一例豬圓環(huán)病毒病2型和大腸桿菌混合感染的診斷

杜海燕，陳光麗，荊汝頂，秦保亮，韓俊偉

（1.新鄉(xiāng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南 新鄉(xiāng) 453000；2.新鄉(xiāng)市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所）

一例豬圓環(huán)病毒病2型和大腸桿菌混合感染的診斷

杜海燕1，陳光麗1，荊汝頂1，秦保亮1，韓俊偉2

（1.新鄉(xiāng)市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南 新鄉(xiāng) 453000；2.新鄉(xiāng)市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所）

豬圓環(huán)病毒病以圓環(huán)病毒-2型（PCV2）為主要病原，一般于斷奶后2～3d或1w發(fā)病，急性發(fā)病豬群中，病死率可達(dá)10%。大腸桿菌主要是一種條件性致病菌，其中以仔豬黃白痢最為常見。2016年3月份，某豬場1月齡仔豬突然發(fā)病，病死率較高，送檢病豬3頭進(jìn)行病因診斷。為了解該規(guī)?；i場疫病的感染狀況，通過該豬場豬群發(fā)病情況及剖檢病理觀察，初步判斷該豬場發(fā)病豬疑似為豬瘟病毒、豬圓環(huán)病毒2型或細(xì)菌感染，通過進(jìn)一步分子生物學(xué)檢測及細(xì)菌分離培養(yǎng)與鑒定，確診該豬場發(fā)病豬為豬圓環(huán)病毒2型和大腸桿菌混合感染?，F(xiàn)將診斷結(jié)果報(bào)道如下：

1 發(fā)病情況

該豬場采取自繁自養(yǎng)方式，共存欄生豬230頭，其中保育豬65頭，病死率達(dá)20%左右。主要表現(xiàn)為精神沉郁，體溫升高，被毛蓬亂，呼吸急促，腹瀉，消瘦，體表淋巴結(jié)腫大，病死豬明顯消瘦，貧血、可視黏膜黃疸。

2 剖檢病理變化

對送檢3頭1月齡病死豬進(jìn)行剖檢，結(jié)果均可見胃腸脹氣，肝臟黃染，且肝臟有明顯壞死灶；脾臟腫大，邊緣有丘狀突起，并有黑色梗死；肺堅(jiān)硬出現(xiàn)實(shí)質(zhì)性病變；腎臟針尖狀出血點(diǎn)；心包心耳出血；腸及腸系膜出血，腸系膜淋巴結(jié)腫大。

3 豬圓環(huán)病毒-2型病毒核酸檢測

3.1 DNA提取

分別取病豬病理變化明顯的淋巴結(jié)、脾臟和肺臟組織研磨，反復(fù)凍融3次，8000rpm離心10min，取上清液采用離心柱提取法提取病料DNA樣本。

3.2 豬圓環(huán)病毒熒光PCR擴(kuò)增

利用豬圓環(huán)病毒-2型病原核酸檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）對待檢病料進(jìn)行檢測。擴(kuò)增體系根據(jù)試劑盒說明進(jìn)行。標(biāo)記熒光基團(tuán)種類報(bào)告基團(tuán)FAM，淬滅基團(tuán)TAMRA。擴(kuò)增反應(yīng)條件：94℃2min，后94℃30 s-55℃45s（采集熒光），40個(gè)循環(huán)。

3.3 結(jié)果分析判定

反應(yīng)結(jié)束后，Ct值在40以上的為陰性，Ct值小于35的為陽性，Ct值在35-40之間，為灰區(qū)，需要進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)。重復(fù)試驗(yàn)后，Ct值仍在35-40之間，判斷為陽性，沒有熒光值增長為陰性。結(jié)果見下圖。

圖：圓環(huán)病毒-2型病原核酸檢測結(jié)果

根據(jù)熒光PCR擴(kuò)增結(jié)果可知，陽性對照Ct值18.22，待檢樣品Ct值是26.57，出現(xiàn)特異性熒光曲線，陰性對照未出現(xiàn)特異性熒光曲線。結(jié)果顯示送檢病料檢測到豬圓環(huán)病毒-2型病原核酸，表明病死豬感染豬圓環(huán)病毒-2型。

4 細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)

4.1 細(xì)菌的分離培養(yǎng)

分別取肝、腎及腹腔積液接種于麥康凱培養(yǎng)基，置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12～24h，觀察在麥康凱培養(yǎng)基上長出粉紅色菌落，經(jīng)染色鏡檢為革蘭氏陰性短桿菌，可判定為大腸桿菌。

4.2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

取上述麥康凱培養(yǎng)基上細(xì)菌的純培養(yǎng)物，選擇常用的抗菌素進(jìn)行藥物敏感試驗(yàn)，結(jié)果見下表。

表 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

通過對大腸桿菌分離培養(yǎng)物進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)該菌對慶大霉素敏感，對環(huán)丙沙星、卡那霉素、頭孢噻呋、舒坦西林低敏，而菌必治、頭孢氨芐、利福平則耐藥?？蛇x擇對該致病菌抑制效果較好的慶大霉素進(jìn)行治療，另外也可使用環(huán)丙沙星、卡那霉素、頭孢噻呋和舒坦西林進(jìn)行相應(yīng)治療。

5 討論

豬圓環(huán)病毒-2型在我國健康豬群中已普遍發(fā)生，表現(xiàn)為流行范圍廣、混合感染嚴(yán)重、血清陽性率高，尤其種豬抗體陽性感染率最高，PCV-2的感染會造成動(dòng)物免疫抑制，再感染其他病原機(jī)會增大，豬群易受到豬瘟、偽狂犬病、大腸桿菌病等的侵襲。豬圓環(huán)病毒-2型導(dǎo)致的仔豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征的源頭在種豬上，而發(fā)病的一般是仔豬，母豬通過多種途徑排毒傳染哺乳仔豬，造成仔豬的早期感染。由此表明該豬場可能存在豬圓環(huán)病毒的隱形感染，通過采取綜合性防治措施來預(yù)防該病。

目前疫苗免疫主要依靠進(jìn)口苗，導(dǎo)致生產(chǎn)成本較高。因此主要靠加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，減少應(yīng)激，控制繼發(fā)感染以降低損失。嚴(yán)格采取“全進(jìn)全出”方式，清除帶毒種豬并凈化，加強(qiáng)引種檢疫，嚴(yán)防該病進(jìn)場，做好消毒措施，尤其保育豬圈清空后，消毒晾曬1w后再引入豬群。一旦發(fā)生豬圓環(huán)病毒感染，易并發(fā)細(xì)菌性感染，治療時(shí)可配合廣譜抗菌藥物或進(jìn)行藥敏試驗(yàn)選擇敏感性抗菌藥物，減少并發(fā)感染。

S858.28

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1004-5090（2016）11-0041-02

2016-09-10）