常見動物病原學檢測樣品活體采集技術

張祖勇

(貴州省興義市動物疫病預防控制中心，貴州 興義 562400)

常見動物病原學檢測樣品活體采集技術

張祖勇

(貴州省興義市動物疫病預防控制中心，貴州 興義 562400)

在動物防疫工作中，會經(jīng)常開展動物疫病監(jiān)測、診斷工作，而病原學樣品的采集是進行動物疫病監(jiān)測、診斷的重要環(huán)節(jié)之一。筆者通過工作實踐經(jīng)驗，將幾種常見動物病原學樣品活體采樣技術介紹如下，供參考。

1 豬扁桃體采集

豬扁桃體是一個極其重要的免疫器官，具有抗細菌、抗病毒的防御功能，也是多種病原微生物侵襲、定居和復制的重要場所，采集豬扁桃體樣品，用于監(jiān)測、診斷常見疫病，具有很強的代表性。

1.1 物品器械 鼻捻子、開口器、采樣槍、無菌離心管、磷酸鹽緩沖液、無菌牙簽、2%氫氧化鈉液、清潔水桶、防護用品。

1.2 采樣前準備 采樣和保定人員穿戴好防護用品，加磷酸鹽緩沖液2～3 mL至5 mL無菌離心管，將采樣槍安裝調(diào)試好，放入2%氫氧化鈉液浸泡消毒5分鐘。

1.3 保定 由2位保定人員取站立保定。一位保定人員用鼻捻子套住豬上頜前1/3部位，可根據(jù)采樣者要求向上提住鼻捻子，使豬頭部上仰30～45°，另一位保定人員跨騎于豬身上方，兩手抓住豬兩耳，用兩腿內(nèi)側(cè)或膝部夾住豬前肢肩胛部，以減少豬活動范圍。

1.4 采樣 將消毒的采樣槍用無菌清水清洗，打開手電筒，左(右)手持開口器(型號視豬大小而定)，站在豬頭部右(左)側(cè)前方，用開口器平伸進豬口腔下壓手柄，使開口器轉(zhuǎn)為豎立，開口器下欄壓住豬舌頭保持不動，右(左)手持采樣槍，沿開口器上欄送入豬的咽部，到達扁桃體位置，使采樣針抵實扁桃體，迅速扣動扳機進行采樣，采樣槍退出口腔，可緩慢釋放扳機檢查是否已采集到所需樣品(扁桃體為淡粉紅色或肌肉色)，將采集到的樣品放入離心管，蓋緊瓶蓋搖勻。

2 牛、羊O－P液(食道、咽分泌物)采集

2.1 物品器械 開口器、采樣探杯、無菌離心管、磷酸鹽緩沖液、無菌棉簽、2%氫氧化鈉液、清潔水桶、防護用品。

2.2 采樣前準備 采樣和保定人員穿戴好防護用品，加磷酸鹽緩沖液2～3 mL至10 mL無菌離心管，將采樣探杯放入2%氫氧化鈉液浸泡消毒5分鐘。

2.3 保定

2.3.1 牛的保定:柱欄內(nèi)保定或徒手保定。徒手保定(多用于比較溫順的牛)方法:保定者一手抓住牛的一角，另一手拉住牛鼻繩、鼻環(huán)，或用拇指與食指和中指捏住牛的鼻中隔加以固定，并配合采樣者，提高牛的頭部。

2.3.2 羊的保定:由一位保定人員取站立保定。保定人員跨騎于羊身上方，兩手抓住兩角或兩耳，使其頭部上仰貼于保定者腹部后，再用其中1只手托住羊下頜，可用拇指壓迫嘴角，協(xié)助打開口腔，調(diào)整頭部仰角，使口、咽、食道幾乎成直線，保定者兩腿內(nèi)側(cè)或膝部夾住羊前肢肩胛部，以減少羊活動范圍。

2.4 采樣 將消毒的采樣探杯用無菌清水清洗，并倒盡探杯中清水，一手持開口器(型號視被采樣動物大小而定)，站在牛、羊頭部正前方或稍偏向保定者對側(cè)，用開口器平伸進口腔，下壓手柄轉(zhuǎn)為豎立保持不動，另一手持采樣探杯，沿開口器上欄伸進牛、羊口腔，達到咽部時輕輕抽送幾下刺激牛、羊吞咽，順勢下送探杯進入食道上部(牛10～15 cm、羊5～10 cm)，上下抽提3～5次，刺激咽部產(chǎn)生分泌物，取出探杯，將采集的O－P液2～5 mL倒入離心管，蓋緊瓶蓋搖勻。

3 家禽喉拭子和泄殖腔拭子采集

3.1 物品器械 無菌棉簽、含抗生素的PBS保存液、2 mL離心管、普通剪刀。

3.2 采樣前準備 采樣和保定人員穿戴好防護用品，加PBS保存液1～2 mL于無菌離心管。

3.3 保定 保定人員一手抓住家禽兩翅，一手抓住家禽兩腿，將頭部或泄殖腔朝向采樣者。

3.4 采樣 一手握住家禽頭部，拇指和食指輕捏于對側(cè)上下喙交界處，打開口腔，一手取無菌棉簽，插入家禽喉頭轉(zhuǎn)到2～3圈，采集喉拭子;或一手扒開泄殖腔周圍羽毛，一手取無菌棉簽，插入泄殖腔0.5～1.0 cm轉(zhuǎn)動2～3圈，采集泄殖腔拭子，將拭子放入裝有保存液的離心管，剪去露出部分，蓋緊瓶蓋搖勻。

4 注意事項

4.1 采集多頭動物樣品時，采樣槍和探杯必須要重復消毒清洗。

4.2 用于采樣的采樣槍或采樣探杯最好用與被采樣動物體溫接近的溫水清洗，以減少機體應激。

4.3 牛羊O－P液采集前禁食12小時(可少量飲水)，以避免反芻草料污染樣品。

4.4 采集的扁桃體如果與采樣槍刀槽粘連，可用無菌牙簽挑至離心管，O－P液如果粘稠無法倒出，可用無菌棉簽刮擦，將棉簽剪斷一同放入離心管。

4.5 病原學樣品24小時能及時檢測的可冷藏保存，不能及時檢測的樣品應－20℃以下保存。

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