平痤洗劑皮膚刺激和過敏性實(shí)驗(yàn)研究

李彥林，周云豐，李琳，王麗麗，陳曦，許揚(yáng)

中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所，北京 100193

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平痤洗劑皮膚刺激和過敏性實(shí)驗(yàn)研究

李彥林，周云豐，李琳，王麗麗，陳曦，許揚(yáng)

中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所，北京 100193

摘要：目的觀察平痤洗劑外用對(duì)動(dòng)物皮膚的刺激性和過敏性反應(yīng)。方法皮膚刺激反應(yīng)實(shí)驗(yàn)選用新西蘭大耳白家兔，分為完整皮膚組和破損皮膚組，2組分別在背部?jī)蓚?cè)的脫毛處涂以蒸餾水和平痤洗劑，觀察皮膚的刺激反應(yīng)并進(jìn)行評(píng)分。皮膚過敏反應(yīng)實(shí)驗(yàn)選用白色豚鼠，分為蒸餾水組、平痤洗劑組和陽(yáng)性對(duì)照組，分別在背部脫毛處涂以蒸餾水、平痤洗劑和2,4-二硝基氯苯，觀察皮膚過敏反應(yīng)并進(jìn)行評(píng)分。結(jié)果平痤洗劑對(duì)家兔完整皮膚無刺激性作用，豚鼠皮膚無過敏反應(yīng)。結(jié)論平痤洗劑外用具有較高的安全性。

關(guān)鍵詞：平痤洗劑；皮膚刺激性；皮膚過敏性；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

外用中藥如粉劑、酊劑、膏劑等，因其外涂于皮膚或黏膜，使用方便，在皮膚病的治療中應(yīng)用較多。但是，近年來不斷發(fā)生的以皮膚過敏反應(yīng)為主的臨床事件給外用中藥的安全性提出了必須正視的問題[1]。2005年，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布了中藥及化學(xué)藥物皮膚刺激及過敏性研究技術(shù)指導(dǎo)原則[2-3]，為外用藥物的安全性研究提供了權(quán)威的方法和標(biāo)準(zhǔn)。平痤洗劑為臨床治療痤瘡的外用方，具有使用方便、價(jià)廉、療效高的特點(diǎn)[4]。為了驗(yàn)證本方的安全性，進(jìn)一步推廣本方在臨床上的應(yīng)用，本實(shí)驗(yàn)對(duì)平痤洗劑的皮膚刺激性、皮膚過敏性進(jìn)行了系統(tǒng)研究。

1　材料與方法

1.1動(dòng)物

新西蘭大耳白家兔48只，3月齡，體質(zhì)量2.0～2.5 kg，雌雄各半，北京金牧陽(yáng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖有限責(zé)任公司，許可證號(hào)SCXK（京）2010-0001。白色豚鼠30只，2月齡，雌雄各半，體質(zhì)量350～450 g，北京華阜康生物科技股份有限公司，許可證號(hào)SCXK（京）2009-0004。上述動(dòng)物均飼養(yǎng)于本所普通環(huán)境動(dòng)物房。

1.2藥物

平痤洗劑由苦參、牡丹皮、龍膽、蒲公英、金剛藤各30 g，地膚子、大青葉各20 g組成，所有飲片購(gòu)于北京同仁堂藥店，經(jīng)本所鄒忠梅研究員鑒定，符合2010年版《中華人民共和國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn)。將上述中藥加5倍量蒸餾水浸泡1 h后煎煮，煮沸30 min后過濾，藥渣再加等量蒸餾水煎煮過濾。將2次藥液混合后，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮成含原藥材1 g/mL樣品。

1.3試劑

硫化鈉（天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司，分析純），實(shí)驗(yàn)時(shí)用蒸餾水配制成濃度為8%硫化鈉水溶液，避光密封保存；2,4-二硝基氯苯成都西亞試劑有限公司（分析純），實(shí)驗(yàn)時(shí)用分析純級(jí)丙酮配制成1% 2,4-二硝基氯苯和0.1% 2,4-二硝基氯苯，避光密封保存。

1.4皮膚刺激實(shí)驗(yàn)

1.4.1分組與給藥實(shí)驗(yàn)開始前家兔飼養(yǎng)7 d，觀察攝食和行為，完全無異常后按雌雄、體質(zhì)量隨機(jī)分組，單次給藥組及多次給藥組均設(shè)2組，分別為完整皮膚組及破損皮膚組，每組6只。單次給藥：實(shí)驗(yàn)前1 d，背部脊柱兩側(cè)剪毛，8%硫化鈉溶液脫毛，去毛范圍每側(cè)約3 cm×3 cm。完整皮膚組保證皮膚無損傷，破損皮膚組采用16號(hào)針頭，在脫毛且消毒皮膚上劃“#”字，以皮膚滲血為度，左右兩側(cè)皮膚損傷程度基本一致。家兔右側(cè)脫毛區(qū)涂以0.5 mL平痤洗劑，左側(cè)脫毛區(qū)涂以蒸餾水0.5 mL作為對(duì)照，用兩層無菌紗布覆蓋，再蓋以聚乙烯薄膜，以無刺激性醫(yī)用膠布固定。24 h后，去除覆蓋物，溫水清除受試物，肉眼觀察去除受試物后1、24、48、72 h的局部情況，記錄涂藥處有無紅斑和水腫等情況。多次給藥：實(shí)驗(yàn)及觀察方法同單次給藥實(shí)驗(yàn)，每日給藥1次，連續(xù)7 d，去除受試物1、24、48、72 h后肉眼觀察給藥局部情況，記錄各組受試物平均反應(yīng)分值，判斷刺激強(qiáng)度。

1.4.2刺激強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局制定的相關(guān)技術(shù)指導(dǎo)原則[2-3]，按表1、表2評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)計(jì)分并判斷刺激強(qiáng)度。

表1　皮膚刺激反應(yīng)程度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

表2　皮膚刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

1.5皮膚過敏性實(shí)驗(yàn)

1.5.1分組及給藥白色豚鼠隨機(jī)分為蒸餾水組、平痤洗劑組和陽(yáng)性對(duì)照組（1% 2,4-二硝基氯苯組），每組10只。實(shí)驗(yàn)前24 h，8%硫化鈉溶液將豚鼠背部脊柱兩側(cè)脫毛，去毛范圍每側(cè)約3 cm×3 cm，24 h后致敏接觸。致敏接觸：取蒸餾水和平痤洗劑0.2 mL 及1% 2,4-二硝基氯苯液0.2 mL，分別涂在各組動(dòng)物背部右側(cè)脫毛區(qū)，二層紗布覆蓋，再以無刺激膠布封閉固定，持續(xù)6 h。第7、14日以同樣方法重復(fù)1次，共3次。激發(fā)接觸：于末次給藥14 d后，取蒸餾水及平痤洗劑各0.2 mL及0.1% 2，4-二硝基氯苯液0.2 mL，分別涂在各組動(dòng)物背部左側(cè)脫毛區(qū)，2層紗布覆蓋，再以無刺激的醫(yī)用膠布封閉固定，持續(xù)6 h。6 h后去除受試藥物，觀察0、24、48、72 h的過敏反應(yīng)情況。1.5.2過敏程度評(píng)分按皮膚過敏反應(yīng)程度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)各組豚鼠皮膚過敏反應(yīng)分值（見表3），計(jì)算致敏反應(yīng)發(fā)生率（出現(xiàn)紅斑和水腫動(dòng)物例數(shù)÷受試動(dòng)物總數(shù)×100%）及平均反應(yīng)分值[（紅斑形成總分＋水腫形成總分）÷動(dòng)物總數(shù)]。判斷受試豚鼠對(duì)受試樣品的過敏程度（見表4）。

表3　豚鼠皮膚過敏反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

表4　豚鼠皮膚過敏反應(yīng)強(qiáng)度評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

2　結(jié)果

2.1皮膚刺激實(shí)驗(yàn)

2.1.1單次給藥完整皮膚組在去除受試藥物后1、24、48、72 h，肉眼觀察均無明顯紅斑、水腫等皮膚刺激反應(yīng)；破損皮膚組給予受試物24 h后繼續(xù)觀察1 h，給藥側(cè)和對(duì)照側(cè)均可見劃傷部位有輕微紅腫，至24 h消失，后續(xù)觀察未再發(fā)現(xiàn)異常。皮膚刺激評(píng)分結(jié)果表明，平痤洗劑與蒸餾水單次給藥對(duì)完整皮膚與損傷皮膚的反應(yīng)分值無明顯差異，見表5。

表5　平痤洗劑單次給藥2組皮膚刺激反應(yīng)比較

2.1.2多次給藥完整皮膚組多次給藥過程中未見皮膚有紅斑、水腫等異常反應(yīng)，破損皮膚組給予平痤洗劑及蒸餾水時(shí)，給藥第1日給藥側(cè)和對(duì)照側(cè)均可見劃傷部位紅腫，至第3日完全恢復(fù)，其后每次去除藥物后1 h及再次給藥前，末次給藥后1、24、48、72 h，肉眼觀察均未見有紅斑、水腫等情況，見表6。停藥后繼續(xù)觀察１周，給藥部位未出現(xiàn)局部色素沉著、出血點(diǎn)、皮膚粗糙或變薄等情況。

表6　平痤洗劑多次給藥2組皮膚刺激反應(yīng)比較

2.2皮膚過敏實(shí)驗(yàn)

陽(yáng)性對(duì)照組自激發(fā)給藥6 h后，受試區(qū)出現(xiàn)輕度紅斑，無水腫，致敏率100%，為極度致敏性；平痤洗劑組和蒸餾水組在整個(gè)觀察過程中；未見受試區(qū)出現(xiàn)紅斑及水腫，致敏率為0，屬弱致敏性，見表7。

表7　各組豚鼠皮膚過敏反應(yīng)比較

3　討論

中藥外用為傳統(tǒng)中醫(yī)藥治療疾病尤其是皮膚疾病的重要手段，但近年來外用中藥過敏的臨床事件時(shí)有發(fā)生。從已發(fā)表的文獻(xiàn)看，中藥致皮膚過敏反應(yīng)的類型有接觸性皮炎、局部皮膚刺激、光毒性及光變應(yīng)性皮炎、系統(tǒng)性接觸性反應(yīng)等類型，引起這些反應(yīng)的中藥既有單味藥，也有復(fù)方制劑[1，5]。在單味藥方面，趙氏等[6]綜合了近30年的文獻(xiàn)報(bào)道，歸納出具有明顯皮膚不良反應(yīng)的單味中藥達(dá)50種之多，這些中藥外用有的引起局部過敏反應(yīng)，有的引起全身過敏反應(yīng)，嚴(yán)重者甚至中毒致死。因此，對(duì)于外用中藥的安全性評(píng)價(jià)，有必要針對(duì)每種中藥進(jìn)行系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)研究。

平痤洗劑由苦參、牡丹皮、龍膽、蒲公英、金剛藤、地膚子、大青葉共7味中藥組成。從各藥物的功效方面看，均無明顯毒性和刺激性。同時(shí)，對(duì)比已經(jīng)報(bào)道的文獻(xiàn)，也未發(fā)現(xiàn)平痤洗劑組方中含有引起皮膚過敏反應(yīng)的單味中藥。但作為復(fù)方的外用制劑，是否引起皮膚的刺激和過敏反應(yīng)尚未見報(bào)道。為了確證其安全性，根據(jù)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的技術(shù)指導(dǎo)原則[2-3]，本實(shí)驗(yàn)研究了平痤洗劑對(duì)家兔的皮膚刺激和豚鼠的皮膚過敏反應(yīng)。結(jié)果顯示，平痤洗劑對(duì)完整皮膚無刺激性及致敏作用，實(shí)驗(yàn)中雖發(fā)現(xiàn)平痤洗劑對(duì)破損皮膚有短暫輕度刺激作用，但這種作用隨時(shí)間延長(zhǎng)而消失。

參考文獻(xiàn)：

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[2] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.中藥、天然藥物刺激性和溶血性研究的技術(shù)指導(dǎo)原則[M].2005.

[3] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.化學(xué)藥物刺激性、過敏性和溶血性研究技術(shù)指導(dǎo)原則[M].2005.

[4] 張傲清,黃麗珍.中藥熏洗法治療尋常型痊瘡療效觀察[J].臨床皮膚科雜志,1995,24(5)：326.

[5] 張立坤,竺炯,史萬(wàn)忠,等.中藥外用致皮膚過敏反應(yīng)分析[J].河北中醫(yī),2011,33(11)：1736-1739.

[6] 趙姣,張會(huì)宗,李國(guó)信.中藥外用藥物不良反應(yīng)現(xiàn)況分析[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志,2015,22(4)：132-136.

Experimental Study on Skin Irritation and Allergic Reaction of Pingcuo Lotion

LI Yan-lin, ZHOU Yun-feng, LI Lin, WANG Li-li, CHEN Xi, XU Yang (Institute of Medicinal Plant Development, Chinese Academy of Medical Sciences, Beijing 100193, China)

Abstract:Objective To evaluate the skin irritation and allergic reaction of external use of Pingcuo Lotion on animal skin. Methods Skin irritation test was carried out on New Zealand white rabbits. All animal were divided into intact skin and damaged skin groups, and distilled water or Pingcuo Lotion were applied to the two groups on the two sides of shaved rabbit back skin. Skin irritation was observed and scored. Skin allergy test were performed on healthy white guinea pigs. All animal were divided into distilled water, Pingcuo Lotion and positive groups, and the three groups were treated with distilled water, Pingcuo Lotion and 2,4-Dinitrochlorobenzene respectively on the shaved back skin. Skin allergic reaction was observed and scored. Results Pingcuo Lotion did not induce any dermal irritation in New Zealand white rabbits. Skin allergic reaction was not found in guinea pigs. Conclusion External use of Pingcuo Lotion on the animal skin is safe.

Key words:Pingcuo Lotion; skin irritation; skin allergic reaction; animal experiment

收稿日期：（2015-07-10；編輯：華強(qiáng)）

通訊作者：許揚(yáng)，E-mail：vascular888@126.com

基金項(xiàng)目：國(guó)家科技重大專項(xiàng)-重大新藥創(chuàng)制（2014ZX09201022-006）；中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（IT1305）

中圖分類號(hào)：R285.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1005-5304(2016)02-0056-03

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.02.016