清絡(luò)飲對佐劑關(guān)節(jié)炎大鼠血清TNF-α、IL-1β的影響*

范為民　　李　艷

皖南醫(yī)學(xué)院弋磯山醫(yī)院中醫(yī)科，安徽蕪湖　241001

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·實(shí)驗(yàn)研究·

清絡(luò)飲對佐劑關(guān)節(jié)炎大鼠血清TNF-α、IL-1β的影響*

范為民李艷△

皖南醫(yī)學(xué)院弋磯山醫(yī)院中醫(yī)科，安徽蕪湖241001

摘要目的研究清絡(luò)飲對佐劑關(guān)節(jié)炎(AA)大鼠的治療作用和機(jī)制。方法建立AA大鼠模型，隨機(jī)分為空白組(K組)、模型組(M組)、雷公藤多苷片組(L組)、清絡(luò)飲組(Q組)，每組10只。于致炎第19天，K組和M組灌胃等容積的生理鹽水，L組灌胃雷公藤多苷片水溶液10 mg/kg，Q組灌胃清絡(luò)飲3 g/kg。每組大鼠連續(xù)給藥30 d。于致炎后第18天(給藥前)、給藥后30 d分別測定每只大鼠右后足容積，并計算大鼠足腫脹率。于實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，測定大鼠血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)水平。結(jié)果在致炎后18 d，與空白組足腫脹率相比，其他3組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；在給藥后30 d，清絡(luò)飲組與雷公藤多苷片組足腫脹率與模型組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，與空白組相比，模型組大鼠TNF-α、IL-1β含量明顯高于空白組(P<0.01)與模型組相比，清絡(luò)飲組與雷公藤多苷片組大鼠TNF-α、IL-1β含量都低于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論清絡(luò)飲能夠有效降低AA大鼠足腫脹率，減少血TNF-α、IL-1β含量，其對AA大鼠的保護(hù)作用可能與降低TNF-α、IL-1β含量有關(guān)。

關(guān)鍵詞清絡(luò)飲；佐劑關(guān)節(jié)炎；腫瘤壞死因子-α；白細(xì)胞介素-1β

Effect of Qingluoyin on Serum Level of TNF-α and IL-1β in Adjuvant Arthritis(AA) Rats

FAN Weiming，LI Yan△

DepartmentofTraditionalChineseMedicine，YijishanHospitalofWan’nanMedicalCollege，AnhuiWuhu241001，China

AbstractObjectiveTo observe the clinical effects of Qingluoyin on adjuvant arthritis(AA)rats and to probe its mechanism.MethodsAA rats were established and divided into model group，glycoside group and Qingluoyin group.On the nineteenth day after inflammation，control group and model group were given normal saline，Qingluoyin group was given Qingluoyin(3 g/kg)and glycoside group was given glycoside tablet(10 mg/kg)consequently for 30 days.Rat foot swelling rate and serum levels of TNF-α and IL-1β were observed both before and after treatment.ResultsFoot swelling rate of AA rats was obviously higher than the control group(P<0.05).After the treatment，foot swelling rates of the glycoside group and the Qingluoyin group were both significantly lower than that of the model group.After treatment，serum levels of TNF-α and IL-1β in the model group were obviously higher than the other three groups(allP<0.05).ConclusionQingluoyin can reduce foot swelling rate and serum levels of TNF-α and IL-1β of AA rat.Its protective effect may be related with its effect in reduction of TNF-α and IL-1β in AA rats.

Key wordsQingluoyin；adjuvant arthritis；TNF-α；IL-1β

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是一種以滑膜增生、關(guān)節(jié)破壞為主要特征的自身免疫系統(tǒng)疾病。目前，其發(fā)病機(jī)制還未徹底清楚，近年來，細(xì)胞因子成為對此病研究的重點(diǎn)，而TNF-α、IL-1β是核心因子，成為研究細(xì)胞因子的焦點(diǎn)。清絡(luò)飲是由首屆國醫(yī)大師李濟(jì)仁教授經(jīng)過長期臨床實(shí)踐，創(chuàng)制出治療RA的經(jīng)驗(yàn)方。前期的臨床觀察證實(shí)其對RA具有較好的療效，本研究以佐劑關(guān)節(jié)炎(AA)大鼠為動物模型，從細(xì)胞因子角度，觀察清絡(luò)飲對AA大鼠TNF-α、IL-1β表達(dá)的影響，探討清絡(luò)飲對RA的作用機(jī)制。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動物

SPF級雄性SD大鼠40只，體重140～160 g，由上海杰思捷實(shí)驗(yàn)動物有限公司提供，許可證：SCKX(滬)2013-0006。

1.2藥品與試劑

清絡(luò)飲主要由苦參、青風(fēng)藤、萆薢、黃柏組成，由本市中山大藥房提供，取各等分中藥36 g，煎煮2次，每次30 min，濃縮成1 g/ml，雷公藤多苷片由上海復(fù)旦復(fù)華藥業(yè)有限公司提供，國藥準(zhǔn)字Z31020415；生理鹽水由安徽雙鶴藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)提供，國藥準(zhǔn)字H34023609；弗氏完全佐劑由美國Sigma公司提供，批號SLBC5083。

1.3實(shí)驗(yàn)儀器

酶標(biāo)儀由雷杜生命科學(xué)股份有限公司提供，型號：RT-6000；洗板機(jī)由雷杜生命科學(xué)股份有限公司提供，型號：RT-3100；離心機(jī)由安徽嘉文儀器有限責(zé)任公司提供，型號：JW3021 HR；漩渦混合器由其林貝爾儀器制造有限公司，型號：GL-88 B；電熱恒溫箱由上海三發(fā)科學(xué)儀器有限公司，型號：DNP-9052 BS-Ⅲ。

1.4方法

1.4.1造模方法將40只大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為空白組(K組)和造模組，空白組10只大鼠，造模組30只大鼠。除空白組外，造模組每只大鼠右后足趾皮內(nèi)注射弗氏完全佐劑0.1 ml，復(fù)制AA大鼠模型[1]。

1.4.2給藥方法造模組致炎第19天，將復(fù)制的AA大鼠隨機(jī)分為模型組(M組)、雷公藤多苷片組(L組)、清絡(luò)飲組(Q組)，每組10只。于致炎第19天，Q組灌胃清絡(luò)飲3 g/kg，L組灌胃雷公藤多苷片水溶液10 mg/kg，K組和M組灌胃等容積的生理鹽水。每組大鼠連續(xù)給藥30 d。

1.4.3指標(biāo)測定①大鼠足腫脹率測定：于造模前、致炎后第18天、給藥后30 d，應(yīng)用排水法分別測定每只大鼠右后足容積，并計算出大鼠足腫脹率，即腫脹率(%)=[(致炎后足容積-致炎前足容積)/致炎前足容積]×100%；②大鼠血清TNF-α、IL-1β測定：于實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，取大鼠腹主動脈血，嚴(yán)格按照試劑盒要求，測定大鼠血清TNF-α、IL-1β水平。

1.5統(tǒng)計學(xué)處理

2結(jié)果

2.1各組大鼠足腫脹率比較

在致炎后第18天(給藥前)，與空白組(K組)相比，其他3組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，表明大鼠經(jīng)造模后，足部形成腫脹，腫脹率明顯升高；在給藥后30 d，與模型組(M組)相比，清絡(luò)飲組(Q組)和雷公藤多苷片組(L組)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，表明清絡(luò)飲和雷公藤多苷片對AA大鼠足腫脹具有治療作用，但清絡(luò)飲組(Q組)與雷公藤多苷片組(L組)比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。見表1。

表1　各組大鼠足腫脹率比較

與K組比較*P<0.05；與M組比較△P<0.05

2.2各組大鼠TNF-α、IL-1β水平比較

結(jié)果顯示，與空白組(K組)相比，模型組(M)大鼠TNF-α、IL-1β含量明顯高于空白組(K)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，表明模型組(M組)大鼠血清TNF-α、IL-1β含量升高；與模型組(M組)相比，清絡(luò)飲組(Q組)和雷公藤多苷片組(L組)TNF-α、IL-1β低于模型組(M組)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，表明清絡(luò)飲和雷公藤多苷片能夠明顯降低TNF-α、IL-1β含量。見表2。

表2各組大鼠TNF-α、IL-1β水平比較

組別TNF-αIL-1βK組41.53±15.1467.46±10.52M組70.31±18.55*116.51±27.58*L組58.98±16.63△91.37±18.33△Q組59.63±16.98△89.75±17.66△

與K組比較*P<0.05；與M組比較△P<0.05

3討論

AA大鼠模型是一種免疫性炎癥模型，其免疫機(jī)制是由于弗氏完全佐劑中結(jié)核分枝桿菌被T細(xì)胞識別，引起致敏反應(yīng)，病理表現(xiàn)與RA基本相似。因此，它是研究RA常用的動物模型[2]。

近些年來，細(xì)胞因子在RA發(fā)病中的作用機(jī)制成為研究的重點(diǎn)[3-4]。而大量研究[5-6]也證實(shí)，TNF-α、IL-1β的異常表達(dá)和失調(diào)是RA發(fā)病重要機(jī)制之一，它們在RA的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中起中心作用，是RA發(fā)病機(jī)制直接相關(guān)的重要細(xì)胞因子。其中TNF-α在RA的炎癥反應(yīng)過程中起關(guān)鍵作用，而IL-1β是參與RA進(jìn)展期關(guān)節(jié)破壞的重要炎癥細(xì)胞因子[7-8]。清絡(luò)飲由苦參、青風(fēng)藤、萆薢、黃柏組成。方中苦參功效清熱、燥濕、殺蟲，現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)[9]證明，以苦參主要成分制成的復(fù)方苦參注射液能夠降低炎性因子IL-1β、TNF-α的水平；萆薢長于滲濕，主治風(fēng)濕痹痛，現(xiàn)代藥理研究[10]表明其能夠抗腫瘤、調(diào)脂抗炎、降尿酸等；青風(fēng)藤功效祛風(fēng)濕、通經(jīng)絡(luò)、利小便，主治風(fēng)濕痹痛、關(guān)節(jié)腫脹，現(xiàn)代藥理學(xué)研究[11]表明，青風(fēng)藤具有鎮(zhèn)痛抗炎、免疫調(diào)節(jié)的作用，對緩解RA關(guān)節(jié)腫脹具有明顯療效；黃柏具有清熱燥濕、瀉火除蒸、解毒療瘡的功效，現(xiàn)代藥理研究[12]表明，黃柏具有抗炎、抗病毒、抗痛風(fēng)的作用，對活動期RA具有明顯緩解作用。

本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，清絡(luò)飲能夠有效地降低AA大鼠足腫脹率，降低血TNF-α、IL-1β含量。清絡(luò)飲降低AA大鼠足腫脹，對AA大鼠的保護(hù)作用可能與減少TNF-α、IL-1β含量有關(guān)，進(jìn)一步揭示了清絡(luò)飲治療RA的可能機(jī)制。

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(收稿日期：2015-11-30)

通信作者△，Corresponding author，E-mail：liyan.0301@163.com

doi：10.3969/j.issn.1674-4616.2016.01.008

*國家中醫(yī)藥管理局重點(diǎn)學(xué)科中醫(yī)痹病學(xué)建設(shè)項目(國中醫(yī)藥人教發(fā)[2012]32號)