固本健腦法對(duì)Alzheimer病模型大鼠海馬區(qū)樹(shù)突棘及P-tau的影響＊

胡玉萍，王 平＊＊，袁德培，朱耀乾，曾楚華

（1.湖北中醫(yī)藥大學(xué)老年病中藥新產(chǎn)品湖北省協(xié)同創(chuàng)新中心 武漢 430065；2.湖北民族學(xué)院中醫(yī)藥學(xué)院 恩施 445000）

固本健腦法對(duì)Alzheimer病模型大鼠海馬區(qū)樹(shù)突棘及P-tau的影響＊

胡玉萍1，王 平1＊＊，袁德培2，朱耀乾2，曾楚華2

（1.湖北中醫(yī)藥大學(xué)老年病中藥新產(chǎn)品湖北省協(xié)同創(chuàng)新中心 武漢 430065；2.湖北民族學(xué)院中醫(yī)藥學(xué)院 恩施 445000）

目的：本課題在成功建立AD大鼠模型基礎(chǔ)上，觀察固本健腦法治療AD的作用及機(jī)制。方法：12月齡衰老大鼠行腦立體定位手術(shù)于雙側(cè)海馬注射Aβ1-42，制備復(fù)合AD大鼠模型，并用固本健腦液灌胃干預(yù)，以安理申組為對(duì)照。4周后，高爾基染色法觀察大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元樹(shù)突棘形態(tài)及密度；Western Blot法檢測(cè)大鼠海馬區(qū)Caveolin-1、P-tau（Thr231、Ser396位點(diǎn)）蛋白表達(dá)改變。結(jié)果：高爾基染色法結(jié)果顯示：固本健腦液高、低劑量組神經(jīng)元細(xì)胞及樹(shù)突棘形態(tài)明顯改善，數(shù)目及密度顯著增加（P＜0.01）。Western Blot法檢測(cè)結(jié)果顯示：固本健腦液高、低劑量組可使Caveolin-1的表達(dá)不同程度的升高，而tau磷酸化水平下降，差異有顯著性（P＜0.01）。結(jié)論：固本健腦法能顯著改善AD大鼠海馬神經(jīng)元樹(shù)突棘形態(tài)及密度，顯著提高AD模型大鼠海馬區(qū)Caveolin-1的表達(dá)，抑制tau蛋白過(guò)度磷酸化。

Alzheimer病 固本健腦 樹(shù)突棘 Caveolin-1 tau蛋白過(guò)度磷酸化

阿爾茲海默?。ˋlzheimer's Disease，AD）即老年性癡呆，是老年癡呆癥的3大類型之一。tau蛋白異常過(guò)度磷酸化已是幾十年來(lái)被公認(rèn)的AD標(biāo)志性病理特征[1]。課題組在前期研究證實(shí)，學(xué)習(xí)記憶相關(guān)蛋白Caveolin-1在AD發(fā)病中起著關(guān)鍵作用[2]，結(jié)合樹(shù)突處tau蛋白過(guò)度磷酸化對(duì)神經(jīng)元的雙重毒性作用，本課題采用自然衰老大鼠合并雙側(cè)海馬區(qū)注射Aβ1-42制作復(fù)合AD模型，同時(shí)給予固本健腦治法方藥進(jìn)行干預(yù)，以西藥鹽酸多奈哌齊（安理申）作為對(duì)照；通過(guò)高爾基染色法觀察用藥前后模型大鼠海馬區(qū)樹(shù)突棘形態(tài)和密度的改變，采用Western Blot法檢測(cè)模型大鼠海馬區(qū)Caveolin-1蛋白水平及tau蛋白磷酸化水平，旨在觀察固本健腦法對(duì)AD大鼠模型樹(shù)突棘及tau蛋白磷酸化的 影響，以探討固本 健腦法治療AD的作用機(jī)理。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

12月齡清潔級(jí)Wistar 大鼠60只，雌雄各半，體質(zhì)量450±20 g，由湖北省疾病防預(yù)控制中心 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物許可證編號(hào)：SCXK（鄂）2008-0005。

1.2 藥物

固本健腦液由湖北民族學(xué)院附屬民大醫(yī)院制劑室提供。藥物組成：板橋黨參15 g、枸杞15 g、茯苓12 g、酸棗仁15 g、山楂12 g。中藥常規(guī)煎煮法，分別制成每毫升含生藥1、2 g兩個(gè)劑量；高、低劑量組分別相當(dāng)于含生藥2、1 g·mL-1。其中低劑量相當(dāng)于成人用量。

安理申5mg/片[衛(wèi)材（中國(guó)）藥業(yè)有限公司，批號(hào)：131145A]。取安理申片粉碎后溶于滅菌生理鹽水中，配制成濃度為0.045 mg·mL-1的混懸液，磁力攪拌器攪拌均勻。存于4℃冰箱，備用。

Aβ1-42（美國(guó)Sigma公司，批號(hào)：107761-42-2）。使用時(shí)，將1 mg Aβ1-42溶于200 μL生理鹽水中，混勻離心后封口膜封好，置于數(shù)顯恒溫水浴鍋中，37℃孵育72 h，制成聚集態(tài)Aβ1-42，終濃度為5 μg·μL-1。存于4℃冰箱，備用。

1.3 試劑

GMS80020.3神經(jīng)元高爾基染色試劑盒（上海杰美基因醫(yī)藥科技有限公司，批號(hào)：1-250029-12）。Western blot試劑盒：Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒（碧云天生物技術(shù)研究所，批號(hào)：P0006）、超敏ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒BeyoECL Plus（碧云天生物技術(shù)研究所，批號(hào)：P0018）；SDS-PAGE凝膠制備試劑盒（武漢谷歌生物科技有限公司，批號(hào)：G2003）、蛋白抽提試劑盒（武漢谷歌生物科技有限公司，批號(hào)：G2001、G2002）；Tween-20（Amresco公司，批號(hào)：0777）?？贵w：抗P-tau小鼠單克隆抗體（美國(guó)Santa Cruz公司，批號(hào)：sc-12414），抗tau兔單克隆抗體（美國(guó)Santa Cruz公司，批號(hào)：sc-5587）；內(nèi)參抗β-actin兔單克隆抗體（美國(guó)Santa Cruz公司，批號(hào)：sc-1616r）。二抗：美國(guó)KPL公司。青霉素、水合氯醛、無(wú)水乙醇、二甲苯等為自配試劑，由實(shí)驗(yàn)室提供。

1.4 實(shí)驗(yàn)儀器

TB-718E石蠟包埋機(jī)（泰維科技實(shí)業(yè)有限公司）；RM2245型半自動(dòng)輪轉(zhuǎn)切片機(jī)（德國(guó)Leica公司）；Eclipse 80i正置熒光顯微鏡（日本Nikon公司）；光學(xué)顯微鏡（日本Olympus公司）；DYY-6C電泳儀、DYCZ-400D轉(zhuǎn)移電泳儀槽、DYCZ-24DN垂直電泳槽、WD-9405A脫色搖床（北京市六一儀器廠）；2 μL微量進(jìn)樣器、攪拌器、電子天平等常規(guī)器材由實(shí)驗(yàn)室提供。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 實(shí)驗(yàn)分組

將大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為6組，即正常組、空白對(duì)照組、模型組、安理申治療組（簡(jiǎn)稱安理申組）、固本健腦液低劑量組（簡(jiǎn)稱中低組）、固本健腦液高劑量組（簡(jiǎn)稱中高組），每組10只。

2.2 動(dòng)物造模

大鼠經(jīng)適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，除正常組外各組大鼠行腦立體定位手術(shù)。大鼠術(shù)前禁食12 h，手術(shù)前稱重，按照350 mg·kg-1劑量腹腔注射10%的水合氯醛麻醉，頭項(xiàng)部剪毛備皮，腦立體定位儀固定頭部，常規(guī)消毒手術(shù)區(qū)皮膚，鋪巾，無(wú)菌條件下沿顱頂中線做1-2 cm切口，用濕棉球分離骨膜，暴露前囟，參照大鼠腦立體定位圖譜[3]，定位海馬（以前囟為零點(diǎn)，AP=-4.0 mm，ML=±3.0 mm，DV=4.0 mm），先用牙科鉆顱骨鉆孔，推進(jìn)微型進(jìn)樣器注射針，將2 μL濃度為5 μg·μL-1的聚集態(tài)Aβ1-42，分別在5 min內(nèi)緩慢注入雙側(cè)海馬，留針5 min，緩慢退針后，以棉簽蘸取少許雙氧水清洗創(chuàng)面，海綿膠貼封顱骨孔，縫合手術(shù)切口并涂馬應(yīng)龍痔瘡膏，肌肉注射青霉素10萬(wàn)U防感染。手術(shù)結(jié)束，大鼠撤離手術(shù)臺(tái)并用神燈照射保暖，待蘇醒后放入籠中常規(guī)飼養(yǎng)?？瞻讓?duì)照組等位點(diǎn)注入等劑量的生理鹽水，其余操作同上。正常組不予處理。

2.3 給藥方法

手術(shù)3天后，中低組、中高組、安理申組大鼠分別按照10 mL·kg-1·d-1劑量每日5：00 p.m.給予相應(yīng)藥物灌胃，空白對(duì)照組、模型組給予等容積的生理鹽水灌胃，連續(xù)4周。正常組常規(guī)喂養(yǎng)。

2.4 標(biāo)本制備及檢測(cè)指標(biāo)

2.4.1 大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元樹(shù)突棘形態(tài)學(xué)觀察

以10%水合氯醛加倍劑量注射，大鼠深度麻醉后，手術(shù)剪剪開(kāi)胸腔，暴露心臟，從左心室心尖部進(jìn)針，止血鉗固定針頭，右心耳處開(kāi)口約0.5-1 cm，快速生理鹽水灌注（大約200 mL/只），直至肝臟變白，右心耳處流出液體澄清。再用4%多聚甲醛連續(xù)灌注（約400 mL/只），至大鼠四肢及尾巴、頭頸部變僵硬。大鼠斷頭，冰臺(tái)上開(kāi)顱，快速取出大腦，取左側(cè)腦組織海馬部位用刀片自橫斷面切成厚度約5 mm的小塊，含有10 mL Reagent A和10 mL Reagent B的混合液里（20 mL/2塊組織塊），室溫下浸泡孵育2周，避免光照。2周后，取出組織塊，用綿紙吸干，按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行高爾基染色，于顯微鏡下觀察并照相。

2.4.2 大鼠海馬區(qū)Caveolin-1、P-tau蛋白表達(dá)檢測(cè)

如上述取腦方法，取大鼠右側(cè)大腦海馬組織。Western Blot法檢測(cè)大鼠海馬區(qū)Caveolin-1、P-tau蛋白的表達(dá)：提取大腦海馬總蛋白，Bradford法分標(biāo)準(zhǔn)曲線制作和樣品濃度測(cè)定完成蛋白濃度測(cè)定；制備SDS-PAGE加樣液，SDS-PAGE電泳分離蛋白質(zhì)，行轉(zhuǎn)膜和封閉；分別用Thr231、Ser396、Caveolin-1蛋白的一抗和二抗進(jìn)行各自抗體的結(jié)合反應(yīng)，運(yùn)用化學(xué)發(fā)光分別檢測(cè)Thr231、Ser396、Caveolin-1蛋白表達(dá)量，并運(yùn)用專用的計(jì)算機(jī)軟件分析量效關(guān)系的變化。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

圖1 各組大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元樹(shù)突棘形態(tài)

3 結(jié)果

3.1 固本健腦法對(duì)AD模型大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元樹(shù)突棘形態(tài)學(xué)的影響

參照相關(guān)文獻(xiàn)[4]方法，計(jì)算各組大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元樹(shù)突棘密度。選取高倍鏡（400×）下浸染完整的神經(jīng)元，要求每個(gè)樹(shù)突至少有1個(gè)分支；每個(gè)標(biāo)本、每個(gè)區(qū)域選擇至少10個(gè)神經(jīng)元做統(tǒng)計(jì)，選取神經(jīng)元最外圍樹(shù)突作為測(cè)量目標(biāo)，要求樹(shù)突片斷至少10 μm長(zhǎng)。在光鏡下選取合適的片段，再在油鏡下拍照。用image-plus 6.0分析軟件測(cè)量樹(shù)突的長(zhǎng)度及樹(shù)突棘的數(shù)目，以樹(shù)突棘數(shù)目除以長(zhǎng)度所得值計(jì)算樹(shù)突棘的密度，單位即為樹(shù)突棘數(shù)目/μm。各組大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元樹(shù)突棘形態(tài)見(jiàn)圖1。各組大鼠海馬神經(jīng)元樹(shù)突棘密度結(jié)果，見(jiàn)表1。

正常組大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞胞體及胞核清晰，樹(shù)突棘排列致密（圖1-1）。空白對(duì)照組大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞未見(jiàn)明顯減少，樹(shù)突棘形態(tài)尚可，數(shù)目及密度與正常組比較無(wú)明顯差異（圖1-2）。模型組大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元胞體變形，部分神經(jīng)元消失，胞間間隔增大，細(xì)胞體積增大，胞質(zhì)及胞核染色密度增高，樹(shù)突棘數(shù)目減少，排列混亂（圖1-3）。安理申組大鼠海馬神經(jīng)元數(shù)目較固本健腦法治療組少，細(xì)胞數(shù)目有所減少，樹(shù)突棘密度較模型組稍好（圖1-4）。固本健腦法低劑量組海馬區(qū)神經(jīng)元未見(jiàn)明顯損害，樹(shù)突棘數(shù)目及密度接近空白對(duì)照組，明顯好于其他治療組（圖1-5）。

由表1數(shù)據(jù)可以看出，模型組大鼠海馬神經(jīng)元樹(shù)突棘密度減少明顯，與正常組比較，差異有顯著性（P＜0.01）。固本健腦法高、低劑量組大鼠海馬神經(jīng)元樹(shù)突棘密度比模型組、安理申組均增多，有顯著性差異（P＜0.01）。

表1 固本健腦法對(duì)AD模型大鼠海馬神經(jīng)元樹(shù)突棘密度的影響（，n=10）

表1 固本健腦法對(duì)AD模型大鼠海馬神經(jīng)元樹(shù)突棘密度的影響（，n=10）

注：與正常組比較，**P＜0.01；與模型組比較，##P＜0.01；與安理申組比較，△△P＜0.01。

圖2 各組Caveolin-1蛋白表達(dá)灰度圖

圖3 固本健腦法對(duì)AD模型大鼠海馬區(qū)Caveolin-1蛋白表達(dá)的影響

3.2 固本健腦法對(duì)AD模型大鼠海馬區(qū)Caveolin-1蛋白表達(dá)的影響

采用Western blot技術(shù)檢測(cè)Caveolin-1蛋白表達(dá)情況，Gel-pro軟件測(cè)量灰度進(jìn)行定量分析，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，結(jié)果用于統(tǒng)計(jì)分析。固本健腦法對(duì)AD模型大鼠海馬區(qū)Caveolin-1蛋白表達(dá)的影響結(jié)果見(jiàn)圖2、圖3。

Western blot法檢測(cè)結(jié)果顯示，與正常組比較，模型組大鼠海馬區(qū)Caveolin-1表達(dá)明顯減少（P＜0.01）；經(jīng)藥物干預(yù)后，治療各組藥物均能提高大鼠海馬區(qū)Caveolin-1蛋白表達(dá)，與模型組比較，差異有顯著性（P＜0.01）；與安理申組對(duì)照比較，固本健腦法高、低劑量組有明顯優(yōu)勢(shì)，差異有顯著性（P＜ 0.01）。

3.3 固本健腦法對(duì)AD模型大鼠海馬區(qū)tau磷酸化的影響

采用Western blot技術(shù)檢測(cè)蛋白，Gel-pro軟件測(cè)量灰度進(jìn)行定量分析，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，結(jié)果用于統(tǒng)計(jì)分析。將Thr231、Ser396分別除以總tau作為各個(gè)位點(diǎn)相對(duì)磷酸化水平，并以正常組的水平標(biāo)準(zhǔn)化為1，用于表示該位點(diǎn)的磷酸化水平。各組大鼠海馬區(qū)tau磷酸化水平（Thr231，Ser396位點(diǎn)）及固本健腦法的干預(yù)作用結(jié)果，見(jiàn)圖4、圖5。

由灰度圖和比值分析可見(jiàn)，Thr231、Ser396兩個(gè)位點(diǎn)tau蛋白磷酸化水平比較，模型組與正常組和空白對(duì)照組比較，差異明顯（P＜0.01）；經(jīng)藥物干預(yù)后，各治療組與模型組比較，均有顯著改善（P＜0.01）；各治療組中，固本健腦法中高組、中低組與安理申組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

4 討論

課題組根據(jù)多年對(duì)AD 的理論及臨床研究，認(rèn)為該病的主要病機(jī)為先后天之本（脾腎）虧虛，因虛致實(shí)，痰瘀應(yīng)運(yùn)而生，蘊(yùn)于腦竅，致清竅不養(yǎng)或昏蒙；由此認(rèn)為補(bǔ)益脾腎、固本健腦可作為該病的基本治則治法。依據(jù)治則選用湖北恩施傳統(tǒng)出口藥材——中國(guó)板黨為主藥，輔以枸杞、茯苓、酸棗仁、山楂等健脾補(bǔ)腎、健腦安神、化瘀藥物組成固本健腦方，并開(kāi)發(fā)為固定院內(nèi)制劑（名為固本健腦液）。方中板黨健脾培補(bǔ)后天之本，枸杞補(bǔ)腎培固先天之本，是以名之“固本”；棗仁、茯苓補(bǔ)脾腎助本兼養(yǎng)心（腦）安神之功故名“健腦”；山楂消積化瘀以為諸藥之佐使。全方以“固本健腦”為治則治法，彰顯補(bǔ)腎健脾固本、健腦促智安神之功。自20世紀(jì)90年代開(kāi)始用于臨床，至今20 余年，得到醫(yī)患的一致肯定。臨床資料表明其對(duì)中醫(yī)辨證之衰老見(jiàn)證積分值有明顯改善作用，且未見(jiàn)毒副作用，是為防治AD 效果顯著的方藥。

tau蛋白正常表達(dá)是人體所必需，其參與維持細(xì)胞正常形態(tài)、信息傳遞、細(xì)胞分裂及運(yùn)動(dòng)等重要生物學(xué)過(guò)程[5，6]。tau蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)疏松，在聚合誘導(dǎo)因子和翻譯后修飾（主要是磷酸化）作用下形成β折疊結(jié)構(gòu)，此時(shí)tau與微管分離失去生理作用，并逐步聚集成tau蛋白二聚體、寡聚體、雙股螺旋形神經(jīng)絲（Paired Belical Filament，PHF）和神經(jīng)原纖維結(jié)（Neurofibrillary Tangles，NFT）。tau蛋白磷酸化與去磷酸化機(jī)制的失衡導(dǎo)致tau蛋白過(guò)度磷酸化，過(guò)度磷酸化的tau蛋白在細(xì)胞內(nèi)相互聚集形成PHFs，這將直接導(dǎo)致微管穩(wěn)定性下降，軸突運(yùn)輸障礙，神經(jīng)元變性、凋亡，AD發(fā)生[7]。Bi M.等[8，9]人研究發(fā)現(xiàn)，在沒(méi)有明顯的Aβ沉積時(shí)就有tau病理發(fā)生，并且降低tau基因敲除小鼠的tau蛋白水平能夠阻止Aβ的毒性。另有研究稱tau蛋白的關(guān)鍵蛋白激酶GSK-3β能夠磷酸化胞內(nèi)域的淀粉樣前體蛋白（Amyloid Precursor Protein，APP），而有效抑制Aβ的生成[10]。換言之，tau過(guò)度磷酸化是AD病理改變的源始因素，且從抑制tau磷酸化角度治療AD亦能有效阻止AD另一重要病理改變Aβ的生成，從而起到更好的作用。

樹(shù)突棘密度、形態(tài)在接受傳導(dǎo)信息過(guò)程中起重要作用，因此，學(xué)習(xí)記憶的形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)和關(guān)鍵可能就在樹(shù)突棘[11]。眾多新發(fā)現(xiàn)tau蛋白在軸突與微管發(fā)生重要作用，而在樹(shù)突處介導(dǎo)Aβ的毒性作用[12，13]。樹(shù)突處存在的tau蛋白過(guò)度磷酸化一方面會(huì)直接引起病理改變使神經(jīng)元病變，同時(shí)還會(huì)加劇Aβ對(duì)神經(jīng)元的毒性作用，從而對(duì)神經(jīng)元雙重傷害。研究報(bào)道，AD患者神經(jīng)元樹(shù)突處大量聚集tau蛋白，通過(guò)與賴氨酸蛋白激酶（Fyn）發(fā)生作用將Fyn轉(zhuǎn)移至樹(shù)突端，F(xiàn)yn可促使突觸后密度蛋白95 （Postsynaptic Density Protein，PSD95） 與 NMDA受體作用進(jìn)而介導(dǎo)Aβ誘導(dǎo)的興奮毒性作用，抑制過(guò)度磷酸化tau蛋白，可以減弱這種毒性作用[14]。另一方面，從形態(tài)學(xué)上看，樹(shù)突棘處多發(fā)tau蛋白過(guò)度磷酸化，會(huì)使樹(shù)突棘丟失或形態(tài)發(fā)生改變，直接導(dǎo)致神經(jīng)元突觸功能損害，進(jìn)而出現(xiàn)學(xué)習(xí)記憶能力的改變，誘發(fā)AD[15，16]。

有研究顯示Caveolin-1能夠調(diào)節(jié)tau蛋白、Aβ、NMDA和AMPA的表達(dá)，Head B.P.等[17]發(fā)現(xiàn)Caveolin-1基因敲除小鼠表現(xiàn)出類似AD海馬區(qū)的病理改變，即tau蛋白異常過(guò)度磷酸化，Aβ表達(dá)增加，將敲除Caveolin-1后的神經(jīng)元細(xì)胞體外培養(yǎng)后再轉(zhuǎn)染Caveolin-1質(zhì)粒，結(jié)果顯示Aβ表達(dá)顯著降低。Francesconi A.等[11，18]國(guó)內(nèi)外研究先后通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)通過(guò)調(diào)節(jié)Caveolin-1能影響NMDA/AMPA受體通道從而增強(qiáng)突觸的傳遞效率、并改善樹(shù)突棘的形態(tài)結(jié)構(gòu)和促進(jìn)新棘的形成，進(jìn)而使長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)維持和表達(dá)增強(qiáng)，改善認(rèn)知及學(xué)習(xí)記憶能力。

圖4 各組Thr231、Ser396位點(diǎn)蛋白表達(dá)灰度圖

圖5 固本健腦法對(duì)AD模型大鼠海馬區(qū)tau蛋白過(guò)度磷酸化的影響

結(jié)合以上研究成果，我們?cè)O(shè)想，Caveolin-1蛋白水平與tau蛋白過(guò)度磷酸化、樹(shù)突棘形態(tài)及密度密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，模型組大鼠海馬區(qū)Thr231、Ser396兩個(gè)位點(diǎn)tau蛋白磷酸化水平顯著升高；經(jīng)固本健腦法及安理申等藥物干預(yù)后，治療各組大鼠海馬區(qū)tau蛋白過(guò)度磷酸化水平顯著下降。加之學(xué)習(xí)記憶行為學(xué)和樹(shù)突棘形態(tài)學(xué)的結(jié)果和課題組前期研究成果，我們可以得出結(jié)論，以培固先后天之本、健腦益智為治則治法組成的固本健腦液是治療老年性癡呆的有效方劑。固本健腦液能夠有效調(diào)控AD模型大鼠海馬區(qū)Caveolin-1蛋白表達(dá)水平，并通過(guò)調(diào)控Caveolin-1水平，抑制tau蛋白過(guò)度磷酸化，從而保護(hù)樹(shù)突棘形態(tài)及密度，增強(qiáng)學(xué)習(xí)記憶能力，預(yù)防和治療AD。

1 Liao K, Liu D, Zhu L Q. Enriched odor exposure decrease tau phosphorylation in the rat hippocampus and cortex. Neurosci Lett, 2012, 507(1)： 22-26.

2 袁林.固本健腦法對(duì)MCI大鼠學(xué)習(xí)記憶能力及海馬Caveolin-1的影響.武漢:湖北中醫(yī)藥大學(xué)博士學(xué)位論文, 2011： 42-50.

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Effect of Gu-Ben Jian-Nao Recipe on Dendritic Spines and P-tau in Hippocampus of Alzheimer's Disease Rat Model

Hu Yuping1, Wang Ping2, Yuan Depei2, Zhu Yaoqian2, Zeng Chuhua2
(1. New Products of Traditional Chinese Medicine Senile Diseases Co-innovation Center of Hubei, Hubei University of Chinese Medicine, Wuhan 430065, China; 2. School of Traditional Chinese Medicine, Hubei University for Nationalities, Enshi 445000, China)

Based on the successful establishment of Alzheimer's disease (AD) rat model, the effects and mechanisms of Gu-Ben Jian-Nao (GBJN) recipe in AD treatment were investigated. The compound AD rat model was prepared with the operation of bilateral hippocampal injection of Aβ1-42on 12-month aged rats. And then, intragastric administration of GBJN liquid was given to the rat model. Aricept was used as control. After 4 weeks, Golgi staining was used to observe the morphology and density of dendritic spines of neurons in the hippocampus of rats. Western blot was used in the detection of changes of Caveolin-1, P-tau (Thr231, Ser396 sites) protein expressions in the hippocampus of rat. The results of Golgi staining showed that both the high and low dose GBJNiquid group can obviously improve the morphology as well as significantly increase the amount and density of dendritic spines of neurons (P ＜ 0.01). Western blot results showed that both the high and low dose GBJN liquid group can increase the Caveolin-1 expression at different degrees, but the tau phosphorylation level decreased, with significant differences (P ＜ 0.01). It was concluded that GBJN recipe can obviously improve the morphology and density of dendritic spines of neurons in the hippocampus of AD rats, significantly increase the Caveolin-1 expression in the hippocampus of AD rats, and inhibit the excessive phosphorylated tau protein.

Alzheimer's disease, Gu-Ben Jian-Nao, dendritic spines, Caveolin-1, excessive phosphorylated tau protein

10.11842/wst.2016.01.009

R277.7

A

（責(zé)任編輯：朱黎婷 張志華，責(zé)任譯審：王 晶）

2015-09-06

修回日期：2015-10-28

＊ 湖北省衛(wèi)生廳青年人才項(xiàng)目（QJX2012-18）：固本健腦液對(duì)AD模型大鼠海馬區(qū)樹(shù)突棘、Caveolin-1、P-tau的影響，負(fù)責(zé)人：胡玉萍；國(guó)家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金項(xiàng)目（81503484）：固本健腦法對(duì)Alzheimer病細(xì)胞模型Sorla阻斷APP裂解通路機(jī)制的調(diào)節(jié)作用研究，負(fù)責(zé)人：胡玉萍。

＊＊ 通訊作者：王平，本刊編委，教授，博士生導(dǎo)師，主要研究方向：中醫(yī)衰老理論及老年腦病的證治規(guī)律研究。