗(yàn)所

目的在現(xiàn)用專項(xiàng)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，優(yōu)化一種合理、快速的基于高效液相色譜分離的測(cè)定蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的方法。方法探討了提取溶劑、吸附劑、洗脫溶劑等對(duì)蘇丹紅分離的影響。結(jié)果在相同流動(dòng)相和測(cè)定波長(zhǎng)下，改進(jìn)后的方法標(biāo)準(zhǔn)曲線線性非常好，r大于0.999 99，RSD為1.3%～1.5%，樣品加標(biāo)回收率為94.5%～109.4%。結(jié)論可用于蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的檢測(cè)，具有靈敏度高、重現(xiàn)性好的特點(diǎn)。

食品；蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ；高效液相色譜法

蘇丹紅是一種人工合成的染料，廣泛用于如溶劑、油、蠟和汽油的增色以及鞋、地板等的增光[1]，蘇丹紅是親脂性偶氮苯化合物，主要包括Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ4種類型（見(jiàn)圖1），由于具有潛在的致癌性，中國(guó)和歐盟都禁止將其作為食品添加劑[2]，但因蘇丹紅成本低、著色性好，仍被很多商家非法使用，食品中檢測(cè)出蘇丹紅的報(bào)道時(shí)有發(fā)生，因此有必要建立簡(jiǎn)單、快速、高效的蘇丹紅分析檢測(cè)方法，目前測(cè)定蘇丹紅的主要方法有高效液相色譜法、薄層色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用法、熒光光譜法等[3-7]。

現(xiàn)行檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)是GB/T 19681-2005，對(duì)樣品處理過(guò)程較比較復(fù)雜，分離效果不好，在實(shí)際操作中經(jīng)反復(fù)實(shí)驗(yàn)，對(duì)此方法進(jìn)行了改進(jìn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較滿意。

1 儀器與試劑

Agilent 1260液相色譜儀（配有二極管陣列檢測(cè)器，美國(guó)），LabTech EV311旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（北京萊伯科技有限公司），賽多利斯BT224S電子天平（德國(guó)）。

甲醇、乙腈、丙酮、正己烷（HPLC級(jí)，F(xiàn)isher scientific）、甲酸（分析純，天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司）、層析柱管和層析用中性氧化鋁（100～200目）。

蘇丹紅Ⅰ號(hào)（GBW100254，100 μg/mL）、Ⅱ號(hào)（GBW100255，100 μg/mL）、Ⅲ號(hào)（GBW100256，100 μg/mL）、Ⅳ號(hào)（GBW100257，100 μg/mL）溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，均購(gòu)自北京海岸鴻蒙標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)技術(shù)有限公司。

實(shí)驗(yàn)室用水均為銳思捷（ELGA）超純水系統(tǒng)制備的超純水。

2 方法

2.1 色譜條件

色譜柱：Zorbax-C18，3.5 μm，150 mm×4.6 mm；流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：蘇丹紅Ⅰ478 nm,蘇丹紅Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ520 nm；流動(dòng)相：溶劑A（0.1%甲酸的水溶液∶乙腈=85∶15），溶劑B（0.1%甲酸的乙腈溶液∶丙酮=80∶20）（見(jiàn)表1）。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)貯備液的配制

精密量取蘇丹紅Ⅰ號(hào)、Ⅱ號(hào)、Ⅲ號(hào)、Ⅳ號(hào)溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)各1.6 mL，置50 mL的容量瓶中，用乙腈或者丙酮稀釋并定容至刻度，搖勻即得。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

精密量取上述貯備液0.5、1.0、2.0、4.0 mL和8.0 mL，分別置10 mL的容量瓶中，用乙腈或者丙酮稀釋并定容至刻度，搖勻備用。此標(biāo)準(zhǔn)系列濃度為0.16、0.32、0.64、1.28 μg/mL和2.56 μg/mL。

2.3 樣品前處理（以紅辣椒粉為例）

稱取1.0 g（準(zhǔn)確至0.001 g）樣品于三角瓶中，加入30 mL正己烷，超聲5 min，過(guò)濾，用10 mL正己烷洗滌殘?jiān)鼣?shù)次，至洗出液無(wú)色，合并正己烷液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至5 mL以下，慢慢加入氧化鋁層析柱中，為保證層析效果，在柱中保持正己烷液面為2 mm左右上樣，在全程的層析過(guò)程中不應(yīng)使柱干涸，用正己烷少量多次淋洗濃縮瓶，一并注入層析柱?？刂蒲趸X表面吸附的色素帶寬宜小于0.5cm，待樣液完全流出后，用30 mL正己烷洗柱，直至流出液無(wú)色，棄去全部正己烷淋洗液，用乙腈或者丙酮60 mL洗脫，收集、濃縮近干后，用乙腈或者丙酮定容至5 mL，經(jīng)0.45um有機(jī)濾膜過(guò)濾后待測(cè)。

3 結(jié)果與討論

3.1 提取溶劑的選擇

比較了乙腈、正己烷2種溶劑對(duì)待測(cè)物萃取回收率的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩者的回收率分別為79.2%～90.8%、84.8%～94.2%［8］。兩種提取液的提取回收率都很高，但乙腈提取液在進(jìn)行液相色譜分析時(shí)會(huì)在蘇丹紅Ⅳ的保留時(shí)間附近產(chǎn)生明顯的干擾峰。因此本研究選擇正己烷為萃取溶劑。

3.2 洗脫溶劑的選擇

中性氧化鋁吸附劑主要依靠硅膠本身的吸附力吸附。當(dāng)硅膠吸附完成后，都需要選用合適的溶劑洗脫。本研究試驗(yàn)了丙酮、乙腈、正己烷-丙酮（7∶3）和正己烷-丙酮（5∶5）等溶劑對(duì)洗脫效果的影響，結(jié)果表明，丙酮、乙腈、正己烷-丙酮（5∶5）的洗脫效果較好，考慮到與下一步色譜分離流動(dòng)相的匹配，本研究選擇丙酮作為洗脫劑。

3.3 線性范圍和檢出限

用混合標(biāo)準(zhǔn)溶液系列，按照國(guó)標(biāo)和本標(biāo)準(zhǔn)的色譜條件測(cè)定，色譜圖見(jiàn)圖2～4，重復(fù)測(cè)定5次。以所得峰面積對(duì)質(zhì)量濃度進(jìn)行回歸，得到蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的線性回歸方程（見(jiàn)表2、3）。結(jié)果表明，蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ在0.16～2.56 μg/mL濃度范圍內(nèi)，按標(biāo)準(zhǔn)方法得到的蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ相關(guān)系數(shù)（r）約為0.995，蘇丹紅Ⅲ相關(guān)系數(shù)（r）為0.96，蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ檢出限為0.123～0.647 μg/mL，定量限為0.412～2.156 μg/mL；按改進(jìn)方法得到的線性關(guān)系非常好，相關(guān)系數(shù)（r）大于0.999 99，蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ檢出限為0.064～0.123 μg/mL，定量限為0.212～0.409 μg/mL。

3.4 回收率與精密度

在兩種蘇丹紅色譜分離條件下，對(duì)已經(jīng)經(jīng)過(guò)預(yù)先處理的食品進(jìn)行分析測(cè)定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4、5。由表可見(jiàn)，按改進(jìn)方法處理的結(jié)果明顯優(yōu)于國(guó)標(biāo)方法處理的結(jié)果。

4 結(jié)論

針對(duì)紅辣椒粉中蘇丹紅染料（蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ）的殘留檢測(cè)，本文采用在原國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法基礎(chǔ)上的改進(jìn)方法，得到了靈敏度高、重現(xiàn)性好的結(jié)果。

[1]張潔,黃玉明.高效液相色譜測(cè)定蘇丹紅的研究[J].西南大學(xué)學(xué)報(bào),2012,34(5):46-50.

[2]潘志明,李忠,王冰,等.食品中蘇丹紅檢測(cè)研究進(jìn)展[J].世界科技研究與發(fā)展,2007,29(6):14-18.

[3]雷雅娟,徐燁,劉渭萍,等.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定食品中的蘇丹紅、莧菜紅和胭脂紅[J].分析實(shí)驗(yàn)室,2007,26(4):85-88.

[4]張?jiān)Ｆ?張毅軍,袁倬斌,等.高效液相色譜法測(cè)定紅辣椒制品中的蘇丹紅[J].生命科學(xué)儀器,2005,3(3):25-28.

[5]李春香,黃堅(jiān),馬慧雪,等.薄層層析-高效液相色譜法測(cè)定食品中蘇丹紅[J].廣州化工,2011,39(19):75-78.

[6]倪永付,王勇,朱莉萍,等.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定濃縮胡蘿卜汁中8種蘇丹類染料[J].理化檢驗(yàn)-化學(xué)分冊(cè),2013,49(3):306-309.

[7]周尚,楊季冬,賀奎娟,等.熒光光譜法測(cè)定食品中蘇丹紅含量[J].理化檢驗(yàn)-化學(xué)分冊(cè),49(3):179-182.

[8]朱浩,李小平,鄒寶波,等.分散固相萃取/高效液相色譜法測(cè)定雞蛋中對(duì)位紅與蘇丹紅染料殘留[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào),2013,32(11):1379-1383.