慢性盆腔炎免疫抗炎機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展

熊　冰　廣西中醫(yī)藥大學(xué)碩士研究生　530001　南寧市明秀東路179號(hào)王志萍　廣西中醫(yī)藥大學(xué)　530001張　波　米　惠　梁　草　葉美麟　廣西中醫(yī)藥大學(xué)碩士研究生　530001

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慢性盆腔炎免疫抗炎機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展

熊冰廣西中醫(yī)藥大學(xué)碩士研究生530001南寧市明秀東路179號(hào)
王志萍*廣西中醫(yī)藥大學(xué)530001
張波米惠梁草葉美麟廣西中醫(yī)藥大學(xué)碩士研究生530001

關(guān)鍵詞慢性盆腔炎；免疫抗炎機(jī)制；研究進(jìn)展

慢性盆腔炎（chronic pelvic inflammatory disease，CPID）是指女性內(nèi)生殖器及其周圍結(jié)締組織、盆腔腹膜的慢性炎癥［1］。常為急性盆腔炎未徹底治療，在患者體質(zhì)較差的情況下，急性盆腔炎的病程遷延及反復(fù)發(fā)作，造成慢性盆腔炎，但也有部分慢性盆腔炎患者無(wú)急性盆腔炎癥病史。慢性盆腔炎包括慢性子宮內(nèi)膜炎、慢性輸卵管炎、輸卵管卵巢炎及慢性盆腔結(jié)締組織炎［2］。慢性盆腔炎其特點(diǎn)主要是病情復(fù)雜、病程長(zhǎng)、反復(fù)發(fā)作、臨床表現(xiàn)痛苦、治愈率低等［3］。據(jù)統(tǒng)計(jì)，在我國(guó)本病的發(fā)病率達(dá)15%～20%［4］。大量的臨床病例研究表明，在我國(guó)該病高發(fā)人群為20～35歲育齡婦女，總患病率約為40%［5］。近年來(lái)臨床和實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，調(diào)節(jié)機(jī)體自身免疫，提高人體抵抗力，對(duì)于治療慢性盆腔炎疾病具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)?，F(xiàn)就近年來(lái)慢性盆腔炎免疫抗炎機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究綜述如下。

1　病因病機(jī)

根據(jù)本病臨床特點(diǎn)，其可散見(jiàn)于中醫(yī)古籍“熱入血室”“帶下病”“經(jīng)病疼痛”“婦人腹痛”“癥瘕”“不孕”等病癥［6］。中醫(yī)認(rèn)為其常因濕熱、濕毒之邪乘虛入侵，與氣血互結(jié)，氣血瘀滯，或肝氣郁結(jié)，氣滯血瘀，不通為痛，久則內(nèi)結(jié)成癥［7］?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)發(fā)現(xiàn)慢性盆腔炎發(fā)病除了與病原體感染有關(guān)外，還與機(jī)體免疫功能低下、紊亂有關(guān)。由于血瘀、血液黏稠度異常，致使血流不能正常進(jìn)行，使得血液中的蛋白發(fā)生了改變，影響了免疫功能。當(dāng)機(jī)體抵抗力低下或出現(xiàn)了其他因素導(dǎo)致免疫力低下時(shí)，就可能導(dǎo)致慢性盆腔炎的發(fā)生。

2　免疫抗炎機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究模型

慢性盆腔炎病理機(jī)制及治療手段一直是各研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)和難點(diǎn)，建立一個(gè)穩(wěn)定的慢性盆腔炎動(dòng)物模型對(duì)于治療該疾病以及在今后的實(shí)驗(yàn)應(yīng)用上具有重大意義。

2.1模型動(dòng)物選擇目前用于慢性盆腔炎動(dòng)物模型的有：家兔、大鼠、小鼠。唐偉瓊［8］采用家兔為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，模擬人類盆腔炎致病機(jī)制，使雙側(cè)輸卵管發(fā)生機(jī)械損傷和細(xì)菌感染。結(jié)果證實(shí)該方法可造成家兔有明顯的盆腔炎癥狀，并有輸卵管阻塞、積膿、積水等現(xiàn)象。但由于家兔的成本高，且造模后的家兔容易感染而死，所以目前選用家兔進(jìn)行盆腔炎造模已較少。劉弘等［9］采用小鼠造模，造模前取小鼠陰道分泌物UU培養(yǎng)均為陰性，然后小鼠皮下注射苯甲酸雌二醇注射液，每周1次，共4次。第二次注射后陰道接種UU感染液，每天接種1次，連續(xù)3次。1周后再加強(qiáng)接種1次。造模結(jié)束后1周取小鼠陰道分泌物進(jìn)行UU液體培養(yǎng)。造模組肉眼可見(jiàn)子宮和輸卵管不同程度水腫，光鏡下觀察黏膜層及間質(zhì)中性粒細(xì)胞有不同程度的浸潤(rùn)，腺體擴(kuò)增，提示造模成功。目前文獻(xiàn)報(bào)道中，絕大部分采用大鼠作為慢性盆腔炎模型動(dòng)物。劉明等［10］采用盆炎清灌腸劑治療慢性盆腔炎的實(shí)驗(yàn)是選用大鼠子宮作為研究對(duì)象，其原因?yàn)椋捍笫蟮淖訉m在其盆腔生殖器中占有相當(dāng)大的比重，并且子宮內(nèi)膜炎是盆腔炎的一種，又可因其上行感染引起盆腔其他臟器的炎癥，故可認(rèn)為大鼠子宮內(nèi)膜炎基本可以反映盆腔的炎癥狀態(tài)。

2.2造模方法選擇目前用于建立慢性盆腔炎動(dòng)物模型的方法有化學(xué)性燒傷、細(xì)菌感染、混合菌感染加機(jī)械損傷等。沈正龍等［11］采用配制成的25%的苯酚膠漿作為致炎劑，向大鼠雙側(cè)子宮內(nèi)注射0.04 ml，注畢，分層關(guān)腹，消毒術(shù)區(qū)，之后通過(guò)病理切片觀察炎癥的程度。陶雪峰等［12］采用苯酚膠漿加機(jī)械損傷來(lái)造大鼠子宮慢性盆腔炎的模型，在大鼠的左側(cè)子宮用注射器針頭劃傷子宮內(nèi)壁，然后再注射制備好的苯酚膠漿，最后縫合傷口，碘伏消毒。病理切片結(jié)果顯示子宮上皮組織變性壞死明顯，充血水腫明顯，炎性浸潤(rùn)明顯，說(shuō)明盆腔炎模型成立。造模用的菌液可以是單一菌液，也可以是混合菌。程樂(lè)等［13］采用大腸桿菌感染大鼠子宮制造慢性盆腔炎癥，抽取配制好的大腸桿菌懸液（濃度為6×106/ml）0.2 ml，于子宮分叉處插入右側(cè)子宮，用注射器機(jī)械損傷子宮內(nèi)膜組織，然后注射菌液，縫合傷口。結(jié)果大鼠子宮腫脹度大、白細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯升高，表明造模成功。汪明德等［14］將大腸桿菌和金黃色葡萄球菌按2∶1比例配成30億個(gè)菌株的混合菌注入已經(jīng)機(jī)械損傷的大鼠雙側(cè)子宮，一段時(shí)間后，取大鼠子宮做切片染色觀察，可見(jiàn)子宮壁增厚，正常結(jié)構(gòu)紊亂，分層不清，有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，表明造模成功。盧如玲等［15］將大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和溶血性鏈球菌按2∶1∶1比例用無(wú)菌生理鹽水稀釋，配成濃度約為3×109／ml的混合菌注入大鼠雙側(cè)子宮，一段時(shí)間后取大鼠子宮進(jìn)行病理切片，結(jié)果子宮周圍軟組織中可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，有膿腫形成及纖維組織增生。馮書梅等［16］采用混合菌加機(jī)械損傷建立大鼠慢性盆腔炎模型，大鼠行下腹正中切口，開(kāi)腹后暴露并固定子宮，用1 ml注射器機(jī)械損傷子宮內(nèi)膜組織，注入0.2 ml菌液至雙側(cè)子宮內(nèi)，縫合傷口。子宮病理學(xué)改變：大部分見(jiàn)宮腔粘連、擴(kuò)張，黏膜固有層變薄或消失。上皮細(xì)胞部分變性壞死，部分間質(zhì)結(jié)果破壞，內(nèi)膜充血明顯，說(shuō)明造模成功。

3　免疫抗炎機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究方法

有研究表明，免疫因素是引起慢性盆腔炎的關(guān)鍵因素［17］。目前慢性盆腔炎免疫抗炎機(jī)制研究方法，從宏觀整體指標(biāo)到細(xì)胞分子，甚至基因水平等不同層次開(kāi)展。

3.1整體免疫抗炎整體免疫抗炎通過(guò)宏觀整體指標(biāo)檢測(cè)來(lái)說(shuō)明中醫(yī)治療慢性盆腔炎的抗炎機(jī)制，如子宮組織學(xué)指標(biāo)、血液流變學(xué)指標(biāo)。張小麗等［18］采用盆炎寧治療混合菌液制造的大鼠慢性盆腔炎模型，結(jié)果顯示：盆炎寧片可不同程度地改善子宮病理情況，可使子宮黏膜上皮細(xì)胞壞死變性及固有層、肌層結(jié)締組織增生顯著減少，病變程度明顯減輕，未見(jiàn)漿膜層炎細(xì)胞浸潤(rùn)劑管腔粘連阻塞。常潤(rùn)等［19］采用婦炎舒膠囊治療混合菌加機(jī)械損傷所致的慢性盆腔炎模型大鼠，通過(guò)檢測(cè)大鼠血液流變學(xué)相關(guān)指標(biāo)，得出：婦炎舒大、中、小劑量組與模型組比較，高切、中切、低切全血黏度，紅細(xì)胞聚集指數(shù)、紅細(xì)胞電泳指數(shù)、紅細(xì)胞壓積等指標(biāo)降低，有顯著性變化。結(jié)果表明，婦炎舒膠囊對(duì)混合菌液致大鼠慢性盆腔炎有治療作用，其作用機(jī)制可能是由于降低血液粘度，加快盆腔血流速度，從而促進(jìn)炎癥吸收，加速組織修復(fù)與再生。

3.2分子免疫抗炎慢性階段的病理改變是繼細(xì)菌感染后的免疫反應(yīng)所致，與免疫因素如細(xì)胞因子、炎性介質(zhì)、自由基及細(xì)胞凋亡等因素的異常改變有關(guān)。陳瑩等［20］采用婦炎寧顆粒（具有溫陽(yáng)益氣、活血通絡(luò)、清熱解毒之功）治療混合菌液造模的慢性盆腔炎大鼠，通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法測(cè)定大鼠血清白介素－2（IL－2）、白介素－6（IL－6）的濃度變化。結(jié)果治療組大鼠血清IL－2、IL－6值與模型組相比有顯著性差異，其中治療高劑量組與模型組相比具有極顯著性差異，與對(duì)照組相比有顯著性差異。表明婦炎寧顆粒治療慢性盆腔炎作用機(jī)制與其調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能相關(guān)。李鑫等［21］采用混合菌菌液致大鼠盆腔炎性疾病模型，觀察婦科千金片對(duì)大鼠陰道、宮頸、子宮、輸卵管四個(gè)部位病理改變影響。用ELISA法檢測(cè)血清中白介素－1β（IL－1β）、腫瘤壞死因子－α（TNF－α）、白介素－10（IL－10）細(xì)胞因子，結(jié)果表明婦科千金片能夠降低大鼠血清中IL－1β、TNF－α濃度，提高IL－10濃度。邢人鑫［22］采用雙側(cè)輸卵管注入30%苯酚膠漿制造免疫低下大鼠模型，運(yùn)用不同劑量的金剛藤口服液灌胃給藥。應(yīng)用ELISA法檢測(cè)血漿中免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）及免疫球蛋白G（IgG）的含量。結(jié)果表明金剛藤口服液能夠升高IgA、IgM及IgG含量，從而提高機(jī)體的免疫應(yīng)答，說(shuō)明金剛藤口服液對(duì)中樞免疫器官具有保護(hù)作用。巴東嬌［23］采用柳葉臘梅灌腸劑（有清熱解毒，化濕除帶，祛瘀止痛，散結(jié)消癥功效）治療慢性盆腔炎模型鼠，測(cè)定大鼠血清T淋巴細(xì)胞亞群，血液抗凝后用儀流式細(xì)胞儀測(cè)CD4＋、CD8＋、CD4＋/CD8＋，結(jié)果表明各藥物組T淋巴細(xì)胞CD4＋含量明顯提高，CD8＋含量明顯降低，CD4＋/CD8＋顯著提高，與模型組比較有顯著性差異，說(shuō)明柳葉臘梅灌腸能夠明顯改善慢性盆腔炎模型鼠細(xì)胞的免疫功能。李欽等［24］觀察了盆炎坤和湯（組成：忍冬滕、蚤休、白花蛇舌草、蒲公英、丹參、地鱉蟲、皂角刺、鱉甲、五靈脂、延胡索、桂枝、黃芪、雞內(nèi)金）對(duì)苯酚膠漿致慢性盆腔炎大鼠模型的影響，檢測(cè)血清中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的含量，結(jié)果顯示造模后大鼠血清SOD水平顯著下降，MDA含量明顯升高，盆炎坤和湯可不同程度升高SOD水平，降低MDA含量。陳東生等［25］采用大腸桿菌致大鼠慢性盆腔炎模型，發(fā)現(xiàn)菝葜（有活血化瘀、消炎止痛等功效）能夠明顯減輕慢性炎癥病理變化，明顯降低大鼠血清中IL－2和MDA水平，結(jié)果表明菝葜水提取液對(duì)慢性盆腔炎的免疫功能紊亂有良好的調(diào)節(jié)作用。程靜等［26］用混合菌制造大鼠慢性盆腔炎模型，再采用免疫組化法觀察大鼠子宮內(nèi)膜細(xì)胞半胱天冬酶類（Caspase－3）、基質(zhì)金屬蛋白酶－2（MMP－2）、核轉(zhuǎn)錄因子kappa B（NF－κB）的表達(dá)。盆康舒給藥組Caspase－3、MMP－2的表達(dá)增加，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，減輕炎癥反應(yīng)，減少纖維組織過(guò)度增生，減少炎癥介質(zhì)的過(guò)度釋放。

3.3基因免疫抗炎目前研究領(lǐng)域不僅涉及宏觀整體、細(xì)胞分子，甚至已經(jīng)開(kāi)始從基因水平進(jìn)行研究，探討慢性盆腔炎抗炎機(jī)制在基因水平上的更詳細(xì)的表達(dá)結(jié)果。劉瑞芬等［27］采用逆轉(zhuǎn)錄－聚合酶鏈反應(yīng)（RT－PCR）法檢測(cè)大鼠子宮組織中細(xì)胞粘附分子－1（ICAM－1）mRNA、TNF－αmRNA的表達(dá)，免疫組化法檢測(cè)各組大鼠子宮組織中NF－κB、IκB、ICAM－1、TNF－α的表達(dá)。結(jié)果表明，模型組大鼠子宮組織ICAM－1mRNA、TNF－αmRNA、ICAM－1、TNF－α表達(dá)水平高于正常對(duì)照組，盆腔炎顆?？梢燥@著降低模型大鼠的NF－κB、IκB、TNF－α、ICAM－1、TNF－αmRNA、ICAM－1mRNA的表達(dá)。孫晶等［28］采用熒光定量PCR方法檢測(cè)大鼠子宮組織ICAM－1mRNA、TGF－βmRNA的表達(dá)。結(jié)果顯示：婦炎寧湯可以降低盆腔炎性疾病后遺癥大鼠模型TGF－βmRNA、ICAM－1mRNA的表達(dá)。

4　結(jié)　語(yǔ)

綜上所述，影響慢性盆腔炎患者的病情嚴(yán)重程度除了與疾病本身有關(guān)之外，更與患者的機(jī)體免疫功能紊亂有密切關(guān)系，其中參與免疫反應(yīng)有關(guān)的因素有：細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)、細(xì)胞凋亡及自由基等。因此，對(duì)盆腔炎患者而言，除了運(yùn)用不同方法治療疾病外，還應(yīng)注重改善自身免疫調(diào)節(jié)。通過(guò)研究具體的抗炎通路及相應(yīng)的免疫因子來(lái)達(dá)到針對(duì)性的治療值得進(jìn)一步繼續(xù)研究。

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（2015－11－23收稿/編輯弓艷玲）

·臨床研究·

*通信作者，E-mail：318007460@qq.com

基金項(xiàng)目：廣西自然科學(xué)基金（編號(hào)：2014GXNSFAA118182）

中圖分類號(hào)：R711.33

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1003-0719（2016）01-0008-04