柱后衍生法測定食用油中黃曲霉毒素B1含量的研究

◎趙麗燕

（浙江華才檢測技術(shù)有限公司，浙江 諸暨 311800）

柱后衍生法測定食用油中黃曲霉毒素B1含量的研究

◎趙麗燕

（浙江華才檢測技術(shù)有限公司，浙江 諸暨 311800）

通過使用柱后衍生系統(tǒng)，建立柱后碘衍生法測定食用油中黃曲霉毒素B1含量的方法。結(jié)果表明：黃曲霉毒素B1在0.5～55.0 ng/mL濃度范圍內(nèi)具有良好的線性相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)為0.999；對黃曲霉毒素B1濃度0.4、2.0、20.0 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)品進行6次平行分析，重復(fù)性結(jié)果良好，回收率范圍為85.8%～106.2%，方法檢出限為0.050 μg/kg。

食用油；黃曲霉毒素B1；柱后衍生；熒光檢測

黃曲霉毒素是黃曲霉和寄生曲霉的代謝產(chǎn)物，具有極強的毒性和致癌性，可引發(fā)動物患肝癌、腎癌、胃癌等。其中以黃曲霉毒素B1最為多見，其毒性和致癌性也最強。目前，生產(chǎn)食用油的不合格企業(yè)多為小規(guī)模的加工廠，均采用半精煉工藝，生產(chǎn)量較小，主要以散裝形式零售供應(yīng)附近居民。造成不合格的原因，主要是這些企業(yè)沒有嚴(yán)格按規(guī)定進行原料進貨把關(guān)，食品安全主體責(zé)任不落實?；ㄉ谏L、貯存過程中由于天氣濕熱發(fā)霉，黃曲霉菌生長繁殖產(chǎn)生黃曲霉毒素。一些企業(yè)對購進的花生原料未能嚴(yán)格篩選和檢測，部分霉變花生被用于食用油生產(chǎn)，導(dǎo)致黃曲霉毒素超標(biāo)。由于黃曲霉毒素在水溶液中會發(fā)生熒光猝滅，色譜中B1和G1兩種異構(gòu)體熒光強度很弱，需進行衍生化。而柱后衍生法具有靈敏度高的特性，適合食用油中黃曲霉毒素B1含量的日常檢測。

1 試驗部分

1.1 試劑與儀器

1.1.1 試劑

甲醇;乙腈;苯;純水;黃曲霉毒素B1儲備液1.02 mg／L;免疫親和柱。

1.1.2 儀器

島津LC-20A液相配熒光檢測器;柱后衍生系統(tǒng)。

1.2 分析條件

流動相:A-水，B-甲醇，55∶45;流速:1.0 mL／min。

色譜柱:C-18（4.6 mm×250.0 mm，5 μm）;柱溫:40 ℃。

衍生溶液:0.05%碘溶液（取0.5 g碘單質(zhì)，加入100 mL甲醇，用純水稀釋至1 000 mL）;衍生流速:0.3 mL／min;衍生溫度:70 ℃;檢測波長:Ex＝350 nm，Em＝450 nm;進樣體積:10 μL。

1.3 樣品處理

1.3.1 黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

取不同體積的黃曲霉毒素B1儲備液，用乙腈和苯（v／v，2∶98）稀釋，配制成濃度為0.4、0.8、1.6、3.2、6.4、12.8、25.6 ng／mL和51.2 ng／mL的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，

儲存于棕色小瓶中，于4 ℃冰箱中存放。

1.3.2 試樣的制備

參考國家標(biāo)準(zhǔn)GB／T 18979-2003《食品中黃曲霉毒素的測定-免疫親和層析凈化高效液相色譜法和熒光光度法》中植物油脂樣品前處理凈化方法進行制備。

2 結(jié)果與討論

2.1 黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)譜圖及標(biāo)準(zhǔn)曲線黃曲霉毒素B1標(biāo)樣色譜圖如圖1所示。由圖2可以看出在0.4～51.2 ng／mL濃度范圍內(nèi)，黃曲霉毒素B1線性相關(guān)性良好，相關(guān)系數(shù)為0.999，線性方程為Y＝（22 249.9）X+（-2 335.31）。

2.2 基質(zhì)加標(biāo)實驗

按照1.3.2所述步驟處理花生油，檢測某品牌花生油中的黃曲霉毒素B1含量。圖3為某品牌花生油樣品空白色譜圖，可以看出該樣品并未檢出黃曲霉毒素B1;圖4為空白樣品加標(biāo)2.000 μg／kg的色譜圖，基質(zhì)并未干擾到目標(biāo)峰，目標(biāo)物具有較好的信號響應(yīng)。實際樣品加標(biāo)不同濃度標(biāo)樣計算樣品回收率結(jié)果見表1。由3倍信噪比和10倍信噪比分別計算方法檢出限和定量限，檢出限為0.045 μg／kg，定量限為0.150 μg／kg。

表1 實際樣品加標(biāo)不同濃度回收率結(jié)果(n＝3)

圖1 黃曲霉毒素B1標(biāo)樣1.6 ng/mL的色譜圖

圖2 黃曲霉毒素B1的校準(zhǔn)曲線

圖3 空白樣品色譜圖

圖4 空白樣品加標(biāo)2.000 μg/kg色譜圖

2.3 實際樣品分析

將該方法應(yīng)用于實際食用油中黃曲霉毒素B1檢測，檢出1份食用油中含有黃曲霉毒素B1，含量為32.000 μg／kg（見圖5）。

3 結(jié)論

用柱后碘衍生測定食用油中黃曲霉毒素B1含量測定的方法，黃曲霉毒素B1在0.5～55.0 ng／mL濃度范圍內(nèi)具有良好的線性相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)為0.999，方法檢出限為0.050 μg／kg，定量限為0.150 μg／kg。實際樣品加標(biāo)濃度0.200 μg／kg和2.000 μg／kg，回收率范圍為85.0%～110.0%。該方法具有靈敏度高和重復(fù)性好等優(yōu)點。

圖5 實際樣品檢測色譜圖結(jié)果

[1]中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局，中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會.GB／T23212-2008，牛奶和奶粉中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2的測定液相色譜-熒光檢測法[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008.

[2]中華人民共和國衛(wèi)生部，中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會.GB／T5009.23-2006，食品中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2的測定[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2006.

Determination of Aflatoxin B1in Edible Oil by Post Column Derivatization

Zhao Liyan
（Zhejiang Huacai Detection Technology Co., Ltd., Zhejiang Zhuji 311800, China）

Determination of aflatoxin B1in edible oil by post column derivatization with post column derivatization,. The results showed that the aflatoxin B1has good linear correlation in the concentration range of 0.5～55 ng/mL, the correlation coefficient was 0.999; The results of six parallel analysis of the concentration of 0.4, 2, 20 ng/mL of a fl atoxin B1standard was good, recovery rate was 85.8% to 106.2%. The detection limit was 0.050 μ g/kg.

Edible oil; A flatoxin B1; Post column derivatization; Fluorescence detection

TS207.3