0＃柴油水溶性成分對黑鯛肝臟、鰓、肌肉組織中抗氧化酶活性的影響

董 冉，蔣 玫，李 磊，楊杰青，許高鵬，沈新強

（1.中國水產科學研究院東海水產研究所，上海 200090；2.上海海洋大學海洋科學學院，上海 201306）

0＃柴油水溶性成分對黑鯛肝臟、鰓、
肌肉組織中抗氧化酶活性的影響

董 冉1，2，蔣 玫1，李 磊1，楊杰青1，2，許高鵬1，2，沈新強1

（1.中國水產科學研究院東海水產研究所，上海 200090；2.上海海洋大學海洋科學學院，上海 201306）

采用室內實驗方法，研究了不同濃度（0 mg·L－1、0.015 mg·L－1、0.03 mg·L－1、0.06 mg·L－1）0＃柴油水溶性成分（WSF）對黑鯛（Sparus macrocephalus）肝臟、鰓和肌肉谷胱甘肽－S－轉移酶（GST）、超氧化物歧化酶（SOD）和過氧化氫酶（CAT）的影響。結果顯示：（1）肝臟、鰓、肌肉和組織中GST活性與0＃柴油具有明顯的時間－效應和劑量－效應關系，肝臟組織中GST活性較肌肉和鰓組織中的更為靈敏；（2）各組織中SOD活性隨時間和劑量的變化整體無明顯規(guī)律；（3）肝臟組織中CAT活性先誘導后抑制，肌肉中始終被誘導，鰓中始終被抑制。CAT活性變化幅度不如GST明顯。實驗表明，黑鯛肝臟組織中GST更適合作為0＃柴油污染響應的生物標志物，用作早期海洋石油污染的預警和監(jiān)測的指標之一。

0＃柴油；黑鯛；肝臟；鰓；肌肉；抗氧化酶

石油是一種復雜的混合物，由烷烴、芳烴、雜環(huán)芳烴等多種復雜分子結構組成，入海后發(fā)生一系列復雜變化，最終大多以水溶性成分（water soluble fraction，WSF）存在于海洋中，這正是產生毒性效應的主要部分。0＃柴油是典型的石油污染物之一，其WSF中芳香烴含量高達90%以上。海洋石油污染對海洋生態(tài)平衡造成了嚴重影響，呂福榮等[1]發(fā)現石油污染使馬糞海膽（Hemicentrotus pulcherrimus）胚胎發(fā)育延后，且延后程度與油品分散液濃度密切相關，肖雅元等[2]指出WSF會使翡翠貽貝（Perna viridis）的內臟團和外套膜組織受到不同程度的損傷，王振等[3]的研究表明原油水溶性成分會導致斜帶髭鯛（Hapalogenysnitens）仔魚畸形或死亡。

石油烴在生物體內生物轉化的同時會伴隨著大量活性氧自由基（reactive oxygen radical，ROR）的產生，從而引起機體的酶蛋白失活、免疫細胞的脂質過氧化、DNA損傷等氧化應激反應[4－5]，進而影響生物體的免疫功能[6]。水生生物機體的抗氧化防御系統(tǒng)則可以通過一系列反應，減少活性氧在體內的蓄積，最大程度減少對細胞組織等造成的損傷。肝臟谷胱甘肽－S－轉移酶（GST）、超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）均是抗氧化防御系統(tǒng)的重要組分，其活性的高低在一定程度上可以反映水生環(huán)境的早期污染[7－9]。

黑鯛（Sparus macrocephalus）是一種重要的淺海溫水性底層魚類，具有較高的養(yǎng)殖經濟價值，廣泛分布于我國東南沿海及日本、東南亞等地區(qū)。由于其具有適溫適鹽等特性，且食譜雜、抗病能力強、生長迅速，因此可作為理想的實驗魚類[10]。

目前，海洋環(huán)境污染監(jiān)測中主要有關抗氧化酶活性的研究主要集中于蝦類[11]、貝類[12]、魚類[10，13－17]等水生生物，0＃柴油水溶性成分對黑鯛體內酶活性變化方面也有研究[18]，但關于0＃柴油污染下黑鯛不同組織中多種抗氧化酶的分析比較研究較為罕見。本實驗以0＃柴油水溶性成分作為污染源，對黑鯛肝臟、鰓和肌肉3種組織中不同種類抗氧化酶活性表達進行對比研究，分析水體暴露處理后對黑鯛肝臟組織中GST、SOD和CAT活性的影響，并初步探討0＃柴油對黑鯛可能的致毒機制，旨在為石油污染的生物標志物選取方面提供新的參考資料和基礎參數，并為溢油損害評估提供技術支持。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

實驗用油為市售0＃柴油。實驗海水取自自然海區(qū)，鹽度20～21，pH 8.20，經沉淀和砂濾后，充分曝氣24 h以上備用。供試生物為江蘇省海洋水產研究所提供的黑鯛，平均體質量（6.85± 1.54）g。實驗前先將黑鯛馴養(yǎng)，期間每天定時投放餌料，自然死亡率低于1%，馴養(yǎng)15 d后，挑選健康、活潑、無損傷的個體進行實驗。

將0＃柴油與過濾海水按體積比1∶10（V∶V）配比[19]，置于磁力攪拌機上連續(xù)攪拌24 h后靜置3 h，吸取表層下水相，注入棕色玻璃瓶，4℃冰箱保存，作為0＃柴油水溶性成分實驗母液備用。按照海洋監(jiān)測規(guī)范，使用紫外分光光度計法測定石油烴的含量[20]。

1.2 實驗方法

實驗包括富集和釋放兩個階段，分別進行19 d（0～19 d）和3 d（20～22 d）。經過預實驗確定半致死濃度后，將1.1中母液用過濾海水稀釋成不同濃度[21]，其梯度分別設為0 mg·L－1（天然海水）、0.015 mg·L－1、0.03mg·L－1、0.06mg· L－1，每組設3個平行，其中0 mg·L－1組為對照。每組投放50 ind黑鯛。

1.2.1 富集階段

實驗采用半靜態(tài)法，整個實驗過程中加入海水量為140 L，每24 h換水一次，換水量為100%，每天換水時需及時撈出死亡或行為異常的個體。每天定時定量喂食配合飼料（8∶00和18∶00投喂一次，投喂量為黑鯛個體質量的2%），并按設定的濃度梯度重新配置實驗溶液。分別于實驗的第3天、第7天、第15天、第19天各選取5 ind黑鯛，在冰水浴條件下用生理鹽水清洗，取其肝臟、鰓和肌肉樣品，勻漿，然后迅速轉至液氮中冷凍保存，以備分析。

1.2.2 釋放階段

富集階段結束后，排出每個容器中的實驗溶液，在天然海水流水條件下（3.6 L·h－1）進行黑鯛體內富集石油烴的釋放實驗。喂食步驟與富集階段相同。于第22天采集5 ind黑鯛，處理方法同富集階段。

1.3 毒理學指標的測定

黑鯛的肝臟、肌肉和鰓組織中蛋白含量的測定采用考馬斯亮藍法，CAT、SOD和GST活性的測定均嚴格按照由南京建成生物公司提供的檢測試劑盒所附帶的說明書進行操作。GST活性定義為在37℃扣除非酶促反應，1 mg組織蛋白1 min內使反應體系中谷胱甘肽（GSH）濃度降低1 μmol·L－1為1個酶活力單位（U1），單位為U1· mg－1；SOD活性定義為1 mg組織蛋白在1 mL反應液中SOD抑制率達到50%時所對應的量為1個酶活性單位（U2），單位為U2·mg－1；CAT活性定義為1 mg組織蛋白在1 min內分解1μmol H2O2的量為1個酶活性單位（U3），單位為U3· mg－1。

1.4 統(tǒng)計分析

酶活性數據顯示為3個平行組數據的平均值±標準差（Means±SD）。采用Excel2010軟件進行繪圖。用t檢驗法對試驗組與對照組進行差異性分析，P＜0.05被認為差異顯著。

2 結果與分析

2.1 0＃柴油水溶性成分對黑鯛肝臟、肌肉和鰓組織中GST活性的影響

由圖1可知，在富集階段，3種組織中各染毒濃度組GST活性在第3天均被誘導。肝臟組織中各染毒濃度組GST活性均在第7天達到峰值，顯著高于對照組（P＜0.05），隨后肝臟中各染毒濃度組GST活性開始下降，第19天時高濃度組（0.06 mg·L－1）GST活性仍顯著高于對照組水平（P＜0.05）。鰓組織中各染毒濃度組GST活性在第3天時達到峰值，其中高濃度組GST活性為對照組的2.55倍，顯著高于對照組（P＜0.05），隨后各染毒濃度組GST活性開始下降，第15天時基本達到穩(wěn)定狀態(tài)。肌肉組織中各染毒濃度組GST活性在第15天達到峰值，中濃度0.03 mg ·L－1組、高濃度組GST活性顯著高于對照組（P＜0.05），分別為對照組的2.15、3.23倍，第19天時只有高濃度組GST活性較對照組有顯著性差異（P＜0.05）。

進入釋放階段后，三種組織中各染毒濃度組GST活性逐漸下降。在第22天時，除肌肉組織高濃度組GST活性顯著高于對照組（為其2.97倍，P＜0.05）外，其余各試驗組GST活性基本恢復至對照組水平（P＞0.05）。

圖1 0＃柴油水溶性成分對黑鯛肝臟（a）、鰓（b）、肌肉（c）組織中GST活性的影響Fig.1 Effects of No.0 diesel oil exposure on GST activities in liver（a），muscle（b）and gill（c）of Sparus macrocephalus

2.2 0＃柴油水溶性成分對黑鯛肝臟、肌肉和鰓組織中SOD活性的影響

如圖2所示，在富集階段，肝臟組織中各試驗組SOD活性在第3天降至最低，高濃度組SOD活性為對照組的66%，差異顯著（P＜0.05），隨后各試驗組SOD活性升高，第15天達到峰值后又開始下降，至第19天時與對照組水平無顯著差異（P＞0.05）。鰓組織中的高濃度組SOD活性逐漸下降，在第15天降至最低，為對照組水平的62%，差異顯著（P＜0.05），第19天時升至對照組水平（P＞0.05）。肌肉組織中的高濃度組SOD活性在第3天被顯著誘導（P＜0.05），在第7天升至峰值，顯著高于對照組（P＜0.05），為其1.86倍，隨后下降，第19天時與對照組無顯著差異（P＞0.05）。

圖2 0＃柴油水溶性成分對黑鯛肝臟（a）、鰓（b）、肌肉（c）組織中SOD活性的影響Fig.2 Effects of No.0 diesel oil exposure on SOD activities in liver（a），muscle（b）and gill（c）of Sparus macrocephalus

在釋放階段，肝臟組織中各試驗組SOD活性繼續(xù)下降，第22天時，肝臟組織中的中、高濃度組SOD活性顯著低于對照組（P＜0.05），分別為對照組水平的56%、51%。鰓和肌肉組織中各試驗組SOD活性在第22天與對照組水平無顯著的統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。

2.3 0＃柴油水溶性成分對黑鯛肝臟、肌肉和鰓組織中CAT活性的影響

在富集階段，如圖3所示，黑鯛肝臟和肌肉組織中各濃度組CAT活性整體先升高后降低。肝臟組織中各試驗組CAT活性在第7天達到峰值，中、高濃度組CAT活性顯著高于對照組（P＜0.05），分別為對照組的2.94、5.38倍，至第19天肝臟組織中各試驗組CAT活性恢復至對照組水平（P＞0.05）。鰓組織中各試驗組CAT活性持續(xù)下降，第19天時與對照組水平仍有顯著差異（P＜0.05）。肌肉組織中各試驗組在第3天達到峰值，且中（0.03 mg·L－1）、高濃度組CAT活性顯著高于對照組（P＜0.05），分別為對照組的2.19、2.87倍，隨后肌肉組織中各試驗組CAT活性開始下降，其中高濃度組CAT活性在第19天仍顯著高于對照組水平（P＜0.05）。

進入釋放階段后，三種組織中各染毒濃度組CAT活性下降。第22天時，肌肉和肝臟各試驗組CAT活性與對照組水平均無顯著的統(tǒng)計學差異（P＞0.05），鰓組織中各試驗組CAT活性顯著低于對照組水平（P＜0.05）。

3 討論

抗氧化系統(tǒng)由多個抗氧化酶系組成，是生物體內清除活性氧自由基、抵抗外源環(huán)境壓力的重要防御系統(tǒng)。外源性污染物進入生物體內后，先經Ⅰ相反應在有關酶催化下生成一些活性基團或使活性基團暴露，活性基團經Ⅱ相反應在其它酶作用下與內源性化合物或基團（內源性輔因子）結合，生成親水性更強、利于排出體外的二級代謝物[16]。

圖3 0＃柴油水溶性成分對黑鯛肝臟（a）、鰓（b）、肌肉（c）組織中CAT活性的影響Fig.3 Effects of No.0 diesel oil exposure on CAT activities in liver（a），muscle（b）and gill（c）of Sparus macrocephalus

有研究表明，在輕度污染下SOD活性往往升高，而在重度污染下SOD活性常常會降低，致使生物體內活性氧過量積累，進而對生物體造成傷害[22]。但本實驗結果顯示，黑鯛肝臟組織中各濃度組SOD活性呈下降－上升－下降趨勢，在染毒初期被明顯被抑制，且抑制程度與試驗組濃度呈正相關，這說明細胞受到了一定程度的傷害[23]，傷害程度隨0＃柴油水溶性成分濃度的增加而加深。隨后SOD活性開始上升，表明黑鯛機體誘導產生大量的SOD，以清除過量的自由基，減少對機體造成的傷害。魯雙慶等[23]在黃鱔肝臟中也發(fā)現了同樣的現象。在鰓組織中，中低濃度組SOD活性與對照組無明顯差異，高濃度組（0.06 mg·L－1）SOD活性則被抑制，可見0.06 mg· L－1為其閾值濃度，當0＃柴油污染的作用超過黑鯛機體的適應能力時就會出現中毒反應[24]。肌肉組織中高濃度組SOD活性誘導早于中低濃度組，這在夏斌等[24]的研究中也得到了驗證。

黑鯛的肝臟和肌肉組織中CAT活性先升后降，說明受到污染后CAT能有效被誘導，將H2O2等被進一步代謝為水和分子氧，從而防止毒性更大的羥自由基等的產生，阻斷其放大氧自由基的損傷，保護細胞免受其傷害，減少脂質過氧化損傷[25－27]，但隨著曝油時間的延長，黑鯛體內的活性氧蓄積，氧自由基使CAT和SOD酶蛋白結構和輔基的微環(huán)境與價態(tài)發(fā)生變化，使其受到損傷，放大了氧自由基的損傷效應，導致活性降低[28]。

從時間－效應來看，黑鯛各組織中GST活性先升后降。染毒初期表現出敏感性和誘導性，表明GST特定的亞基催化異生物質與GSH結合生成了易于排泄低毒的化合物[27]，從而在石油烴的解毒過程起到了重要作用[29]。后期可能是解毒代謝過程中產生的中間代謝物使GST亞基組成發(fā)生變化，加上GSH被大量消耗，導致GST活性降低[12]。從劑量－效應來看，在本實驗濃度范圍內，黑鯛的肝臟和肌肉組織中CAT活性和黑鯛各組織中GST活性與0＃柴油濃度呈正相關，該現象在其它污染物的毒性效應中也普遍存在[14－15]。釋放結束后，除肌肉組織中高濃度組（0.06 mg· L－1）外，其余各濃度組均恢復至對照水平，說明在0.015～0.03 mg·L－1濃度范圍內，受試黑鯛能夠調節(jié)自身的適應機制，各組織并未受到不可逆損傷。此外，鰓的GST活性出現峰值的時間早于肝臟和肌肉，這印證了鰓是黑鯛吸收污染物的重要位點[30]，對外界污染的應激反應最為優(yōu)先，而肝臟是解毒代謝器官，受到污染的影響更為嚴重，需要更長的時間來緩和[31]。同時，各組織中三種酶活性大小依次為為：肌肉＜鰓＜肝臟，這可能是由各組織的功能進化差異造成的。

4 小結

（1）黑鯛各組織中GST活性整體先升后降，始終被誘導。肝臟中SOD活性呈抑制－誘導－抑制趨勢，鰓中SOD活性先抑制后誘導，肌肉中SOD活性始終被誘導，各組織中SOD的活性表達整體隨時間和劑量的變化曲線是多階段的，無明顯變化規(guī)律。肝臟和肌肉組織中CAT活性也呈現上升－下降趨勢，但變化幅度不如GST明顯；肝臟中CAT活性先誘導后抑制，肌肉中始終被誘導，而鰓組織中CAT活性始終被抑制。

（2）0＃柴油污染對黑鯛肝臟組織中GST活性影響比肌肉和鰓組織中的更為靈敏，在0.015 mg ·L－1濃度下即可誘導GST的顯著表達，各組織中GST活性大小依次為：肌肉＜鰓＜肝臟。SOD和CAT活性分別在0.06 mg·L－1、0.03mg·L－1濃度下才能被顯著誘導，各組織中SOD和CAT活性大小呈現與GST活性相同的規(guī)律。

（3）從抗氧化酶角度來分析，所有檢測的各組織的抗氧化生化指標中，只有GST對污染的反應同時具有明顯的劑量－效應和時間－效應關系；從受試的黑鯛組織來看，肝臟組織中幾種抗氧化酶的變化規(guī)律較為明顯。因此，較其它指標而言，在本研究的受試濃度下，肝臟組織中的GST更適合作為監(jiān)測石油污染的有效生物標志物。

[1]呂福榮.石油烴污染對馬糞海膽的毒性效應及分子機制研究[D].大連：大連海事大學，2009.

LV R F.Study on toxic effect and molecular mechanism of petroleum hydrocarbon pollution to Hemicentrotus Pulcherrimus[D].Dalian：Dalian Maritime University，2009.

[2]肖雅元，李純厚，徐姍楠，等.水溶性石油烴組分對翡翠貽貝的毒性效應研究[J].農業(yè)環(huán)境科學學報，2012，31（3）：598－606.

XIAO Y Y，LIC H，XU S N，et al.Toxicological effects of water-soluble fraction in petroleum hydrocarbons on green mussel（Perna viridis）[J].Journal of Agro-Environment Science，2012，31（3）：598－606.

[3]王 振，鄭森林，劉文華，等.原油水溶性成分對斜帶髭鯛受精卵及仔魚的急性毒性效應[J].臺灣海峽，2010，29（3）：367－372.

WANG Z，ZHENG S L，LIU W H，et al.Acute toxic effects of the water accommodated fraction of crude oil onHapalogenysnitens zygotesand larvae[J].Journal of Oceanography in Taiwan Strait，2010，29（3）：367－372.

[4]DI GIULIO R T，WASHBURN P C，WENNING R J，et al.Biochemical responses in aquatic animals：a review of determinants of oxidative stress[J].Environmental Toxicology and Chemistry，1989，8（12）：1103－1123.

[5]LIVINGSTONE D R，ARCHIBALD S，CHIPMAN J K，et al.Antioxidant enzymes in liver of dabLimanda limandafrom the North Sea[J].Marine Ecology Progress Series，1992（91）：97－104.

[6]王 凡，趙元鳳，呂景才，等.銅污染對扇貝內臟團抗氧化酶活性的影響[J].水產科學，2008，27（12）：622－624.WANG F，ZHAO Y F，LV J C，et al.Effect of Cu2＋on the antioxidant enzyme of scallopchlamys farreri′sviscera[J].Fisheries Science.2008，27（12）：622－624.

[7]BURGEOT T，BOCQUENE G，PORTE C，et al.Bioindicators of pollutant exposure in the northwestern Mediterranean Sea[J].Marine Ecology Progress Series，1996，131（1－3）：125－141.

[8]JENA K B，VERLECAR X N，CHAINY G.Application of oxidative stress indices in natural populations of Perna viridis as biomarker of environmental pollution[J].Marine Pollution Bulletin，2009，58（1）：107－113.

[9]STEIN JE，COLLIER T K，REICHERT W L，et al.Bioindicators of contaminant exposure and sublethal effects：studies with benthic fish in Puget Sound，Washington[J].Environmental Toxicology and Chemistry，1992，11（5）：701－714.

[10]朱德芬.黑鯛人工養(yǎng)殖技術講座—第一講黑鯛生物學特性及增養(yǎng)殖概況[J].水產養(yǎng)殖，1996（1）：30－32.

ZHU D F.Artificial Farming Technique ofSparus microcephalus—Biological characteristic ofSparus microcephalusand its artificial feeding[J].Journal of Aquaculture，1996（1）：30－32.

[11]吳眾望，潘魯青，張紅霞.重金屬離子對凡納濱對蝦肝胰臟、鰓絲和血液SOD活力的影響[J].應用生態(tài)學報，2005，16（10）：1962－1966.

WU ZW，PAN L Q，ZHANG H X.Effects of heavy metal ions on SOD activity of Litopenaeus vannamei hepatopancreas，gill and blood[J].Chinese Journal of Applied Ecology，2005，16（10）：1962－1966.

[12]陳 榮，鄭微云，郁 昂.0＃柴油水溶性成分對僧帽牡蠣（Ostrea cucullata）谷胱甘肽硫轉移酶活性的影響[J].廈門大學學報（自然科學版），2005，44（S1）：219－221.

CHEN R，ZHENG W Y，YU A.Effect of Watersoluble fraction of No.0 oil on glutathione stransferase inostrea cucullata[J].Journal of Xiamen University（Natural Science），2005，44（S1）：219－221.

[13]穆景利，王新紅，林建清，等.苯并[a]芘對黑鯛肝臟GST活性的影響及其與肝臟代謝酶和膽汁代謝產物之間的變化關系[J].生態(tài)毒理學報，2009，4（4）：516－523.

MU J L，WANG X H，LIN J Q，et al.Effects of benzo[a]pyrene exposure on hepatic GST activity in black porgy（Sparus macrocephalus）and variation relationships with hepatic metabolic enzymes and biliary metabolites[J].Asian Journal of Ecotoxicology，2009，4（4）：516－523.

[14]陳家長，孟順龍，胡庚東，等.低濃度阿特拉津對鯽魚過氧化氫酶（CAT）活性的影響[J].農業(yè)環(huán)境科學學報，2008，27（3）：1151－1156.

CHEN JZ，MENG S L，HU G D，et al.Effects of low concentration of atrazine on catalase activity in carassius auratus[J].Journal of Agro－Environment Science，2008，27（3）：1151－1156.

[15]胡 蓉，唐正義.鎘對鯽魚肝胰臟CAT和SOD活性的影響[J].西南大學學報（自然科學版），2011，33（8）：94－98.

HU R，TANG Z Y.Effect of cadmium on activities of catalase and superoxide dismutase from hepatopancreas of carassius auratus[J].Journal of Southwest University（Natural Science Edition），2011，33（8）：94－98.

[16]陳家長，裘麗萍，瞿建宏，等.苯并（a）芘對羅非魚肝臟CYP1A1和GST活性的影響[J].生態(tài)與農村環(huán)境學報，2014，30（2）：268－272.

CHEN J Z，QIU L P，QU J H，et al.Effects of Benzo（a）pyrene on Activities of Hepatic CYP1A1 and GST in Tilapia[J].Journal of Ecology and Rural Environment，2014，30（2）：268－272.

[17]穆景利.苯并（a）芘在黑鯛（Sparus macrocephalus）體內代謝轉化機制的初步研究[D].廈門：廈門大學，2006.

MU J L.Preliminary study on metabolic mechanism of Benzo（a）pyrene in black porgy（Sparusmacrocephalus）[D].Xiamen：Xiamen University，2006.

[18]李 磊，蔣 玫，沈新強，等.0＃柴油和原油水溶性成分對黑鯛肝臟7－乙氧基異吩噁唑酮－脫乙基酶活性及其mRNA表達的影響[J].應用與環(huán)境生物學報，2014，20（6）：1027－1032.

LIL，JIANG M，SHEN X Q，et al.Effects of water accommodated fraction of No.0 fuel oil and Pinghu crude oilon the EROD activities and CYP1 A1 mRNA expression in liver ofSparus macrocephlus[J].Chinese Journal of Applied and Environmental Biology，2014，20（6）：1027－1032.

[19]賈曉平，林 欽.南海原油和燃料油對仔蝦和仔魚的急性毒性試驗[J].熱帶海洋，1998，17（1）：93－98.

JIA X P，LIN Q.Toxicity of Nanhai crude oil and fuel oils to larval shrimps and larval fishes[J].1998，17（1）：93－98.

[20]國家海洋局.海洋監(jiān)測規(guī)范[S].北京，1991.

State Oceanic Administration people′s Republic of China.The specification for marine monitoring[S].Beijing，1991.

[21]李 磊，蔣 玫，沈新強，等.0＃柴油和原油水溶性成分在黑鯛（Sparus macrocephlus）體內的富集動力學[J].應用與環(huán)境生物學報，2014，20（2）：286－290.

LIL，JIANG M，SHEN X Q，et al.Accumulation kinetics of water accommodated fraction in No.0 oil and Pinghu crude oil inSparus macrocephlus[J].Chinese Journal of Applied and Environmental Biology，2014，20（2）：286－290.

[22]STEBBING A.Hormesis-the stimulation of growth by low levels of inhibitors[J].Science of the Total Environment，1982，22（3）：213－234.

[23]魯雙慶，劉少軍，劉紅玉，等.Cu2＋對黃鱔肝臟保護酶SOD、CAT、GSHPX活性的影響[J].中國水產科學，2002，9（2）：138－141.

LU SQ，LIU SJ，LIU H Y，et al.Effects of Cu2＋on activities of protecting enzymes SOD，CAT and GSHPX in liver tissue ofMonopterus albus[J].Journal of Fishery Sciences of China，2002，9（2）：138－141.

[24]夏 斌，陳碧鵑，李傳慧，等.勝利原油對半滑舌鰨肝臟超氧化物歧化酶和過氧化氫酶活性的影響[J].漁業(yè)科學進展，2011（1）：53－59.

XIA B，CHEN B J，LIC H，et al.Effect of Shengli crude oil on the activities of superoxide dismutase and catalase in the liver of Tongue sole Cynoglossussemilaevis[J].Progress in Fishery Sciences，2011，32（1）：53－59.

[25]PANNUNZIO TM，STOREY K B.Antioxidant defenses and lipid peroxidation during anoxia stress and aerobic recovery in the marine gastropod Littorina littorea[J].Journal of Experimental Marine Biology and Ecology，1998，221（2）：277－292.

[26]LEMAIRE P，MATTHEWS A，F?RLIN L，et al.Stimulation of oxyradical production of hepatic microsomes of flounder（Platichthys flesus）and perch（Perca fluviatilis）by model and pollutant xenobiotics[J].Archives of Environmental Contamination and Toxicology，1994，26（2）：191－200.

[27]JORDAN R A，SCHENKMAN J B.Relationship between malondialdehyde production and arachidonate consumption during NADPH-supported microsomal lipid peroxidation[J].Biochemical Pharmacology，1982，31（7）：1393－1400.

[28]姜招峰，楊翰儀.氧自由基對CAT、SOD和GPX的氧化修飾研究[J].北京聯合大學學報（自然科學版），2003，17（3）：12－17.

JIANG Z F，YANG H Y.Effects of oxygen free radicals on functions and structuresof CAT，SOD and GPX invitro[J].Journal of Beijing Union University（Natural Sciences），2003，17（3）：12－17.

[29]羅朝暉，李彥宏，趙 紅.0號柴油水溶性成分影響褐菖鲉肝臟、脾臟和腎臟抗氧化能力的比較[J].福建師范大學學報（自然科學版），2012，28（6）：113－117.

LUO C H，LI Y H，ZHAO H.Comparison on antioxidant capacity of liver，spleenand kidney ofSebastiscus marmoratusAffected by No.0 diesel oil water-soluble fraction[J].Journal of Fujian Normal University（Natural Science Edition），2012，28（6）：113－117.

[30]陳瑪麗，瞿璟琰，劉青坡，等.四溴雙酚－A和五溴酚對紅鯽肝臟組織和超微結構的影響[J].安全與環(huán)境學報，2008，8（4）：8－11.

CHEN M L，QU JY，LIU Q P，etal.A comparative study between the two biotic ligand models（BLMs）on predicting the acute Zn toxicity toDaphniamagna[J].Journal of Safety and Environment，2008，8（4）：8－11.

[31]李 磊，蔣 玫，沈新強，等.苯并[a]芘暴露對三疣梭子蟹鰓、肝胰腺組織毒理學指標的影響1[J].動物學雜志，2015，50（2）：252－261.

LIL，JIANG M，SHEN X Q，et al.Effects of benzo[a]pyrene exposure on the toxicology parameter in gill and liver of Portunus trituberculatus[J].Chinese Journal of Zoology，2015，50（2）：252－261.

Effects of water-soluble fraction in No.0 diesel oil exposure on the antioxidase activities in liver，gill and muscle of Sparus microcephalus

DONG Ran1，2，JIANG Mei1，LI Lei1，YANG Jie-qing1，2，XU Gao-peng1，2，SHEN Xin-qiang1
（1.East China Sea Fisheries Research Institute，Chinese Academy of Fishery Sciences，Shanghai200090，China；2.Colloge of Marine Sciences，Shanghai Ocean University，Shanghai 201206，China）

No.0 diesel is a typical pollutant in marine environment，it will trigger a chain reaction if exposed in the sea.Most of these compositions exist as water－soluble fraction（WSF），which is toxic to sea-life and thus breaks the balance of marine ecosystem.Under indoor simulation conditions，the activities of glutathione s-transferase（GST），superoxide dismutase（SOD）and catalase（CAT）in the liver，gill and muscle ofSparus microcephaluswere studied，with a 19-day No.0 diesel oil water-soluble fraction（WSF）exposure period and 3-day elimination period.The experimental larvae were provided by fish farms from Jiangsu Fisheries Research Institute.Experimental water was natural seawater，with the pH at8.20 and salinity at20－21.Four groups at concentrations of 0，0.015，0.03，0.06 mg·L－1of No.0 diesel WSF solution were set in all three organs.Results indicated that：（1）within the experimental dose range，the time-response trend of inductions of liver，gill and muscle GST ofSparus macrocephaluswas bell-shaped.The activities of GST in the liver，gill and muscle versus time increased first and then decreased under the prolonged exposure of No.0 diesel oil water-soluble fraction（WSF）.Overall，GST activities in the liver，gill and muscle were induced during the exposure period.There was an obvious dose-time response relationship between No.0 diesel oil water-soluble fraction（WSF）and GST activities in the liver，gill and muscle ofSparus microcephalus.GST activities in liver were the most sensitive to No.0 diesel oil water-soluble fraction（WSF），as which could be induced significantly under No.0 diesel oil water-soluble fraction（WSF）exposure at the concentration of0.015 mg· L－1.（2）On the whole，SOD activities in the liver，gill and muscle of Sparus microcephalus didn’t show a direct correlation with the concentration of No.0 diesel oil water-soluble fraction（WSF），neither with time.（3）CAT activities in three organs were distinct.The time-response trend of inductions of liver and muscle CAT was bell-shaped，which was similar to that of GST，but varied less than that of GST.CAT activities in liver were induced at first and then inhibited，while that in muscle was induced all the time，in contrast，the CAT activities in gill kept inhibited all through the experiment.When the elimination period came to an end，except for the three groups in gill，the CAT activities in all other groups showed no difference from control groups.In summary，the simulation results showed that GST activities in liver of Sparus macrocephalus were recommended for environmental No.0 diesel oil pollution monitoring.

No.0 diesel oil；Sparus macrocephalus；liver；gill；muscle；antioxidase

S 973.2

A

1004－2490（2016）02－0190－08

2015－06－30

農業(yè)部應對溢油關鍵技術專項（2012－2014）；中國水產科學研究院基本科研業(yè)務費（2014A02XK01）；

中央級公益性科研院所基本科研業(yè)務費專項（2014T06）

董 冉（1990－），女，碩士研究生，主要研究方向為水環(huán)境毒理學。E-mail：197668825＠qq.com

沈新強，研究員。E-mail：xinqiang＿shen＠hotmail.com