高效液相色譜法測定進(jìn)口魚柳中的吊白塊方法研究

劉瑞芳，廖和菁，胡禮淵，梁東軍（東興出入境檢驗(yàn)檢疫局，廣西東興538100）

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高效液相色譜法測定進(jìn)口魚柳中的吊白塊方法研究

劉瑞芳，廖和菁，胡禮淵，梁東軍
（東興出入境檢驗(yàn)檢疫局，廣西東興538100）

摘要：樣品中加入鹽酸-氯化鈉溶液酸化，超聲波輔助提取。提取液中加入乙酸鈉緩沖液和2，4-二硝基苯肼衍生液，于50℃水浴衍生化后過濾膜上機(jī)。同時對魚柳中的甲醛含量進(jìn)行檢測，以評估魚柳中的本底甲醛。最終甲醛次硫酸氫鈉的含量為甲醛次硫酸氫鈉的測定值與甲醛的測定值之差。結(jié)果表明，此方法線性良好，r2=0.999 97；樣品加標(biāo)回收率在92.3%~102%之間。

關(guān)鍵詞：魚柳；高效液相色譜法；甲醛合次硫酸氫鈉

“吊白塊”又稱雕白塊、雕白粉，為甲醛合次硫酸氫鈉的俗稱，是印染、造紙工業(yè)常用的漂白劑。近年來常有不法商販將其添加在面粉、腐竹、魚柳等食品中，以增加食品的感官性狀和口感。但研究表明，高溫下吊白塊具有極強(qiáng)的還原性，60℃時，吊白塊水溶液即開始分解出甲醛、二氧化硫等有毒物質(zhì)。這些都對人體產(chǎn)生巨大的危害，特別是甲醛進(jìn)入人體后，即可被人體吸收，引起肺水腫，肝、腎充血及血管周圍水腫等，是一種潛在的致癌物質(zhì)[1]，故我國是禁止在食品中添加吊白塊的。越南進(jìn)口的魚柳干多為海產(chǎn)魚肉制成。根據(jù)相關(guān)研究，海產(chǎn)魚類在加工儲存過程中，由于魚類自身的生物化學(xué)變化而形成甲醛[2]。我國針對水產(chǎn)品及其制品中吊白塊的檢測，還未出相關(guān)檢測標(biāo)準(zhǔn)。本文參照國家標(biāo)準(zhǔn)《小麥粉與大米粉及其制品中甲醛次硫酸氫鈉含量的測定》（GB/T 21126-2007），根據(jù)甲醛次硫酸氫鈉以及海產(chǎn)制品的性質(zhì)，采用高效液相色譜法對魚柳中的吊白塊進(jìn)行測定研究。

1材料與方法

1.1主要儀器和試劑

Agilent 1200高效液相色譜儀（配二極管陣列檢測器）：美國安捷倫公司；Integral 10純水/超純水系統(tǒng)：密理博公司；yamatoSA300多功能振蕩器：日本大和科學(xué)株式會社；Sigma 3-30K高速冷凍離心機(jī)：德國SIGIGMA公司；恒濕水浴鍋；微孔濾膜0.45 μm有機(jī)系：美國PALL公司。

1.2試劑

乙腈：色譜純；鹽酸-氯化鈉溶液：稱取20 g氯化鈉于1 000 mL容量瓶中，用少量水溶解，加60 mL 37 %鹽酸，加水定容至刻度；緩沖溶液：稱取2.64 g乙酸鈉，以適量水溶解，加入1.0mL冰乙酸，加水定容至500mL；2，4-二硝基苯肼溶液（0.6 g/L）：稱取2，4-二硝基苯肼300 mg，用乙腈溶解定容至500 mL；甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液：100 μg/mL，環(huán)境保護(hù)部標(biāo)準(zhǔn)樣品研究所研制。其他試劑均為分析純。所用水為GB/T 6682規(guī)定的一級水。

1.3色譜條件

色譜柱：C18柱，250 mm×4.6 mm，5 μm不銹鋼柱；流動相：甲醇-水（70∶30，體積比）；流速：1 mL/min；柱溫：40℃；檢測波長：365 nm；進(jìn)樣量：20 μL。

1.4方法

1.4.1樣品測定

酸性溶液中，樣品中殘留的甲醛次硫酸氫鈉分解，釋放出甲醛被水提取，提取后的甲醛與2，4-二硝基苯肼發(fā)生加成反應(yīng)，生成甲醛衍生物。液液萃取凈化后，在365 nm波長處，高效液相色譜法測定，外標(biāo)法定量。

甲醛次硫酸氫鈉的測定：稱取粉碎混勻后的樣品2.00 g于50 mL塑料離心管中，準(zhǔn)確加入20 mL鹽酸-氯化鈉溶液，超聲輔助提取30min，于25℃、10000r/min離心15 min。取上清液2 mL于10 mL塑料離心管中，加緩沖液到5.0 mL，再用2，4-二硝基苯肼溶液定容至10.0 mL，蓋上蓋子混勻，50℃水浴加熱45 min，取出冷卻至室溫，過0.45 μm微孔濾膜裝瓶待測。

甲醛的測定：稱取粉碎混勻后的樣品2.00 g于50 mL塑料離心管中，首先準(zhǔn)確加入2，4-二硝基苯肼溶液10 mL，然后再加入緩沖液10 mL，旋緊蓋子混勻后，置于50℃水浴加熱45 min，取出冷卻至室溫，于25℃、10 000 r/min離心15 min，上清液過0.45 μm微孔濾膜裝瓶待測。

1.4.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

移取20、50、100、200、500 μL甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液，置于10 mL帶蓋離心管中，加緩沖液到5.0 mL，再用2，4-二硝基苯肼溶液定容至10.0 mL，蓋上蓋子混勻，50℃水浴加熱1 h，取出冷卻至室溫，過0.45 μm微孔濾膜。

2試驗(yàn)結(jié)果

2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線

甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與峰面積成正比，并在一定的濃度范圍內(nèi)成線性關(guān)系，具體數(shù)據(jù)見表1，線性關(guān)系見圖1。

從圖中可知，標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)為r2=999 97。

表1甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與峰面積Table 1 Formaldehyde standard solution concentration and peak area

圖1甲醛不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液與峰面積線性關(guān)系Fig.1 Formaldehyde concentration standard solution and the linear relationship between peak area

2.2檢測結(jié)果

由于魚柳本身含有一定量的本底甲醛[3]，故魚柳樣品中最終甲醛次硫酸氫鈉的含量為甲醛次硫酸氫鈉的測定值與甲醛的測定值之差。測定結(jié)果見表2。

表2試驗(yàn)檢測結(jié)果Table 2 The experimental test results

判定標(biāo)準(zhǔn)：兩個測量結(jié)果的絕對差值不超過算術(shù)平均值的15 %時，為未發(fā)現(xiàn)顯著性差異[5]。表2中5組數(shù)據(jù)的絕對差值均未超過算術(shù)平均值的15 %，故5組數(shù)據(jù)均為未發(fā)現(xiàn)顯著性差異。

2.3方法的檢出限

由于樣品本底的存在，無法找到空白樣品，故采用全程序空白值確定法計(jì)算檢出限[4]，經(jīng)20次空白平行測定標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.087，檢出限為5.0 mg/kg。

2.4精密度

取2份樣品，相同條件下平行測定8次，結(jié)果見表3。

2.5準(zhǔn)確度

通過對樣品在不同濃度水平上加標(biāo)，回收率在92.3 %~102 %之間，詳見表4。

表3精密度試驗(yàn)結(jié)果Table 3 The precision of the result of the experiment

表4準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果Table 4 The accuracy of the result of the experiment

2.6色譜圖

經(jīng)對標(biāo)準(zhǔn)溶液以及樣品上機(jī)測試，樣品的出峰時間與標(biāo)準(zhǔn)品的出峰時間一致，且峰形標(biāo)準(zhǔn)，無雜峰干擾，詳見圖2、圖3。

圖3樣品色譜圖Fig.3 The sample chromatograms

3結(jié)論及討論

1）《小麥粉與大米粉及其制品中甲醛次硫酸氫鈉含量的測定》（GB/T 21126-2007）中，緩沖溶液采用磷酸氫二鈉，衍生液為經(jīng)過純化后的2，4-二硝基苯肼溶液。本方法采用乙酸鈉緩沖溶液和2，4-二硝基苯肼溶液作為衍生液。改進(jìn)后，同一緩沖液能同時進(jìn)行甲醛合次硫酸氫鈉和甲醛的檢測，保證了檢測本底的一致，而衍生液的配制更簡便，更節(jié)省時間。經(jīng)過試驗(yàn)測試，未經(jīng)純化的衍生液進(jìn)行衍生化，未對結(jié)果產(chǎn)生影響。

2）衍生化采取50℃水浴45 min。甲醛合次硫酸氫鈉水溶液于60℃即開始分解出甲醛、二氧化硫等。如采用60℃水浴進(jìn)行衍生化，則甲醛合次硫酸氫鈉轉(zhuǎn)化為甲醛，使得甲醛測定值升高，影響甲醛合次硫酸氫鈉結(jié)果的最終判定。

3）與《小麥粉與大米粉及其制品中甲醛次硫酸氫鈉含量的測定》（GB/T 21126-2007）相比，本文所用方法以鹽酸-氯化鈉作為提取液，進(jìn)行超聲波輔助提取，縮短了樣品提取時間，提升了提取效果。提取后，轉(zhuǎn)移2 mL提取液，直接加衍生劑，50℃水浴45 min衍生化，避免了加正乙烷萃取的過程，簡化了操作步驟，縮短了前處理時間，通過對樣品進(jìn)行加標(biāo)，測精密度以及檢出限，充分證明此方法能滿足檢測要求。

參考文獻(xiàn)：

[1]張秀芝,辛雨家,何鑫巍,等.甲醛的危害及檢測[J].山西建筑, 2013,39(7):208-209

[2]馬敬軍,周德慶,張雙靈.水產(chǎn)品中甲醛本底含量與產(chǎn)生機(jī)理的研究進(jìn)展[J].漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展, 2004, 25(4): 85-89

[3]韓宏偉.水產(chǎn)品中甲醛本底含量及生成機(jī)制研究進(jìn)展[J].國外醫(yī)學(xué):衛(wèi)生學(xué)分冊, 2008,35(4):5

[4]王婷,郭晉君.分析化學(xué)中檢出限的分類及計(jì)算方法[J].廣東化工,2013,40(17):189

[5]中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局,中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會. GB/T 21126-2007小麥粉與大米粉及其制品中甲醛次硫酸氫鈉含量的測定[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社:2007

Study on the Determination Method of the Sodium Formaldehyde Fulfoxylate in Imported Fish Fillet by HPLC

LIU Rui-fang，LIAO He-jing，HU Li-yuan，LIANG Dong-jun
（Dongxing Import and Export Inspection and Quarantine Bureau，Dongxing 538100，Guangxi，China）

Abstract：The sample was acidified after adding hydrochloric acid-sodium chloride solution，then extracted by Ultrasound-assisted. The sodium acetate buffer and 2，4-dinitrobenzene hydrazine derivative liquid were added in extraction solution，had derivatization by water bath at 50℃，it was detected after filtered. At the same time，the formaldehyde content in the fish fillets was detected. The content of hydroxymethanesulfinic acid monosodium salt dihydrate was the difference between the measured value of hydroxymethanesulfinic acid monosodium salt dihydrate and formaldehyde. The result showed that the method was a good linear，r2=0.999 97. The recoveries was between 92.3 % and 102 %.

Key words：fish fillet；HPLC；sodium formaldehyde sulphoxylate

收稿日期：2014-08-06

DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2016.01.039

作者簡介：劉瑞芳（1980—），女（漢），工程師，本科，從事食品檢驗(yàn)工作。