高效液相色譜儀檢測(cè)食用林產(chǎn)品中10種氨基甲酸酯農(nóng)藥殘留方法的優(yōu)化

□李少軍 付格紅 竇延光 陜西省林業(yè)工業(yè)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)站

高效液相色譜儀檢測(cè)食用林產(chǎn)品中10種氨基甲酸酯農(nóng)藥殘留方法的優(yōu)化

□李少軍 付格紅 竇延光 陜西省林業(yè)工業(yè)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)站

本文依據(jù)《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥多殘留的測(cè)定》（NY/T 761-2008）中第三部分蔬菜和水果中氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥多殘留的測(cè)定，結(jié)合食用林產(chǎn)品特點(diǎn)和和本實(shí)驗(yàn)室儀器條件，采用高效液相色譜儀熒光檢測(cè)器對(duì)此方法進(jìn)行了優(yōu)化，旨在滿(mǎn)足陜西省林業(yè)工業(yè)產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)站檢測(cè)需要，建立一種適合批量食用用林產(chǎn)品氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥多殘留的分析方法。

材料與方法

材料與試劑

1 供試材料

普通板栗，樣品量約2 kg。

2 試劑耗材

乙腈（美國(guó)Thermo Fisher，色譜純）；甲醇（美國(guó)Thermo Fisher，色譜純）；二氯甲烷（瑞典Oceanpak，色譜純）；氯化鈉（天津天力化學(xué)試劑有限公司，分析純）；固相萃取柱氨基柱（500 mg/6 mL，天津博納艾杰爾）；0.45 μm有機(jī)濾膜（津騰）；柱后衍生試劑：鄰苯二甲醛、巰基乙醇、0.05 mol?L-1NaOH溶液和OPA（鄰苯二甲醛）稀釋液，生產(chǎn)廠家均為美國(guó)Pickering公司；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液：涕滅威亞砜、涕滅威砜、滅多威、三羥基克百威、涕滅威、速滅威、克百威、甲萘威、異丙威和仲丁威（100 μg?mL-1，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所，基質(zhì)丙酮），超純水（密理博Millio-Q超純水機(jī)制備，0.2 μm濾膜）。

儀器與設(shè)備

Waters高效液相色譜儀e2695，配熒光檢測(cè)器FLD2475和柱后衍生系統(tǒng)； FP3205食品加工機(jī)（德國(guó)博朗）；XHF-DY型勻漿機(jī)（寧波新芝）；HH-8電熱恒溫水浴鍋（常州國(guó)華）；HSC-24B型氮吹儀（天津恒奧科技）；MS3漩渦振蕩器（IKA）。

方法

1 色譜條件

色譜柱Waters Carbamate Analysis 3.9×150 mm，流速1.5 mL/min，進(jìn)樣量20 μL，柱溫30℃，熒光檢測(cè)器λex339 nm,λem445 nm。

流動(dòng)相溶劑梯度見(jiàn)表1。

2 柱后衍生條件

0.05 mol/L氫氧化鈉，流速0.3 mL/ min；OPA試劑，流速0.3 mL/min；反應(yīng)池溫度80℃。

實(shí)驗(yàn)方法

1 樣品的制備和提取

以四分法取出不少于1 000 g的板栗樣品，去殼切碎，充分混勻后放入食品加工機(jī)粉碎，此為待測(cè)樣。準(zhǔn)確稱(chēng)取25.00 g樣品于250 mL燒杯中，加入50 mL乙腈，高速勻漿2 min，定性濾紙過(guò)濾，濾液收集到裝有5～7 g氯化鈉的具塞量筒中，蓋上塞子，用封口膜封，劇烈振蕩2 min，室溫下靜置分層1 h，待凈化。

2 凈化

從具塞量筒中用移液器準(zhǔn)確吸取10 mL乙腈相提取液于200 mL燒杯中，置燒杯于60℃水浴鍋上加熱，蒸發(fā)近干，加入2.0 mL甲醇+二氯甲烷（5+95）溶解殘?jiān)齼艋?/p>

將氨基柱用6 mL甲醇+二氯甲烷（5+95）活化，待溶劑液面到達(dá)柱層吸附面時(shí)，立即加入樣品溶解液，用25 mL試管收集洗脫溶液，用2 mL甲醇+二氯甲烷（5+95）洗滌燒杯過(guò)柱，重復(fù)2～3次。將試管置于氮吹儀上，水與溫度50℃，氮吹蒸發(fā)近干，用甲醇+水（1+9）定容2.5 mL，渦旋混勻1 min，過(guò)0.45 μm有機(jī)濾膜，待測(cè)。

3 結(jié)果計(jì)算

試樣中氨基甲酸酯農(nóng)藥殘留量以ω計(jì)，單位以毫克每千克（mg/kg）表示，按如下公式計(jì)算：

式（1）中：

V1為提取溶劑總體積，單位為毫升（mL）；

A 為樣品溶液中被測(cè)農(nóng)藥峰面積；

V3為定容體積，單位為毫升（mL）；

ρ 為標(biāo)準(zhǔn)溶液中質(zhì)量濃度，單位為毫克每升（mg/L）；

V2為凈化體積，單位為毫升（mL）；

As為標(biāo)品溶液中被測(cè)農(nóng)藥峰面積；

m 為樣品質(zhì)量，單位為克（g）。

結(jié)果與分析

色譜條件的優(yōu)化

1 標(biāo)品溶劑的選擇

標(biāo)品溶劑對(duì)目標(biāo)峰的影響很大，不同標(biāo)品溶劑與峰面積和峰形直接有關(guān)。如果直接配制成混標(biāo)進(jìn)樣，則由于丙酮相應(yīng)非常高，再加上疊加效應(yīng)，使標(biāo)品峰壓縮很低，但當(dāng)對(duì)標(biāo)品溶劑氮吹后，再配制成混標(biāo)，則標(biāo)品峰清晰美觀（如圖1所示）。當(dāng)選用甲醇作為溶解試劑時(shí)，發(fā)現(xiàn)前3個(gè)峰拖尾，為平頭峰，響應(yīng)值也低，當(dāng)選用近似于流動(dòng)相起始比例的甲醇+水（1+9）配制成混標(biāo)進(jìn)樣，則發(fā)現(xiàn)峰形尖銳，所有峰形相應(yīng)值也較高（如圖2所示）。

2 樣品前處理優(yōu)化

依據(jù)《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥多種殘留的測(cè)定》（NY/T 761-2008）第三部分前處理，參考楊振興 等人的方法，劇烈振蕩時(shí)增加封口膜，防止提取液漏出。延長(zhǎng)靜置時(shí)間，增加氨基柱活化體積，增加洗脫中甲醇和二氯甲烷例和體積，加大甲醇比例，增強(qiáng)了對(duì)氨基甲酸酯農(nóng)藥的洗脫能力，提高了回收率。

3 流動(dòng)相和流速

根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室儀器條件，增大了流速，在流動(dòng)相中增加了乙腈，縮短出峰時(shí)間。

4 定容溶液

依據(jù)相似相容原理，采用《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥多種殘留的測(cè)定》（NY/T 761-2008）第三部分中用甲醇定容，發(fā)現(xiàn)同前3個(gè)峰也出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象，當(dāng)選用甲醇+水（1+9）2.5 mL定容進(jìn)樣后，則發(fā)現(xiàn)峰形尖銳對(duì)稱(chēng)。

5 柱后條件

當(dāng)選用反應(yīng)器溫度為80℃時(shí)，反應(yīng)完全，避免了100℃時(shí)反應(yīng)器中產(chǎn)生氣泡，影響熒光檢測(cè)器。

線性范圍

用甲醇+水（1+9）溶液對(duì)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液進(jìn)行稀釋后，將不同農(nóng)藥標(biāo)品配制成混合標(biāo)準(zhǔn)溶液系列，10種農(nóng)藥混合標(biāo)品均為相同濃度系列0.1、0.3、0.5、0.7、1.0 mg/L，按照優(yōu)化的色譜條件進(jìn)行分析，可滿(mǎn)足一般檢測(cè)需求要求。

討論

通過(guò)改變標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)稀釋溶液、定容溶液、流動(dòng)相溶劑梯度、柱后衍生條件等，本方法在此儀器上的應(yīng)用，不但分析快速，分離效果好，且準(zhǔn)確度和靈敏度較高，對(duì)食用林產(chǎn)品中氨基甲酸酯農(nóng)藥多殘留的批量檢測(cè)具有較強(qiáng)的實(shí)用性。