• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    白藜蘆醇抑制Sonic hedgehog信號(hào)并減輕大鼠肺纖維化的研究

    2016-03-26 03:56:05李利華盧濱吳紅科張浩姚菲菲鄭州人民醫(yī)院呼吸科河南鄭州450000
    關(guān)鍵詞:成纖維細(xì)胞白藜蘆醇肺纖維化

    李利華,盧濱,吳紅科,張浩,姚菲菲(鄭州人民醫(yī)院呼吸科,河南鄭州450000)

    ?

    白藜蘆醇抑制Sonic hedgehog信號(hào)并減輕大鼠肺纖維化的研究

    李利華,盧濱,吳紅科,張浩,姚菲菲
    (鄭州人民醫(yī)院呼吸科,河南鄭州450000)

    摘要:目的研究白藜蘆醇對博萊霉素誘導(dǎo)大鼠肺纖維化的影響。方法完全隨機(jī)分組法將40只SD雄性大鼠分為4組:對照組、模型組、25μmol白藜蘆醇組和50μmol白藜蘆醇組。模型組大鼠氣管內(nèi)滴注博萊霉素,25和50μmol白藜蘆醇組大鼠氣管內(nèi)滴注博萊霉素后分別用25和50μmol白藜蘆醇灌胃,對照組大鼠氣管內(nèi)滴注生理鹽水。處理30 d后,觀察各處理組大鼠肺組織病理變化并檢測大鼠肺組織羥脯氨酸(HYP)和Ⅰ型膠原蛋白含量。分離各組大鼠肺成纖維細(xì)胞,并利用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)和Western blot檢測細(xì)胞中SHH(Sonic hedgehog,SHH)、Smo、Gli-1 mRNA和蛋白的表達(dá),同時(shí)檢測細(xì)胞增殖和凋亡。結(jié)果模型組大鼠肺泡結(jié)構(gòu)嚴(yán)重破壞并伴有膠原纖維沉淀,白藜蘆醇處理可減輕纖維化病變。白藜蘆醇可降低肺組織中博萊霉素誘導(dǎo)的HYP和Ⅰ型膠原蛋白含量。博萊霉素能顯著上調(diào)成纖維細(xì)胞中SHH、Smo、Gli-1 mRNA和蛋白的表達(dá),而白藜蘆醇則可抑制SHH、Smo和Gli-1的表達(dá)。博萊霉素促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖并減少凋亡,白藜蘆醇抑制細(xì)胞增殖并促進(jìn)細(xì)胞凋亡。結(jié)論白藜蘆醇可抑制博萊霉素誘導(dǎo)的SHH信號(hào)活化并減輕大鼠肺纖維化。

    關(guān)鍵詞:白藜蘆醇;sonic hedgehog信號(hào);肺纖維化;博萊霉素;成纖維細(xì)胞

    肺間質(zhì)纖維化是一種多誘因的慢性肺疾病[1]。肺間質(zhì)纖維化病變過程中,肺泡上皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞損傷,肺泡基底膜破壞,細(xì)胞外基質(zhì)沉積并成纖維細(xì)胞聚集和增殖[2]。白藜蘆醇是非黃酮類多酚化合物,廣泛存在于葡萄、虎杖、花生、桑葚等植物中,有抗氧化、消炎、抗腫瘤、調(diào)節(jié)激素等作用[3]。近年來,多個(gè)實(shí)驗(yàn)證明白藜蘆醇可對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肺纖維化疾病進(jìn)展產(chǎn)生影響[4-6],但具體作用機(jī)制還不清楚。因此,本研究著眼于白藜蘆醇對博萊霉素誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化的影響,分析白藜蘆醇的作用機(jī)制,為肺纖維化的治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與主要試劑

    40只4周齡雄性SD大鼠購自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物公司,將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)于12 h晝/夜循環(huán)照明、恒溫、恒濕的清潔級環(huán)境中,自由飲食,飼養(yǎng)1周后備用。白藜蘆醇、戊巴比妥鈉、聚偏二氟乙烯(polyvinylidene fluoride,PVDF)膜購自美國Sigma公司,博萊霉素購自美國Invitrogen公司,羥脯氨酸(Hydroxyproline,HYP)檢測試劑盒購自南京建成生物,Trizol試劑和Dy NAmo SYBR Green熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)試劑盒購自大連寶生生物有限公司,抗Ⅰ型膠原蛋白抗體、抗SHH(sonic hedgehog,SHH)抗體、抗Smo抗體、抗Gli-1抗體購自美國Santa Cruz Biotech公司,辣根過氧化物酶標(biāo)記的兔抗鼠二抗購自英國Abcam公司,Annexin V-FITC/PI凋亡檢測試劑盒購自北京索萊寶公司,噻唑藍(lán)[3-(4,5-dimethyl- 2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]試劑盒購自北京百浩生物公司,其余常見試劑為國產(chǎn)。

    1.2動(dòng)物分組處理

    利用隨機(jī)數(shù)字法將40只5周齡雄性SD大鼠隨機(jī)分為4組:對照組、模型組、25μmol白藜蘆醇組和50μmol白藜蘆醇組,每組10只。模型組大鼠氣管內(nèi)注射4 mg/kg博萊霉素建立肺纖維化模型,25和50μmol白藜蘆醇組大鼠氣管注射博萊霉素后第2天分別用25和50μmol白藜蘆醇灌胃,處理30 d。對照組和模型組利用生理鹽水灌胃。模型組大鼠于博萊霉素滴注后死亡2只,對照組和50μmol白藜蘆醇組灌胃第6天分別死亡1只大鼠,25μmol白藜蘆醇組分別于博萊霉素滴注后及白藜蘆醇灌胃第3天死亡1只大鼠。處理結(jié)束后,利用戊巴比妥鈉深度麻醉處死大鼠,分離大鼠肺成纖維細(xì)胞備用。檢測各組大鼠肺組織HYP和Ⅰ型膠原蛋白表達(dá),制作病理切片,觀察肺纖維化病變。

    1.3肺成纖維細(xì)胞分離和培養(yǎng)

    大鼠肺成纖維細(xì)胞的分離參考朱天琦等[7]的方法。將分離得到的成纖維細(xì)胞置于37℃、5%二氧化碳CO2培養(yǎng)箱,用含15%胎牛血清(fetal bovine serum,F(xiàn)BS)的H-DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng),隔天換液1次。細(xì)胞生長接近融合時(shí),棄培養(yǎng)液,D-Hanks液輕洗3次,加入0.25%胰酶消化1min,用含15%FBS的H-DMEM培養(yǎng)液終止消化,吸管輕輕吹打細(xì)胞,收集細(xì)胞懸液,1 000 r/min離心2 min,棄上清液,用15% FBS 的H-DMEM培養(yǎng)液,按1∶2接種傳代培養(yǎng)。利用免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測細(xì)胞中波形蛋白和CD31的表達(dá),對原代肺成纖維細(xì)胞進(jìn)行鑒定。

    1.4MTT檢測細(xì)胞增殖

    分離肺成纖維細(xì)胞,將來源于對照組、模型組、25和50μmol白藜蘆醇組大鼠的肺成纖維細(xì)胞,按3×103個(gè)/孔接種于96孔培養(yǎng)板。每孔細(xì)胞加入含15%FBS的H-DMEM培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)24、48、72和96 h后分別進(jìn)行MTT實(shí)驗(yàn)檢測。按實(shí)驗(yàn)分組,每孔加入20μl MTT(5 mg/ml)后培養(yǎng)4 h。去上清液,每孔加入150μl二甲基亞砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)。混勻后用酶標(biāo)儀(Instruments,美國Bio-tek公司)測定(測量波長為490 nm)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次,取平均數(shù)作為實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

    1.5流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡

    收集分離培養(yǎng)的大鼠肺成纖維細(xì)胞,分別對應(yīng)對照組、模型組、25和50μmol白藜蘆醇組。首先用PBS洗滌細(xì)胞,細(xì)胞計(jì)數(shù)后調(diào)整細(xì)胞密度為1×106/L,制成單細(xì)胞懸液,加入100μl結(jié)合緩沖液與FITCAnnexinⅤ(20μg/ml)10μl,室溫避光放置30 min,加入5μl PI(50μg/ml),室內(nèi)避光反應(yīng)5 min,加入400μl結(jié)合緩沖液,上流式細(xì)胞儀檢測。

    1.6HYP含量測定

    采用商業(yè)化HYP試劑盒檢測各組大鼠肺組織中HYP含量。試劑盒主要原理是利用氧化HYP與4-(二甲氨基)苯甲醛(DMAB)的生色反應(yīng)來測定HYP濃度,反應(yīng)生成與樣品中HYP含量成正比的比色(560 nm)產(chǎn)物。

    實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative real time-polymerase chain reaction,qRT-PCR)使用Trizol試劑提取大鼠肺組織總RNA,并逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,并以該cDNA為模板擴(kuò)增基因片段,所用引物見表1。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后染色、拍照。采用ABI 7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀和Dy NAmo SYBR Green qPCR試劑盒對目的基因表達(dá)進(jìn)行測定。分別根據(jù)產(chǎn)生的Ct值從各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得目的基因和β-actin基因的拷貝數(shù)。取3次的平均值,以目的基因的拷貝數(shù)除以β-actin的拷貝數(shù)作為靶基因的相對表達(dá)量。

    表1 實(shí)時(shí)定量PCR引物序列

    1.7Western blot檢測

    提取肺組織總蛋白,利用10%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠恒壓電泳分離蛋白,隨后轉(zhuǎn)移蛋白至PVDF膜上,用含5%脫脂奶粉的Tris-HCl緩沖鹽溶液+Tween(TBS+Tween,TBST)室溫下水平搖床慢搖封閉1 h。利用抗Ⅰ型膠原蛋白抗體、抗SHH抗體、抗Smo抗體或抗Gli-1抗體4℃孵育過夜。隔天TBST漂洗3遍,加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的兔抗鼠二抗(1∶20 000),室溫下水平搖床慢搖孵育1 h。選取β-actin作為蛋白表達(dá)內(nèi)參。TBST漂洗3遍后進(jìn)行增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法(enhanced chemiluminescence,ECL)顯色,凝膠成像分析系統(tǒng)進(jìn)行拍照分析。

    1.8肺組織病理切片與Masson染色

    將大鼠肺組織用4%甲醛固定,將固定好的樣本按順序置于脫水機(jī)中脫水。將過夜的肺組織取出,置于沾有少量蠟液的包埋盒中包埋。將蠟塊固定于切片機(jī)上,切成4~6μm薄片。采用Masson三色染色法分析,切片常規(guī)脫蠟至水,置于Bouin液室溫過夜或56℃中處理1 h,自來水沖洗至黃色消失后蒸餾水洗滌。Weigert鐵蘇木精染核10 min,鹽酸乙醇分化,自來水沖洗10 min,蒸餾水洗滌。按照Ⅰ液染2 min,Ⅱ液染15 min,Ⅲ液染5 min的順序進(jìn)行處理;蒸餾水洗滌1 min后,1%冰乙酸溶液浸洗5 min,常規(guī)脫水透明,中性樹膠封片。

    1.9統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,用t檢驗(yàn)和單因素方差分析,用LSD法進(jìn)行多重比較,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1白藜蘆醇抑制博萊霉素誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化

    病理結(jié)果顯示,對照組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)正常,肺泡結(jié)構(gòu)完整。模型組大鼠肺組織肺泡壁增厚,肺泡結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重,可見大量膠原纖維沉淀以及成纖維細(xì)胞增生。白藜蘆醇處理大鼠肺泡結(jié)構(gòu)破壞相對較輕,同時(shí)可見少量膠原纖維沉淀和成纖維細(xì)胞增生,肺組織中性粒細(xì)胞浸潤減少。見圖1。

    圖1 各組大鼠肺組織病理切片觀察(Masson染色×400)

    2.2白藜蘆醇降低模型大鼠肺組織HYP和Ⅰ型膠原蛋白的含量

    與對照組比較,模型組大鼠肺組織HYP含量明顯升高(P=0.002)。白藜蘆醇可明顯降低肺組織HYP含量,并具有劑量效應(yīng);25μmol白藜蘆醇組HYP含量與對照組、模型組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.024和0.015);50μmol白藜蘆醇組HYP含量與模型組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.003)(見表2)。與對照組比較,博萊霉素誘導(dǎo)的大鼠肺組織中Ⅰ型膠原蛋白表達(dá)顯著上調(diào)(P=0.001);白藜蘆醇則顯著下調(diào)模型大鼠Ⅰ型膠原蛋白表達(dá)(25μmol白藜蘆醇組P=0.032,50μmol白藜蘆醇組P=0.011。見圖2。

    表2 各組大鼠肺組織HYP含量測定

    圖2 各組大鼠肺組織Ⅰ型膠原蛋白免疫印跡法定量分析

    2.3白藜蘆醇下調(diào)模型大鼠肺成纖維細(xì)胞SHH信號(hào)的表達(dá)

    與對照組比較,模型組大鼠成纖維細(xì)胞中SHH、Smo和Gli-1 mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著上升(mRNA:PSHH=0.000,PSmo=0.000,PGli-1=0.000;蛋白:PSHH=0.000,PSmo=0.000,PGli-1=0.000);白藜蘆醇顯著降低博萊霉素誘導(dǎo)的SHH、Smo和Gli-1 mRNA和蛋白表達(dá)(25μmol白藜蘆醇組mRNA:PSHH=0.000, PSmo=0.022,PGli-1=0.000;蛋白:PSHH==0.002,PSmo=0.024,PGli-1=0.021;50μmol白藜蘆醇組mRNA:PSHH= 0.000,PSmo=0.013,PGli-1=0.000;蛋白:PSHH=0.000,PSmo= 0.018,PGli-1=0.000)。見圖3、4。

    2.4白藜蘆醇降低成纖維細(xì)胞的增殖

    與對照組比較,博萊霉素能顯著提高大鼠肺成纖維細(xì)胞增殖速率(P=0.033);與模型組比較,白藜蘆醇能明顯降低成纖維細(xì)胞的增殖(25μmol白藜蘆醇組P=0.027,50μmol白藜蘆醇組P=0.024)。見圖5。

    圖3 各組大鼠肺成纖維細(xì)胞SHH、Smo和Gli-1 mRNA的熒光定量PCR

    圖4 各組大鼠肺成纖維細(xì)胞SHH、Smo和Gli-1蛋白的熒光定量PCR

    圖5 MTT法測定各組大鼠肺成纖維細(xì)胞體外增殖

    2.5白藜蘆醇促進(jìn)成纖維細(xì)胞凋亡

    流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,博萊霉素能降低成纖維細(xì)胞凋亡率(P=0.041),而白藜蘆醇則能顯著促進(jìn)成纖維細(xì)胞的凋亡(25μmol白藜蘆醇組P=0.036,50μmol白藜蘆醇組P=0.021)。見圖6。

    圖6 流式細(xì)胞術(shù)測定各組大鼠肺成纖維細(xì)胞凋亡比率

    3 討論

    作為一種進(jìn)行性肺疾病,肺纖維化患者在診斷后5年病死率達(dá)65%[8],目前還沒有公認(rèn)的有效治療方法,主要采用抗炎、抗纖維化、抗凝血及肺移植等治療措施,療效各有優(yōu)劣[9]。因此,迫切需要探索新的有效而副作用低的治療方法。白藜蘆醇是一種從植物中提取的天然藥物,在抗腫瘤、治療心血管疾病、抗氧化等方面療效顯著,毒性低,便于長期服藥[10]。白藜蘆醇在實(shí)驗(yàn)性肺纖維化模型中的作用越來越受到關(guān)注,有望開發(fā)為治療人體肺纖維化的臨床用藥。

    本研究通過向大鼠氣管滴注博萊霉素建立肺間質(zhì)纖維化模型,病理、組織結(jié)果發(fā)現(xiàn),模型大鼠較對照組肺泡結(jié)構(gòu)受損嚴(yán)重,有明顯的膠原蛋白沉積,成纖維細(xì)胞大量增生。另建的立白藜蘆醇處理組,結(jié)果發(fā)現(xiàn),白藜蘆醇能夠保護(hù)肺泡結(jié)構(gòu),減少組織損傷,并減輕模型大鼠肺間質(zhì)纖維化和炎癥反應(yīng),表明白藜蘆醇有拮抗博萊霉素的作用,能減輕博萊霉素誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化。

    本研究中,肺纖維化模型大鼠肺組織HYP含量和Ⅰ型膠原蛋白表達(dá)水平明顯增高。白藜蘆醇處理后,模型大鼠肺組織中HYP含量減少,Ⅰ型膠原蛋白水平降低。多種信號(hào)途徑包括STAT、酪氨酸蛋白激酶、MAPK、TGF-β參與肺纖維化進(jìn)展[11]。SHH途徑參與肺臟在胚胎期的發(fā)育[12],并且在成體胚胎干細(xì)胞的維持中具有重要作用[13]。Teglund等[14]的研究也發(fā)現(xiàn)其參與多種癌癥的發(fā)生。最近多個(gè)研究發(fā)現(xiàn),SHH參與肺纖維化病變[15]。Hu等[16]證明SHH在體外可通過Smo和Gli1促進(jìn)成纖維細(xì)胞分化為肌成纖維細(xì)胞。Moshai等[17]發(fā)現(xiàn),抑制Gli的活性可減緩小鼠肺纖維化,減小肺膠原蛋白的沉積,促進(jìn)肺組織內(nèi)抗炎、抗纖維化環(huán)境形成。國內(nèi)研究報(bào)道,百草枯可導(dǎo)致SHH途徑中Smo、Gli1的表達(dá)水平在肺纖維化大鼠肺組織中顯著上調(diào)[18]。本研究發(fā)現(xiàn),在模型大鼠肺成纖維細(xì)胞中,SHH、Smo、Gli-1 mRNA和蛋白的表達(dá)水平較對照組顯著上調(diào),而白藜蘆醇則可以抑制SHH、Smo和Gli-1的表達(dá),結(jié)果表明,博萊霉素誘導(dǎo)的肺纖維化過程具有活化成纖維細(xì)胞中SHH信號(hào)途徑的作用;與之相反,白藜蘆醇則可以抑制成纖維細(xì)胞中SHH信號(hào)的活化,下調(diào)相關(guān)信號(hào)蛋白的表達(dá)水平。其他研究同樣證明白藜蘆醇對SHH信號(hào)的調(diào)控作用。在急性髓系白血病HL-60細(xì)胞中,白藜蘆醇能夠拮抗白介素-6(interleukin-6,IL-6)的作用,降低細(xì)胞中SHH和Gli-1的表達(dá),從而抑制細(xì)胞生長[19]。本研究還發(fā)現(xiàn),博萊霉素促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖,而白藜蘆醇則可以抑制細(xì)胞增殖。此外,博萊霉素降低成纖維細(xì)胞凋亡,白藜蘆醇則促進(jìn)成纖維細(xì)胞凋亡。

    綜上所述,本研究觀察到白藜蘆醇可減輕博萊霉素誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化,抑制成纖維細(xì)胞干細(xì)胞SHH信號(hào)活化及成纖維細(xì)胞增殖,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,為明確白藜蘆醇在預(yù)防和治療肺纖維化中的作用機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)和理論支持。

    參考文獻(xiàn):

    [1] Noble PW, Barkauskas CE, Jiang D.Pulmonary fibrosis: patterns and perpetrators[J].J Clin Invest, 2012, 122(8): 2756-2762.

    [2] Spagnolo P, Maher TM, Richeldi L.Idiopathic pulmonary fibrosis: recent advances on pharmacological therapy[J].Pharmacol Ther, 2015, 152: 18-27.

    [3]韓晶晶,劉煒,畢玉平.白藜蘆醇的研究進(jìn)展[J].生物工程學(xué)報(bào), 2008, 24(11): 1851-1859.

    [4]曹國文,毛衛(wèi)東.白藜蘆醇對博萊霉素誘導(dǎo)的小鼠纖維化的作用[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生, 2008, 24(24): 3643-3645.

    [5]劉理靜,于小華,張平.白藜蘆醇通過TGF-β1/ADAMTS-1信號(hào)通路抑制肺纖維化[J].中國藥理學(xué)通報(bào), 2013, 29(3): 425-431.

    [6] Akgedik R, Akgedik S, Karamanli H, et al.Effect of resveratrol on treatment of bleomycin-induced pulmonary fibrosis in rats[J].Inflammation, 2012, 35(5): 1732-1741.

    [7]朱天琦,鄭聲星.大鼠肺成纖維細(xì)胞的體外培養(yǎng)及急性炎癥模型的建立[J].溫州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2012, 42(3): 143-150.

    [8] Brown KK, Raghu G.Medical treatment for pulmonary fibrosis: current trends, concepts, and prospects[J].Clin Chest Med, 2004, 25(4): 759-772.

    [9]崔冰,胡卓偉.抗纖維化藥物治療研究進(jìn)展[J].生理科學(xué)進(jìn)展, 2008, 39(3): 233-238.

    [10]白楊,潘雋麗,蘇薇薇.白藜蘆醇與白藜蘆醇甙的研究進(jìn)展[J].中藥材, 2004, 27(1): 55-59.

    [11]劉濤,宋良文.肺纖維化發(fā)生的分子機(jī)制和早期防治研究進(jìn)展[J].軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊, 2003, 27(4): 312-316.

    [12] Maeda Y, Dave V, Whitsett JA.Transcriptional control of lung morphogenesis[J].Physiol Rev, 2007, 87(1): 219-244.

    [13] Brownell I, Guevara E, Bai CB, et al.Nerve-derived sonic hedgehog defines a niche for hair follicle stem cells capable of becoming epidermal stem cells[J].Cell Stem Cell, 2011, 8(5): 552-565.

    [14] Teglund S, Toftgard R.Hedgehog beyond medulloblastoma and basal cell carcinoma[J].Biochim Biophys Acta, 2010, 1805(2): 181-208.

    [15] Cigna N, Farrokhi Moshai E, Brayer S, et al.The hedgehog system machinery controls transforming growth factor-beta-dependent myofibroblastic differentiation in humans: involvement in idiopathic pulmonary fibrosis [J].Am J Pathol, 2012, 181 (6): 2126-2137.

    [16] Hu B, Liu J, Wu Z, et al.Reemergence of hedgehog mediates epithelial-mesenchymal crosstalk in pulmonary fibrosis[J].Am J Respir Cell Mol Biol, 2015, 52(4): 418-428.

    [17] Moshai EF, Wemeau-Stervinou L, Cigna N, et al.Targeting the hedgehog-glioma-associated oncogene homolog pathway inhibits bleomycin-induced lung fibrosis in mice[J].Am J Respir Cell Mol Biol, 2014, 51(1): 11-25.

    [18]周媛媛,曾凡軍.百草枯致肺纖維化大鼠肺組織中Smo、Gli1的表達(dá)變化及意義[J].山東醫(yī)藥, 2014, 54(7): 31-32.

    [19] Su YC, Li SC, Wu YC, et al.Resveratrol downregulates interleukin-6-stimulated sonic hedgehog signaling in human acute myeloid leukemia[J].Evid Based Complement Alternat Med, 2013, DOI:10.1155/2013/547430.

    (童穎丹編輯)

    Resveratrol inactivates sonic hedgehog signaling and alleviates lung fibrosis in rats

    Li-hua Li, Bin Lu, Hong-ke Wu, Hao Zhang, Fei-fei Yao
    (Department of Respiratory Diseases, People's Hospital of Zhengzhou, Zhengzhou, Henan 450000, China)

    Abstract:Objective To investigate the effect of resveratrol on lung fibrosis in rats.Methods Forty SD male rats were randomly allocated to four groups: control, model, 25-μmol resveratrol and 50-μmol resveratrol groups.Rats in the model group were intratracheally administrated with Bleomycin.Rats in the 25-μmol resveratrol and 50-μmol resveratrol groups were administrated with Bleomycin before intragastric administration of resveratrol.Rats in the control group were administrated with normal saline.After 30 d pathological changes of the lungs in each group were observed and the levels of hydroxyproline(HYP) and typeⅠcollagen were determined.Lung fibroblasts in the rats of each group were isolated and the expression of SHH, Smo and Gli-1 were analyzed by qRT-PCR and Western blot, along with the evaluation of proliferation and apoptosis in these cells.Results The pulmonary alveoli structures of model rats were damaged seriously with the deposition of collagen, while resveratrol attenuated the progression of lung fibrosis.Resveratrol reduced HYP content and typeⅠcollagen expression induced by Bleomycin in the lung tissue.Moreover, Bleomycin significantly upregulated the expressions of Sonic hedgehog(SHH), Smo and Gli-1 mRNAs and proteins, which were inhibited by resveratrol.In addition, Bleomycin enhanced the proliferation and reduced apoptosis of fibroblasts, while resveratrol inhibited fibroblst proliferation and promoted apoptosis.Conclusions Resveratrolbook=36,ebook=41might impede Bleomycin-induced SHH signaling and contribute to the alleviation of lung fibrosis in rats.

    Keywords:resveratrol; sonic hedgehog; lung fibrosis; Bleomycin; fibroblast

    收稿日期:2015-10-14

    文章編號(hào):1005-8982(2016)01-0035-06

    中圖分類號(hào):R563.9;R332

    文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

    猜你喜歡
    成纖維細(xì)胞白藜蘆醇肺纖維化
    我國研究人員探索肺纖維化治療新策略
    中老年保健(2022年2期)2022-11-25 23:46:31
    遺傳性T淋巴細(xì)胞免疫缺陷在百草枯所致肺纖維化中的作用
    白藜蘆醇研究進(jìn)展
    云南化工(2021年11期)2022-01-12 06:06:12
    特發(fā)性肺纖維化合并肺癌
    微等離子體與點(diǎn)陣Er:YAG激光(2940nm)治療兔耳增生性瘢痕的療效比較
    兔耳創(chuàng)傷后創(chuàng)面早期外用干擾素與法舒地爾預(yù)防瘢痕增生的實(shí)驗(yàn)研究
    腎纖維化的細(xì)胞和分子基礎(chǔ)
    豬成纖維細(xì)胞的簡易分離培養(yǎng)
    沙利度胺治療肺纖維化新進(jìn)展
    白藜蘆醇抑菌作用及抑菌機(jī)制研究進(jìn)展
    精品亚洲成国产av| 男女啪啪激烈高潮av片| 午夜福利影视在线免费观看| 国产免费一级a男人的天堂| 中文字幕制服av| 观看美女的网站| www.色视频.com| 人体艺术视频欧美日本| 久久久a久久爽久久v久久| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 黑人猛操日本美女一级片| 黄色一级大片看看| 极品少妇高潮喷水抽搐| 99热这里只有是精品在线观看| 高清不卡的av网站| 欧美少妇被猛烈插入视频| 久久这里有精品视频免费| 亚洲av免费高清在线观看| 一区二区三区四区激情视频| 欧美精品国产亚洲| 69精品国产乱码久久久| 欧美xxⅹ黑人| 五月开心婷婷网| 97超碰精品成人国产| 如何舔出高潮| 免费日韩欧美在线观看| 久久精品久久精品一区二区三区| 色吧在线观看| 五月伊人婷婷丁香| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 插逼视频在线观看| 伊人久久精品亚洲午夜| 欧美一级a爱片免费观看看| 久久婷婷青草| 精品国产露脸久久av麻豆| 欧美日韩成人在线一区二区| 亚洲国产av影院在线观看| 国产亚洲最大av| 成人无遮挡网站| 亚洲五月色婷婷综合| 成年av动漫网址| 亚洲综合精品二区| 日韩一区二区三区影片| 热re99久久精品国产66热6| 中文字幕制服av| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 亚洲精品乱久久久久久| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 十八禁网站网址无遮挡| 国产亚洲一区二区精品| 久久韩国三级中文字幕| 2018国产大陆天天弄谢| 亚洲欧洲国产日韩| 伊人亚洲综合成人网| 性高湖久久久久久久久免费观看| 亚洲欧美色中文字幕在线| 狂野欧美激情性bbbbbb| 一级二级三级毛片免费看| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 超色免费av| 黄色一级大片看看| 精品人妻在线不人妻| 亚洲av在线观看美女高潮| 97精品久久久久久久久久精品| 卡戴珊不雅视频在线播放| 欧美少妇被猛烈插入视频| 美女主播在线视频| 超色免费av| 精品少妇黑人巨大在线播放| 午夜影院在线不卡| 欧美亚洲日本最大视频资源| 久久久久国产精品人妻一区二区| 好男人视频免费观看在线| 国产片内射在线| 久久久久久伊人网av| 一区在线观看完整版| 日韩一本色道免费dvd| 黑丝袜美女国产一区| 国产成人一区二区在线| 免费少妇av软件| 亚洲精品中文字幕在线视频| 久久国内精品自在自线图片| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 桃花免费在线播放| 亚洲精品亚洲一区二区| 久久久久国产网址| 日韩视频在线欧美| 亚洲图色成人| 飞空精品影院首页| 水蜜桃什么品种好| 国产在视频线精品| 男男h啪啪无遮挡| 久久午夜综合久久蜜桃| xxx大片免费视频| 亚洲欧洲国产日韩| 最黄视频免费看| 大香蕉久久成人网| 永久免费av网站大全| 最近中文字幕2019免费版| 国产高清不卡午夜福利| 亚洲久久久国产精品| 欧美激情 高清一区二区三区| 丝袜喷水一区| 久久精品国产亚洲av天美| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 免费观看的影片在线观看| 中文字幕av电影在线播放| 大片电影免费在线观看免费| 2018国产大陆天天弄谢| 中国国产av一级| 中文字幕av电影在线播放| 好男人视频免费观看在线| 一区二区三区免费毛片| 99久久综合免费| 丝袜美足系列| 久久韩国三级中文字幕| 精品少妇久久久久久888优播| 精品一区在线观看国产| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 日韩精品有码人妻一区| 日本vs欧美在线观看视频| 3wmmmm亚洲av在线观看| 大香蕉久久成人网| 成人手机av| 国产伦精品一区二区三区视频9| 午夜av观看不卡| 欧美bdsm另类| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 亚洲欧美精品自产自拍| 性高湖久久久久久久久免费观看| 国产精品一区二区三区四区免费观看| a级片在线免费高清观看视频| av在线观看视频网站免费| 制服丝袜香蕉在线| 日本免费在线观看一区| 视频在线观看一区二区三区| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 在线观看三级黄色| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产成人a∨麻豆精品| 性色avwww在线观看| 一本大道久久a久久精品| 99热全是精品| 精品人妻一区二区三区麻豆| 精品视频人人做人人爽| videos熟女内射| 丁香六月天网| 精品视频人人做人人爽| 蜜桃在线观看..| 伊人久久精品亚洲午夜| 天堂中文最新版在线下载| 久久热精品热| av网站免费在线观看视频| 国产国语露脸激情在线看| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 大片电影免费在线观看免费| 久久影院123| 青春草亚洲视频在线观看| 国产日韩一区二区三区精品不卡 | 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 91在线精品国自产拍蜜月| 久久国产亚洲av麻豆专区| av国产精品久久久久影院| 在线观看美女被高潮喷水网站| av一本久久久久| 国产综合精华液| 校园人妻丝袜中文字幕| 天堂8中文在线网| 成人影院久久| 国产av国产精品国产| 亚洲精品av麻豆狂野| xxxhd国产人妻xxx| 国产亚洲精品久久久com| 国产精品熟女久久久久浪| av女优亚洲男人天堂| 特大巨黑吊av在线直播| 两个人免费观看高清视频| 女人久久www免费人成看片| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 欧美另类一区| 免费大片18禁| 久久影院123| 国产高清有码在线观看视频| 91精品国产国语对白视频| 高清不卡的av网站| 午夜91福利影院| 色婷婷久久久亚洲欧美| 99久国产av精品国产电影| 水蜜桃什么品种好| 青春草国产在线视频| 性色av一级| 亚洲国产精品国产精品| 亚洲欧美色中文字幕在线| av专区在线播放| 亚洲,欧美,日韩| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 女性生殖器流出的白浆| 日本免费在线观看一区| 三级国产精品欧美在线观看| 伊人亚洲综合成人网| 欧美日韩在线观看h| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 久久久久久伊人网av| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 亚洲精品国产色婷婷电影| 日韩成人av中文字幕在线观看| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 男人爽女人下面视频在线观看| 久久精品夜色国产| 欧美丝袜亚洲另类| 乱人伦中国视频| 国产色爽女视频免费观看| 亚洲精品一二三| 色网站视频免费| 亚洲精品亚洲一区二区| 国产一区二区在线观看日韩| 成人国语在线视频| 男女国产视频网站| 日韩成人av中文字幕在线观看| 能在线免费看毛片的网站| 最近2019中文字幕mv第一页| 亚洲成人一二三区av| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 两个人免费观看高清视频| 亚洲国产日韩一区二区| 久久女婷五月综合色啪小说| 日本-黄色视频高清免费观看| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产综合精华液| 午夜福利影视在线免费观看| 99久国产av精品国产电影| 美女中出高潮动态图| 亚洲av综合色区一区| av视频免费观看在线观看| 欧美最新免费一区二区三区| 制服丝袜香蕉在线| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 热99久久久久精品小说推荐| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 边亲边吃奶的免费视频| 成人黄色视频免费在线看| 在线观看三级黄色| 丝袜美足系列| 日韩一区二区三区影片| 夜夜爽夜夜爽视频| 五月开心婷婷网| 免费人妻精品一区二区三区视频| 桃花免费在线播放| 免费大片18禁| 一级毛片我不卡| 在线观看www视频免费| 国产日韩欧美亚洲二区| 色5月婷婷丁香| 免费观看av网站的网址| 亚洲熟女精品中文字幕| xxx大片免费视频| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 久久久精品区二区三区| 赤兔流量卡办理| 黄色怎么调成土黄色| a 毛片基地| 黄色配什么色好看| 大码成人一级视频| 人妻系列 视频| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 色吧在线观看| 亚洲国产色片| 十八禁网站网址无遮挡| 搡女人真爽免费视频火全软件| 青春草亚洲视频在线观看| 丰满饥渴人妻一区二区三| 亚洲国产精品999| videosex国产| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 两个人免费观看高清视频| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 嘟嘟电影网在线观看| 精品人妻在线不人妻| 亚洲第一区二区三区不卡| 又大又黄又爽视频免费| 夫妻午夜视频| 99久国产av精品国产电影| 久热久热在线精品观看| 久久久国产欧美日韩av| 久久亚洲国产成人精品v| 我的老师免费观看完整版| 桃花免费在线播放| 久久午夜综合久久蜜桃| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 内地一区二区视频在线| 精品酒店卫生间| 成人黄色视频免费在线看| 中国国产av一级| 男人爽女人下面视频在线观看| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 在线播放无遮挡| 亚洲av日韩在线播放| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 日日摸夜夜添夜夜爱| 欧美日韩亚洲高清精品| 久久这里有精品视频免费| 精品国产露脸久久av麻豆| 日本午夜av视频| 国产av国产精品国产| 天堂俺去俺来也www色官网| 国产色婷婷99| 永久网站在线| 亚洲精品乱久久久久久| 欧美少妇被猛烈插入视频| 久久久久网色| 亚洲第一av免费看| 久久久久久久久久久免费av| 日本午夜av视频| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 欧美国产精品一级二级三级| 丝袜脚勾引网站| 中文字幕久久专区| 亚洲精品自拍成人| 久久精品久久精品一区二区三区| av线在线观看网站| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 免费av中文字幕在线| 少妇 在线观看| 赤兔流量卡办理| 日韩一本色道免费dvd| 色哟哟·www| 国产黄色视频一区二区在线观看| 18+在线观看网站| 亚洲怡红院男人天堂| 国产精品一区www在线观看| 欧美97在线视频| av网站免费在线观看视频| 日韩中文字幕视频在线看片| 国产精品久久久久成人av| av线在线观看网站| 国产成人精品在线电影| 亚洲国产av影院在线观看| 国产成人a∨麻豆精品| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 国产伦理片在线播放av一区| 一级,二级,三级黄色视频| 国国产精品蜜臀av免费| 欧美日韩av久久| 在线观看免费视频网站a站| 成人毛片60女人毛片免费| 亚洲国产欧美在线一区| 成人无遮挡网站| 精品人妻一区二区三区麻豆| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 观看av在线不卡| 一二三四中文在线观看免费高清| 丰满饥渴人妻一区二区三| 成人综合一区亚洲| 午夜福利网站1000一区二区三区| 亚洲美女视频黄频| 日日摸夜夜添夜夜爱| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 黄色配什么色好看| av免费观看日本| av在线播放精品| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 欧美精品人与动牲交sv欧美| 97在线视频观看| 秋霞在线观看毛片| 亚洲精品一二三| 中文欧美无线码| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 久久久久久人妻| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 搡女人真爽免费视频火全软件| 一区二区三区乱码不卡18| 精品亚洲成a人片在线观看| av有码第一页| 草草在线视频免费看| 日日爽夜夜爽网站| 国产在线一区二区三区精| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 少妇人妻 视频| 日韩欧美精品免费久久| av黄色大香蕉| 免费观看av网站的网址| 中文精品一卡2卡3卡4更新| av女优亚洲男人天堂| 亚洲在久久综合| 看非洲黑人一级黄片| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 日韩视频在线欧美| 久久99蜜桃精品久久| 美女内射精品一级片tv| 国产成人精品一,二区| 午夜日本视频在线| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 日本免费在线观看一区| 日韩三级伦理在线观看| 日韩中文字幕视频在线看片| 日韩欧美精品免费久久| 男人添女人高潮全过程视频| 日韩一本色道免费dvd| 欧美另类一区| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 欧美+日韩+精品| 一级毛片电影观看| 在线 av 中文字幕| 日韩电影二区| 久久99蜜桃精品久久| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 黄色欧美视频在线观看| 这个男人来自地球电影免费观看 | 97超视频在线观看视频| 99久国产av精品国产电影| 97超碰精品成人国产| 国产精品不卡视频一区二区| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| av国产久精品久网站免费入址| 精品人妻在线不人妻| 91久久精品电影网| 日本爱情动作片www.在线观看| 久久99精品国语久久久| 国产视频首页在线观看| 晚上一个人看的免费电影| 国产成人精品在线电影| 亚洲精品国产色婷婷电影| 国产深夜福利视频在线观看| 91久久精品电影网| 国产成人免费无遮挡视频| 精品视频人人做人人爽| 一区二区三区精品91| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 97超碰精品成人国产| 人人妻人人澡人人看| 亚洲成人一二三区av| 亚洲中文av在线| 亚州av有码| 秋霞在线观看毛片| av有码第一页| 一边亲一边摸免费视频| a级毛色黄片| 色94色欧美一区二区| 一级片'在线观看视频| 内地一区二区视频在线| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 国产亚洲精品久久久com| 午夜免费男女啪啪视频观看| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕 | 男的添女的下面高潮视频| 久久精品久久精品一区二区三区| 乱码一卡2卡4卡精品| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 亚洲国产精品一区三区| 久久精品国产亚洲av天美| av网站免费在线观看视频| xxxhd国产人妻xxx| 免费少妇av软件| 国产精品无大码| 亚洲精品国产av成人精品| 久久久久国产网址| 黑人欧美特级aaaaaa片| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲av二区三区四区| 黑人猛操日本美女一级片| 久久久久久久国产电影| 亚洲av欧美aⅴ国产| 久久精品久久精品一区二区三区| 人妻 亚洲 视频| 日韩三级伦理在线观看| 三上悠亚av全集在线观看| 午夜日本视频在线| 亚洲综合精品二区| 国产一区二区三区综合在线观看 | 搡女人真爽免费视频火全软件| 丝袜在线中文字幕| av播播在线观看一区| 精品一区二区三区视频在线| 久久久久国产网址| 大片电影免费在线观看免费| 三上悠亚av全集在线观看| 国产永久视频网站| 久久午夜福利片| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 日本vs欧美在线观看视频| 青春草国产在线视频| 欧美三级亚洲精品| 一区二区三区四区激情视频| 免费人成在线观看视频色| 精品久久久久久久久亚洲| av女优亚洲男人天堂| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 一级a做视频免费观看| 自线自在国产av| 亚洲精品视频女| 免费观看的影片在线观看| 99国产精品免费福利视频| 久久久久视频综合| 国产精品久久久久久久久免| 中文天堂在线官网| 国模一区二区三区四区视频| 久久av网站| 久久久国产一区二区| 99久久人妻综合| 成人手机av| 黄色视频在线播放观看不卡| 亚洲人成77777在线视频| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 国产色爽女视频免费观看| 日本色播在线视频| 最近的中文字幕免费完整| 全区人妻精品视频| 一区二区三区四区激情视频| av视频免费观看在线观看| 中国三级夫妇交换| 成年av动漫网址| 在线观看免费日韩欧美大片 | 日韩,欧美,国产一区二区三区| 精品久久国产蜜桃| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 国产 一区精品| 久久精品夜色国产| 成人毛片60女人毛片免费| 99九九在线精品视频| 十八禁网站网址无遮挡| 欧美少妇被猛烈插入视频| 91成人精品电影| 少妇被粗大猛烈的视频| 青春草国产在线视频| 永久免费av网站大全| 性色avwww在线观看| 看免费成人av毛片| 亚洲精品国产色婷婷电影| 亚洲av成人精品一区久久| 搡女人真爽免费视频火全软件| 日韩一区二区三区影片| 交换朋友夫妻互换小说| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 99九九线精品视频在线观看视频| 在线观看免费视频网站a站| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 亚洲精品国产av蜜桃| 久久99精品国语久久久| 水蜜桃什么品种好| 国产成人精品久久久久久| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 九草在线视频观看| 国产综合精华液| 97超碰精品成人国产| 国产精品免费大片| 国产日韩欧美在线精品| 亚洲国产av影院在线观看| 国产精品久久久久久久久免| 只有这里有精品99| 久久人人爽人人片av| 久久久亚洲精品成人影院| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 全区人妻精品视频| 好男人视频免费观看在线| 伦理电影大哥的女人| 91在线精品国自产拍蜜月| 欧美激情国产日韩精品一区| 成人影院久久| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 午夜福利视频在线观看免费| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 亚洲精品中文字幕在线视频| 最新的欧美精品一区二区| 欧美日韩av久久| 中文天堂在线官网| 精品一区二区三区视频在线| 免费观看在线日韩| 丰满少妇做爰视频| 九九在线视频观看精品| 男男h啪啪无遮挡| 女性生殖器流出的白浆| 日日摸夜夜添夜夜爱| 国产在线免费精品| 亚洲色图综合在线观看| 精品少妇黑人巨大在线播放| 视频中文字幕在线观看| 国产成人一区二区在线| 在线观看美女被高潮喷水网站| 亚洲人成网站在线观看播放| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| av专区在线播放| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 日韩av免费高清视频| 少妇精品久久久久久久| 97超视频在线观看视频| 乱码一卡2卡4卡精品| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| videos熟女内射| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 久久久久久久亚洲中文字幕| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| a级毛片免费高清观看在线播放| 91精品一卡2卡3卡4卡| 亚洲色图综合在线观看| 久久久国产精品麻豆| 男男h啪啪无遮挡| 夫妻性生交免费视频一级片| 插阴视频在线观看视频| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 老司机亚洲免费影院| 交换朋友夫妻互换小说| 97精品久久久久久久久久精品| 久久久午夜欧美精品| 妹子高潮喷水视频| 欧美日韩精品成人综合77777| 中文字幕免费在线视频6| av福利片在线|