林裕勝，江錦秀，林　甦，胡奇林

(福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，福建福州350013)

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羊傳染性膿皰病毒研究進(jìn)展

林裕勝，江錦秀，林甦，胡奇林*

(福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，福建福州350013)

摘要：羊傳染性膿皰病毒是羊傳染性膿皰(羊口瘡)的病原，能夠感染山羊、綿羊和野生小反芻動(dòng)物，也能夠感染人，主要引起口腔黏膜、眼睛、外陰、蹄等部位形成丘疹、水皰、膿皰和疣狀痂皮，病畜因衰竭和繼發(fā)感染而死亡。論文對(duì)羊傳染性膿皰病毒的特征、致病性、致病機(jī)理、免疫機(jī)理、免疫逃逸機(jī)制、檢測(cè)方法和疫苗研究進(jìn)行了綜述。

關(guān)鍵詞：羊傳染性膿皰病毒；致病機(jī)理；免疫機(jī)理；檢測(cè)方法；疫苗

羊傳染性膿皰病毒(Contagious ecthyma virus,CEV)是羊傳染性膿皰(羊口瘡，Orf)的病原。羊傳染性膿皰是一種接觸性和嗜上皮性傳染病，主要發(fā)生于綿羊、山羊、野生反芻動(dòng)物。該病的主要癥狀為嘴唇、鼻孔、乳頭、口腔黏膜、眼睛、外陰、蹄等出現(xiàn)丘疹或水皰,病畜因衰竭和繼發(fā)感染而死亡。該病分布廣泛，全世界有養(yǎng)羊的國(guó)家?guī)缀蹙性摬“l(fā)生的報(bào)道，該病的發(fā)生給我國(guó)養(yǎng)羊業(yè)造成了嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。CEV也可感染人，人感染后主要表現(xiàn)為指間和手背、鼻子、嘴唇、面部出現(xiàn)丘疹，免疫失調(diào)者可出現(xiàn)非典型增生病變及自身免疫性障礙等并發(fā)癥。最近也有關(guān)于貓和家養(yǎng)馴鹿感染CEV的報(bào)道[1-2]。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外對(duì)CEV進(jìn)行了深入研究，本文對(duì)羊傳染性膿皰病毒的特征、致病性、致病機(jī)理、免疫機(jī)理、免疫逃逸機(jī)制、檢測(cè)方法和疫苗研究等進(jìn)行綜述。

1CEV特征

羊傳染性膿皰病毒屬于痘病毒科(Poxviridae)，副痘病毒屬(Parapoxvirus)，該屬成員還有偽牛痘病毒(Pseudocowpox virus，PCPV)、牛丘疹性口炎病毒(Bovine popular stomatitis virus，BPSV)、新西蘭馬鹿副痘病毒(Parapoxvirusof red deer in New Zealand，PVNZ)。CEV粒子直徑250 nm～280 nm，為橢圓形、錐形、磚型及特殊的線團(tuán)樣球形顆粒，外有脂類(lèi)囊膜，內(nèi)有雙股線性DNA。病毒粒子表面為“8”字型纏繞的螺旋結(jié)構(gòu)，此形態(tài)為該病毒獨(dú)有，易于與其他痘病毒區(qū)分。病毒基因組大小為130 kb～150 kb，含有16個(gè)開(kāi)放閱讀框，130多個(gè)基因，基因組G+C含量豐富，約為63%～64%；基因組G+C含量較高且缺少終止密碼子，致使345個(gè)蛋氨酸起始的ORFs中有60個(gè)缺少終止密碼子。CEV由2個(gè)相同的反向末端重復(fù)序列(ORFs 001～008和ORF 112～134)和中心編碼區(qū)(ORFs 009～111)組成。2個(gè)反向末端重復(fù)序列擁有共價(jià)閉合末端發(fā)夾結(jié)構(gòu)，并且末端重復(fù)序列中存在0.5 kb～1 kb的變異片段，臨近發(fā)夾結(jié)構(gòu)處，有一段小于100 bp的保守序列是DNA復(fù)制必不可少的。通過(guò)對(duì)CEV基因組右末端的BamH I片段的序列測(cè)定，發(fā)現(xiàn)其包含末端重復(fù)序列區(qū)約3 388 bp的基因片段。CEV末端 002、024和121基因編碼的蛋白具有抑制核轉(zhuǎn)錄因子κB(nuclesr factor kappa B,NF-κB)的作用[3]。CEV末端 003、004、008、123、126、128、129基因均可編碼錨蛋白重復(fù)序列(ankyrin repeat，ANK)，ANK是普遍存在于生物體中的一種蛋白質(zhì)基序；F盒樣蛋白(F-BOX)基序已證明存在于大多數(shù)痘病毒的ANK中，參與宿主細(xì)胞的泛素/蛋白酶機(jī)制[4]。CEV編碼的ANK通過(guò)F-BOX蛋白基序介導(dǎo)，降解宿主抗病毒因子。病毒轉(zhuǎn)錄時(shí)缺乏反向末端重復(fù)序列將不利于病毒蛋白的生成?；蚪M的中部與病毒的復(fù)制和病毒結(jié)構(gòu)的形成有關(guān)，這在病毒的增殖、形態(tài)發(fā)生和結(jié)構(gòu)組成中均起到很重要的作用；通過(guò)與痘病毒序列對(duì)比分析，發(fā)現(xiàn)與痘病毒基因組的中心編碼區(qū)同源性極高，證明該區(qū)域?yàn)楦叨缺Ｊ氐幕騕5]。比如，由CEV 080基因編碼產(chǎn)生的蛋白與痘苗病毒(Vaccinia virus,VACA)A4L基因編碼產(chǎn)生的蛋白功能十分相似，均在病毒粒子核心蛋白的形成以及形態(tài)發(fā)生過(guò)程中起作用；CEV 086基因是高度保守的基因，編碼產(chǎn)生的蛋白與VACA編碼的p4a蛋白同源；CEV 088基因編碼產(chǎn)生的蛋白與VACA A2L基因編碼產(chǎn)生的蛋白同源性達(dá)56%[6]。CEV的基因組比較大，因此所編碼的蛋白也是豐富多樣。其編碼的蛋白有10 ku蛋白、42 ku、vIL-10、RNA螺旋酶、RNA聚合酶、GM-CSF抑制因子、拓?fù)洚悩?gòu)酶、病毒粒子相關(guān)蛋白、轉(zhuǎn)錄因子蛋白、干擾素抗性基因、DNA聚合酶、趨化因子結(jié)合蛋白和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子等[7]。

目前NCBI已經(jīng)登錄了OV-SA00、OV-IA82、NZ2、D1701、NA1-11等5株CEV全基因序列。Andrew A M等[8]通過(guò)對(duì)3株分離株的基因序列與BPSV進(jìn)行比對(duì)分析，發(fā)現(xiàn)BPSV與CEV基因核苷酸相似性達(dá)67%～75%，分別含有113個(gè)和111個(gè)與其他痘病毒屬具有同源性的基因，其中分別有88個(gè)和90個(gè)基因在其他脊椎動(dòng)物痘病毒基因組中屬于保守基因；此外2種病毒基因組中含有127個(gè)相同排列順序和方向的基因，有15個(gè)基因?yàn)楦倍徊《緦偎赜械摹otton等通過(guò)對(duì)CEV和接觸性傳染性軟疣病毒(Molluscum contagiosum virus, MOCV)的保守性非結(jié)構(gòu)基因和氨基酸序列同源性及遺傳進(jìn)化樹(shù)分析，發(fā)現(xiàn)CEV基因組雖較MOCV小，然而由于具有高含量的G+C，兩者之間的基因組具有更高的相似性，然而末端重復(fù)序列存在影響毒力基因和致病因子，因此在不同毒株間也有較高的變異率。

CEV在干燥的痂皮可以存活數(shù)月至1年。在寒冷干燥的環(huán)境下，可以存活數(shù)年，實(shí)驗(yàn)室冰箱內(nèi)可以存活很多年，且不喪失其活力和感染力。將痂皮放置陽(yáng)光下暴曬，仍有少數(shù)結(jié)痂內(nèi)的病毒會(huì)存活，依然可感染羔羊發(fā)病；長(zhǎng)期置放于室溫下，病毒的毒力會(huì)有一定程度的降低。CEV不耐潮濕、高溫、機(jī)械性損傷和紫外照射。在潮濕環(huán)境中，病毒不容易存活；高溫環(huán)境， 如60℃水浴 30 min或煮沸3 min即可使其失活；化學(xué)試劑如氯仿、苯和甲苯等在一定濃度下可滅活該病毒，對(duì)乙醚、苯及丙酮輕度敏感，不耐酸堿，pH越低，病毒效價(jià)降低越明顯。

CEV不能在雞胚絨毛尿囊膜和MK2細(xì)胞上生長(zhǎng)，但可以在多種組織細(xì)胞內(nèi)增殖，原代細(xì)胞主要有原代羔羊睪丸細(xì)胞、原代羔羊腎細(xì)胞、原代胎羊皮膚細(xì)胞、原代胎羊肌細(xì)胞、羊胚胎鼻甲骨細(xì)胞、原代胎牛肌細(xì)胞、原代牛睪丸細(xì)胞、原代胎牛肺細(xì)胞、原代胎牛螺旋狀細(xì)胞等[9]；傳代細(xì)胞系主要為madin-darby牛腎細(xì)胞和madin-darby綿羊腎細(xì)胞、Vero細(xì)胞、Hela細(xì)胞、狗腎細(xì)胞等。病毒一般在接種細(xì)胞2代~3代后產(chǎn)生CPE，主要表現(xiàn)為細(xì)胞間質(zhì)增寬，細(xì)胞圓縮、腫脹，折光性增強(qiáng)，細(xì)胞融匯，形成拉網(wǎng)狀，脫落。病變的時(shí)間及病變程度有較大差異。從報(bào)道看，年輕且繁殖快的細(xì)胞較老齡的細(xì)胞對(duì)CEV更為敏感，產(chǎn)生病變也更為明顯。病毒接種細(xì)胞后一般在6 h~12 h后能夠在細(xì)胞內(nèi)檢測(cè)到病毒。

2CEV致病性

CEV可致綿羊、山羊、野生小反芻動(dòng)物發(fā)病，主要表現(xiàn)為嘴唇、鼻孔、乳頭、口腔黏膜、眼睛、外陰、蹄等出現(xiàn)丘疹或水皰；人感染該病毒主要表現(xiàn)為指間和手背、鼻子、嘴唇、面部出現(xiàn)丘疹，免疫失調(diào)者可出現(xiàn)非典型增生病變及自身免疫性障礙等并發(fā)癥。

3CEV致病機(jī)理

CEV經(jīng)羊口腔、外陰、皮膚黏膜組織等破損處進(jìn)入機(jī)體后，在這些部位的上皮細(xì)胞中繁殖，引起上皮層的角化細(xì)胞突然增生、腫大；由于病毒感染導(dǎo)致分泌血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，致使表皮強(qiáng)烈增生和毛細(xì)血管高度擴(kuò)張；血管內(nèi)的淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞向外周滲透，產(chǎn)生堿性胞漿內(nèi)涵體，直至液化，最后形成水泡，繼而嗜中性粒細(xì)胞移動(dòng)到網(wǎng)狀組織壞死區(qū)，形成膿皰；這些部位表面的上皮細(xì)胞發(fā)生壞死，纖維蛋白凝結(jié)，膿皰干燥后結(jié)為結(jié)痂[10]。

4CEV免疫機(jī)理

至今為止，CEV的免疫機(jī)理尚不十分清楚，主要包括天然免疫、細(xì)胞免疫和體液免疫，其中，以細(xì)胞免疫為主。天然免疫方面，CEV在感染的初期，機(jī)體的免疫相關(guān)細(xì)胞如中性粒細(xì)胞，CD4+T、CD8+T細(xì)胞，B細(xì)胞等會(huì)在2周內(nèi)大量富集，4周之后趨于正常；若再次感染該病毒，病程縮短，不到2周就會(huì)趨于正常，且免疫相關(guān)細(xì)胞不會(huì)大量增殖，對(duì)機(jī)體造成的損傷比初次感染小。細(xì)胞免疫方面，機(jī)體感染CEV后，為抵抗CEV感染首先募集中性粒細(xì)胞，并伴隨著CD4+T和CD8+T細(xì)胞的募集，同時(shí)B細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞的募集通過(guò)細(xì)胞免疫和MHCⅠ類(lèi)分子發(fā)揮作用[11]。體液免疫方面，機(jī)體為抵御CEV的感染，通過(guò)B淋巴細(xì)胞和中和抗體、特異性抗體產(chǎn)生來(lái)發(fā)揮作用；中和抗體通過(guò)抵御CEV的5種免疫優(yōu)勢(shì)性抗原即39 ku膜蛋白F1L、42 ku膜蛋白B2L、10 ku的假定融合蛋白、22 ku和65 ku的蛋白來(lái)發(fā)揮作用。但是中和抗體產(chǎn)生很少，因此注射超免血清和攝入初乳都不能抵抗病毒的感染[12]。

5CEV免疫逃避機(jī)制

CEV初次感染機(jī)體后主要侵嗜上皮細(xì)胞，患病羊通常在1個(gè)月~2個(gè)月后自愈。然而再次感染時(shí)，CEV與機(jī)體免疫系統(tǒng)相互作用過(guò)程中，形成一套自身免疫逃避系統(tǒng)，用以抵御機(jī)體的清除。當(dāng)前的研究發(fā)現(xiàn)，該系統(tǒng)主要包含以下幾個(gè)方面：通過(guò)CD95途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；編碼參與免疫調(diào)節(jié)作用的相關(guān)蛋白如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、GM-CSF/IL-2抑制因子(the inhibitor of granulocyte-macrophage colony-stimulation facror/interleukin-2,GIF)、CEV-IL-10(a cytokine interleukin-10 orthologue,vIL-10)和CEV干擾素阻抗蛋白(interferon resistance facror,CEVIFNR)、趨化因子結(jié)合蛋白(chemokine binding protein，CBP)，這些蛋白主要參與干擾宿主的免疫防御，在病毒免疫逃避中發(fā)揮重要作用。

CEV可以通過(guò)CD95途徑影響機(jī)體免疫反應(yīng)效果，誘導(dǎo)抗原提呈細(xì)胞(antigen presenting cells, APCs)的凋亡。CEV能表達(dá)凋亡蛋白，該蛋白能誘導(dǎo)CD95的表達(dá)，從而通過(guò)CD95和CD95L途徑導(dǎo)致單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的凋亡。由于APCs的凋亡，減弱了T細(xì)胞免疫應(yīng)答。

VEGF 是由CEV 132基因(大小約為402 bp)編碼產(chǎn)生的一種多肽(類(lèi)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子蛋白)，是病毒的一個(gè)重要致病因子，在宿主上皮細(xì)胞增生中起關(guān)鍵作用，主要是引起上皮細(xì)胞的有絲分裂和廣泛的血管變化，而且能夠激活病毒VEGF受體，促使病毒感染靶細(xì)胞并導(dǎo)致細(xì)胞凋亡[13]。通過(guò)對(duì)敲除VEGF基因的毒株與野毒株同時(shí)進(jìn)行動(dòng)物攻毒試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)缺失VEGF基因的毒株其致病性明顯減弱[14]。研究還發(fā)現(xiàn)，不同CEV毒株的VEGF基因序列相似度差異很大，但所編碼蛋白的功能域卻是極為保守的一段序列[15]。

CEV-IL-10 由大小約為561 bp的CEV IL-10基因編碼, 是病毒感染早期表達(dá)的蛋白之一，是潛在的抗炎癥細(xì)胞因子，可抑制單核-巨噬細(xì)胞分泌TNF-α、抑制巨噬細(xì)胞分泌IL-8、抑制淋巴細(xì)胞分泌IFN-γ等，從而抑制宿主的非特異性免疫反應(yīng)[16]。此外CEV-IL-10能夠降低IL-12的表達(dá)，進(jìn)而抑制DC細(xì)胞表面標(biāo)記物MHCⅡ類(lèi)分子的活化和成熟。且通過(guò)抑制CD4+T細(xì)胞的活化，造成DC細(xì)胞功能衰減導(dǎo)致獲得性免疫力下降。最新研究表明，CEV-IL-10是一種毒力因子，是造成CEV反復(fù)持續(xù)性地感染宿主的一個(gè)主要因素[17]。

GIF 由CEV 117基因編碼的類(lèi)GM-CSF/IL-2抑制因子蛋白，含有256個(gè)氨基酸。GIF蛋白可以結(jié)合宿主分泌的細(xì)胞因子GM-CSF和IL-2，抑制白細(xì)胞、Th0和CTL細(xì)胞的增殖，減弱宿主免疫系統(tǒng)對(duì)病毒的殺傷作用。

IFNR 由CEV020基因編碼的干擾素阻抗蛋白，含有183個(gè)氨基酸。在宿主抵抗病毒的反應(yīng)中，雙鏈RNA激活的蛋白激酶(double stranded RNA activated protein kinase，PKR)磷酸化可以結(jié)合翻譯起始因子eIF-2α，從而阻斷病毒復(fù)制和細(xì)胞蛋白的翻譯。IFNR蛋白能夠特異性結(jié)合dsRNA阻扼PKR基因的磷酸化，進(jìn)一步抑制PKR蛋白激酶的活性，與PKR競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合病毒復(fù)制的中間體，從而阻止宿主細(xì)胞干擾素終止病毒蛋白翻譯[18]。

CEV-CBP 由CEV112基因編碼的趨化因子結(jié)合蛋白，含有286個(gè)氨基酸。在病毒早期復(fù)制過(guò)程中，能夠有效地結(jié)合趨化因子，阻止趨化因子與相應(yīng)的受體作用。CEV-CBP擁有結(jié)合CC型炎癥趨化因子的能力，從而抑制單核-巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞向炎癥部位聚集，其他痘病毒則不能[17]。此外，CEV-CBP還能與C型趨化因子結(jié)合，進(jìn)而抑制嗜中性粒細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞向炎癥部位聚集[19]。

科學(xué)家還發(fā)現(xiàn)CEV基因組中還存在可以編碼免疫逃避機(jī)制的相關(guān)基因。如CEV121基因，該基因的缺失可明顯降低CEV對(duì)羊的毒性和致病性；CEV024基因，該基因編碼的蛋白可通過(guò)抑制NF-κB信號(hào)通路，進(jìn)而抑制宿主免疫細(xì)胞分泌的一些重要因子[20]。

6CEV檢測(cè)方法研究

近年，CEV的檢測(cè)方法主要有電子顯微鏡檢查、免疫電鏡檢查、病毒分離鑒定、血清學(xué)檢查、分子生物學(xué)檢測(cè)方法等。

6.1電子顯微鏡檢查

主要是通過(guò)觀察病毒粒子的形態(tài)但是由于副痘病毒與其他痘病毒的大小幾乎差不多很難通過(guò)電子顯微鏡來(lái)區(qū)分，不利于病原的確診。

6.2免疫電鏡法

主要是通過(guò)病毒的形態(tài)學(xué)和免疫學(xué)相結(jié)合，利用病毒特異性抗體結(jié)合CEV進(jìn)行檢測(cè)，此法增強(qiáng)了診斷的特異性。

6.3病毒分離鑒定

主要是利用原代羔羊睪丸細(xì)胞、原代羔羊腎細(xì)胞或傳代細(xì)胞系進(jìn)行病毒分離，再用PCR等方法鑒定。

6.4血清學(xué)方法

主要包含反向間接血凝試驗(yàn)、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、對(duì)流免疫電泳、病毒中和試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、蛋白質(zhì)印跡技術(shù)等。反向間接血凝試驗(yàn)、對(duì)流免疫電泳是我國(guó)科研工作者沈正達(dá)等率先在國(guó)內(nèi)外首創(chuàng)的。利用A蛋白、G蛋白和重組蛋白A/G過(guò)氧化物酶標(biāo)記建立的間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法檢測(cè)CEV抗體，該方法已用于人、駱駝和羊的檢測(cè)。通過(guò)蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)，已從感染動(dòng)物的陽(yáng)性血清中檢測(cè)到CEV 40 ku免疫原性蛋白，通過(guò)此法還檢測(cè)到了2個(gè)20 ku和22 ku的蛋白。

6.5分子生物學(xué)檢測(cè)方法

主要包含PCR、實(shí)時(shí)定量PCR、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)、限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析。PCR檢測(cè)方法已經(jīng)非常成熟，主要針對(duì)F1L和B2L等保守基因進(jìn)行檢測(cè)。Mondal B等[21]針對(duì)B2L基因建立了半套式PCR，該方法能夠檢測(cè)到低拷貝兩的病毒粒子。余波等[22]針對(duì)B2L基因建立了PCR檢測(cè)方法，該方法能夠檢測(cè)最低核酸量1.2 fg/μL。鄭敏等[23]針對(duì)CEV的pL基因和羊痘病毒的A29L基因建立了雙重PCR方法，該方法可用于鑒別CEV和GPV。向智龍等[24]針對(duì)CEV pL基因和山羊痘病毒ITR基因建立了雙重PCR，該方法具有較強(qiáng)特異性和敏感性。實(shí)時(shí)定量PCR診斷方法主要針對(duì)B2L基因進(jìn)行擴(kuò)增，該方法在國(guó)內(nèi)外均有廣泛應(yīng)用[25-28]。Jida L等[29-30]建立了環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增方法，該方法具有快速、準(zhǔn)確、敏感、方便等優(yōu)點(diǎn)。限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性是通過(guò)從病料中抽提病毒DNA，利用酶切病毒基因組產(chǎn)生隨機(jī)酶切片段進(jìn)行分析，Mazur等建議使用Dra I進(jìn)行羊口病毒分離株的基因組分型。

7CEV疫苗研究

目前報(bào)道的CEV疫苗有滅活苗、細(xì)胞弱毒苗、囊膜亞單位疫苗、核酸疫苗和重組疫苗等。

7.1滅活疫苗

Boughton等1930年在德克薩斯研制了CEV疫苗，該疫苗株是從綿羊身上獲得，Dela于1999年發(fā)現(xiàn)此疫苗不能對(duì)山羊起到保護(hù)作用。隨后Buddle、Pulford等在1984年用CEV滅活疫苗分別對(duì)分娩前3周～4周孕羊及孕羊所生羔羊進(jìn)行免疫；試驗(yàn)結(jié)果顯示，免疫過(guò)滅活疫苗的孕羊所產(chǎn)羔羊與空白對(duì)照組有相似癥狀，發(fā)生了CE，產(chǎn)生結(jié)痂，免疫弱毒苗組癥狀較輕，不產(chǎn)生結(jié)痂，可見(jiàn)高水平的母源抗體并不能很好的抵御CEV的感染,Andrew、Mathiesen等也印證了此結(jié)論。田婷婷等[31]于2013年用滅活苗免疫94只孕羊，對(duì)孕羊血清進(jìn)行中和抗體檢測(cè)，結(jié)果顯示孕羊中和抗體水平較對(duì)照組有顯著升高。張立強(qiáng)等[32]用蜂膠佐劑滅活疫苗分3次免疫36只孕羊，免疫14 d后分離血清，進(jìn)行中和抗體檢測(cè)，結(jié)果顯示，血清中含有較高中和抗體。

7.2弱毒疫苗

Ramyar等1973年利用原代腎細(xì)胞對(duì)CEV進(jìn)行28次傳代，降低毒力后接種羔羊，可維持半年的免疫力。西德等1981年利用羊腎細(xì)胞對(duì)CEV進(jìn)行135次傳代，皮下注射1萬(wàn)只羊，羔羊發(fā)病率較往年顯著下降。杜森茂等1988年研制成羊傳染性膿皰皮炎睪丸細(xì)胞弱毒凍干苗，免疫保護(hù)率達(dá)75%，保護(hù)期近180 d。Pye等對(duì)羔羊采用劃痕方式進(jìn)行CEV弱毒苗接種，5周后進(jìn)行攻毒試驗(yàn)，結(jié)果顯示免疫過(guò)的羔羊雖發(fā)病但癥狀較對(duì)照組輕。Nettleton 等1996年用CEV弱毒苗劃痕接種8日齡羔羊，分別在3個(gè)月和6個(gè)月后進(jìn)行攻毒試驗(yàn)，結(jié)果顯示免疫過(guò)3個(gè)月后攻毒，羔羊雖發(fā)病但與對(duì)照相比，沒(méi)有出現(xiàn)典型病理變化；免疫過(guò)6個(gè)月后攻毒，免疫組也出現(xiàn)結(jié)痂，說(shuō)明疫苗保護(hù)力下降。Mercante等2008年利用雞胚成纖維細(xì)胞將CEV傳10代，采用肌肉注射免疫山羊，免疫后14 d測(cè)血清抗體效價(jià)，1個(gè)月后劃痕接種CEV強(qiáng)毒，結(jié)果顯示，免疫后的羊抗體效價(jià)高，沒(méi)有出現(xiàn)結(jié)痂癥狀。田婷婷[31]利用犢牛睪丸原代細(xì)胞對(duì)分離的CEV傳代85代，采用劃痕免疫接種羔羊唇部，2個(gè)月后劃痕接種CEV強(qiáng)毒，結(jié)果顯示，接種該苗的羔羊沒(méi)有出現(xiàn)水泡、結(jié)痂等癥狀。

7.3病毒囊膜亞單位疫苗

左玉婷等1994年利用獲得的病毒囊膜表面糖蛋白與弗氏佐劑混合后免疫羔羊，可引起羔羊體內(nèi)遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)，且能夠產(chǎn)生一定滴度的CEV特異性抗體，由此可見(jiàn)該用亞單位疫苗免疫羔羊可產(chǎn)生一定的免疫保護(hù)。在2004年表達(dá)了CEV F1L基因，用純化的F1L重組蛋白與弗氏佐劑進(jìn)行混合，研制成CEV亞單位疫苗，用該疫苗皮下免疫家兔2次，第3次靜脈注射，3次免疫后測(cè)血清中和抗體，結(jié)果顯示，重組蛋白能夠刺激中和抗體的產(chǎn)生，說(shuō)明F1L重組蛋白具有一定的免疫原性。以上這些疫苗均屬于實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)階段，尚未進(jìn)入臨床應(yīng)用[32]。

7.4核酸疫苗

趙魁等[33]研制的pcDNA3.1-ORFV011/059 DNA疫苗,試驗(yàn)用100 μg pcDNA3.1-ORFV011/059DNA質(zhì)粒免疫小鼠，對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)、血清中和抗體水平等進(jìn)行評(píng)估，結(jié)果顯示該疫苗不僅可產(chǎn)生高滴度的中和抗體，還可引發(fā)機(jī)體細(xì)胞免疫。

7.5重組病毒疫苗

Fischer T等[34]用高度致弱的CEV D1701毒株作為病毒載體表達(dá)了偽狂犬病毒的糖蛋白gC和gD。Jestin等2003年以CEV D1701毒株作為載體表達(dá)了博納病毒p40蛋白；以CEV作為載體表達(dá)豬瘟病毒E2糖蛋白，結(jié)果顯示可以高效表達(dá)E2糖蛋白[26]。用細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)的EG95替代CEV基因組中的G1L基因，構(gòu)建重組病毒載體疫苗，希望由此獲得雙重保護(hù)[35]。有學(xué)者設(shè)想通過(guò)隨機(jī)克隆CEV基因組的DNA片段插入到VACV載體上，構(gòu)建表達(dá)載體既能表達(dá)CEV保護(hù)性抗原，又能抵御VACV的入侵。張倩等[36]構(gòu)建了以山羊痘病毒為載體，表達(dá)CEV F1L基因的重組山羊痘病毒疫苗株，為CEV基因工程載體疫苗奠定基礎(chǔ)。

8結(jié)語(yǔ)

近年來(lái)，對(duì)羊傳染性膿皰病毒的基因結(jié)構(gòu)和功能、病毒逃逸的分子機(jī)制、新型疫苗等方面進(jìn)行了大量研究，取得了顯著進(jìn)展，但是，由于羊傳染性膿皰病毒免疫的特殊性，至今為止，還沒(méi)有安全、高效的羊傳染性膿皰病毒疫苗，而當(dāng)前用于預(yù)防羊口瘡的疫苗主要是弱毒疫苗， 其存在安全性不夠好、有毒力返強(qiáng)、 不能區(qū)分野毒感染等缺點(diǎn)，因此，研究安全、高效的疫苗是今后研究的重點(diǎn)。同時(shí)，目前尚無(wú)準(zhǔn)確、快速檢測(cè)羊傳染性膿皰病毒抗體的試劑，準(zhǔn)確、快速檢測(cè)抗體試劑的研究也是今后的研究方向之一。

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Progress on Contagious Ecthyma Virus

LIN Yu-sheng, JIANG Jin-xiu, LIN Su, HU Qi-lin

(InstituteofAnimalHusbandry&VeterinaryMedicine,FujianAcademyofAgriculturalSciences,Fuzhou,Fujian,350013,China)

Abstract:Contagious ecthyma virus(CEV) is the pathogen of contagious ecthyma(CE), and could infect goats, sheep,wilde small ruminats and people. CEV mainly causes papules,vesicles,pustules and verrucous scabs in oral mucosa,eyes,vulvae,hooves. The sick animals may be dead because of failure and secondary infection. In this paper, CEV research progresses on virus characteristics, pathogenicity,mechanism of pathogenesis, mechanism of immunity, immune escape mechanism, detection methods and vaccines were reviewed.

Key words:Contagious ecthyma virus;; mechanism of pathogenesis; mechanism of immunity; detection method; vaccine

文章編號(hào):1007-5038(2016)02-0091-06

中圖分類(lèi)號(hào):S852.65

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

作者簡(jiǎn)介：林裕勝(1988-)，男，福建漳州人，研究實(shí)習(xí)員，碩士，主要從事臨床獸醫(yī)學(xué)和動(dòng)物傳染病學(xué)研究。 *通訊作者

基金項(xiàng)目：福建省公益類(lèi)項(xiàng)目(2014R1101002-8)

收稿日期：2015-04-14