兩種反轉(zhuǎn)錄熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)HCV RNA的對(duì)比分析

唐章平

(四川省德陽(yáng)市羅江縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科　618500)

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兩種反轉(zhuǎn)錄熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)HCV RNA的對(duì)比分析

唐章平

(四川省德陽(yáng)市羅江縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科618500)

目的探討常規(guī)反轉(zhuǎn)錄熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-qPCR)與高精度RT-qPCR檢測(cè)丙型肝炎病毒(HCV)RNA的差異，為醫(yī)院開(kāi)展院內(nèi)感染監(jiān)控提供參考。方法對(duì)2014年1月至2015年12月的459例住院受血者，采用兩種RT-qPCR檢測(cè)HCV RNA，比較兩種檢測(cè)方法RNA陽(yáng)性率的表達(dá)差異。結(jié)果高精度RT-qPCR和常規(guī)RT-qPCR檢測(cè)HCV RNA的陽(yáng)性率分別為3.70%(17例)、1.74%(8例)，高精度RT-qPCR檢測(cè)HCV RNA陽(yáng)性表達(dá)明顯高于常規(guī)RT-qPCR檢測(cè)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=11.326，P<0.05)。結(jié)論合理應(yīng)用高精度RT-qPCR對(duì)輸血前患者進(jìn)行HCV RNA檢測(cè)，可以提高對(duì)HCV RNA的檢出率，減少了醫(yī)源性感染，提高了對(duì)受血患者健康狀況的判斷能力。

丙型肝炎病毒；高精度實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈法；醫(yī)源性感染

丙型肝炎病毒(HCV)是單股正鏈RNA病毒，近年來(lái)，我國(guó)丙型肝炎患者逐漸增多，一般人群HCV陽(yáng)性率為3.2%，可引起急性肝炎，或發(fā)展成慢性肝炎，嚴(yán)重者可發(fā)展成肝硬化，甚至肝癌[1]。實(shí)驗(yàn)室檢查主要包括免疫學(xué)及分子生物學(xué)檢測(cè)，反轉(zhuǎn)錄熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-qPCR)是目前采用較多的檢測(cè)HCV RNA方法，是表示傳染性及復(fù)制病毒最可靠的指標(biāo)，也是顯示HCV感染狀態(tài)及治療效果的重要指標(biāo)[2-3]。本研究采用兩種RT-qPCR檢測(cè)HCV RNA，比較兩種檢測(cè)方法RNA陽(yáng)性率的表達(dá)差異。

1資料與方法

1.1一般資料本院2014年1月至2015年12月的459例住院受血者，其中男203例，女256例，年齡5～87歲，平均(33.6±15.1)歲。

1.2儀器與試劑熒光定量PCR法均采用羅氏LightCycler*480Ⅱ?qū)崟r(shí)熒光定量PCR儀，常規(guī)RT-qPCR采用上海科華生物工程股份有限公司生產(chǎn)的HCV核酸定量試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?，檢測(cè)的線性范圍：103～107IU/mL，高精度RT-qPCR采用羅氏診斷產(chǎn)品(上海)有限公司生產(chǎn)的丙型肝炎病毒核酸定量試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?，檢測(cè)的線性范圍：1～15×108IU/mL，均嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。每份陽(yáng)性標(biāo)本均重復(fù)檢測(cè)2次。

1.3檢測(cè)方法均在輸血前抽取受血著靜脈血，同時(shí)進(jìn)行高精度RT-qPCR檢測(cè)及常規(guī)RT-qPCR檢測(cè)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS15.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，組間比較采用方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

高精度RT-qPCR和常規(guī)RT-qPCR檢測(cè)HCV RNA的陽(yáng)性率分別為3.70%(17例)、1.74%(8例)，高精度RT-qPCR檢測(cè)HCV RNA陽(yáng)性表達(dá)明顯高于常規(guī)RT-qPCR檢測(cè)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=11.326，P<0.05)。

3討論

丙型肝炎是由HCV感染引起的一種主要經(jīng)血液傳播的傳染性疾病，呈世界流行趨勢(shì)，其感染途徑可能有輸血感染、密切接觸、不良性行為和吸毒等。隨著《輸血法》的完善，供血中心已嚴(yán)格監(jiān)測(cè)血制品傳染性指標(biāo)，保障受血者的用血安全是各個(gè)血站的一項(xiàng)重要工作[4]。但是，近年來(lái)人們發(fā)現(xiàn)經(jīng)血液傳播的HCV傳染病越來(lái)越多見(jiàn)于非輸血人群，醫(yī)務(wù)人員對(duì)患者進(jìn)行各項(xiàng)診治工作時(shí)必須提高警惕，加強(qiáng)自身安全防護(hù)措施，而提高檢測(cè)技術(shù)對(duì)HCV監(jiān)測(cè)的靈敏度和特異度是最行之有效的解決醫(yī)院交叉感染和避免醫(yī)患矛盾的途徑之一。

自1989年科學(xué)家發(fā)現(xiàn)HCV以來(lái)，已建立了針對(duì)HCV抗體、HCV RNA和HCV抗原的各種檢測(cè)方法，可定性和定量檢測(cè)HCV RNA，常見(jiàn)的方法有RT-PCR定性法、bDNA檢測(cè)技術(shù)、RT-qPCR定量法等，其中RT-qPCR的基本原理是通過(guò)引物擴(kuò)增并檢測(cè)特異性mRNA 來(lái)證實(shí)HCV的存在，具有高效率、高靈敏度、高特異度的優(yōu)點(diǎn)，且操作簡(jiǎn)便，是檢測(cè)HCV RNA 比較有效的方法，也是預(yù)測(cè)和觀察抗病毒效果的重要指標(biāo)[5]。常規(guī)RT-qPCR檢測(cè)HCV RNA的線性范圍為103～107IU/mL，而高精度RT-qPCR是(1～15)×108IU/mL[6]，后者靈敏度明顯高于前者，這是因?yàn)楦呔萊T-qPCR是采用COBAS HCV RNA二代定量試劑，增加了針對(duì)HCV基因型4 的探針和引物，即用靶基因特異的裂解雙重標(biāo)記寡核苷酸檢測(cè)探針檢測(cè)HCV RNA，提高了檢測(cè)靈敏度[7]。高精度RT-qPCR還采用一已知數(shù)量的HCV定量標(biāo)準(zhǔn)(QS)RNA分子，是一種非傳染性體外轉(zhuǎn)錄RNA(aRNA)，組成并含有與HCV靶RNA完全相同引物結(jié)合位點(diǎn)的HCV序列片段，是一種獨(dú)特的探針結(jié)合區(qū)，使HCV QS擴(kuò)增子與HCV靶擴(kuò)增子區(qū)分開(kāi)，還有彌補(bǔ)抑制作用并控制制備和擴(kuò)增過(guò)程，使每個(gè)標(biāo)本中HCV RNA的定量更加準(zhǔn)確[8]。

本研究采用兩種RT-qPCR檢測(cè)HCV RNA，比較了高精度RT-qPCR與常規(guī)RT-qPCR檢測(cè)本院459例住院受血者HCV RNA陽(yáng)性率的表達(dá)差異，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，高精度RT-qPCR與常規(guī)RT-qPCR檢測(cè)HCV抗體的陽(yáng)性例數(shù)分別為17例(3.70%)、8例(1.74%)。高精度RT-qPCR對(duì)HCV抗體RNA陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于常規(guī)RT-qPCR，其檢測(cè)精度高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。因此，采用高精度RT-qPCR對(duì)輸血前患者進(jìn)行HCV RNA檢測(cè)，可以提高對(duì)HCV RNA的檢測(cè)率，但是，高精度RT-qPCR的試劑盒價(jià)格昂貴，導(dǎo)致檢測(cè)費(fèi)用大大高于常規(guī)RT-qPCR，因此，筆者認(rèn)為在臨床應(yīng)用中，監(jiān)測(cè)HCV RNA定量時(shí)，可以先用常規(guī)RT-qPCR定量試劑檢測(cè)，當(dāng) HCV RNA濃度下降到103以下時(shí)，再用高精度RT-qPCR定量檢測(cè)，是比較合理適用的檢測(cè)流程。

本研究資料表明，為了預(yù)防輸血引起的醫(yī)療糾紛，明確輸血事故的責(zé)任，杜絕和減少醫(yī)療機(jī)構(gòu)的損失，首先應(yīng)嚴(yán)格控制血液制品的質(zhì)量，同時(shí)認(rèn)真檢測(cè)患者輸血前血液傳染性指標(biāo)。合理應(yīng)用常規(guī)和高精度RT-qPCR，可明顯提高對(duì)HCV RNA的檢出率，有助于為醫(yī)療糾紛提高可靠舉證和防止院內(nèi)感染。

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[4]戴萬(wàn)案，邱妮妮，陳麗艷，等.熒光定量PCR法與微粒子酶免分析法同步檢測(cè)血液傳播性疾病的對(duì)比分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2013,23(5):1214-1216.

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[6]孫梅，談國(guó)蕾，王建芳，等.羅氏COBAS HCV RNA定量一代和二代檢測(cè)試劑對(duì)556例丙型肝炎患者HCV RNA定量檢測(cè)結(jié)果的比較[J].臨床肝膽病雜志,2014,30(12):1315-1317.

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2016-01-10修回日期：2016-03-15)

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.12.064

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1673-4130(2016)12-1737-02