仙草質(zhì)量控制的研究進(jìn)展

李博，謝歡，鐘國(guó)躍，程波翔，董燕婧，張壽文

（江西中醫(yī)藥大學(xué)，江西南昌　330004）

·綜述·

仙草質(zhì)量控制的研究進(jìn)展

李博，謝歡，鐘國(guó)躍，程波翔，董燕婧，張壽文

（江西中醫(yī)藥大學(xué)，江西南昌330004）

從仙草的性狀及顯微鑒別、常規(guī)檢查、化學(xué)成分研究、指紋圖譜研究、有害物質(zhì)檢查、采收期研究等方面綜述了近年來仙草質(zhì)量控制研究的現(xiàn)狀。仙草為唇形科（Labiatae）涼粉草屬的多年生草本植物，為藥食兩用植物。仙草的有效成分主要包括仙草多糖、槲皮素、齊墩果酸、熊果酸、咖啡酸等。關(guān)于仙草指紋圖譜的研究相對(duì)較少，對(duì)于采用哪個(gè)或哪幾個(gè)有效成分作為仙草質(zhì)量控制含量測(cè)定的指標(biāo)鮮有報(bào)道。認(rèn)為今后應(yīng)建立一套科學(xué)的、系統(tǒng)的仙草質(zhì)量控制體系，為其質(zhì)量控制提供參考。

仙草；質(zhì)量控制；仙草多糖；槲皮素；齊墩果酸；熊果酸；咖啡酸；指紋圖譜

仙草（Mesona chinesis Benth.）又名涼粉草、仙人凍、仙人草、黑豆腐草等，是唇形科（Labiatae）涼粉草屬的多年生草本植物。作為藥食兩用植物資源，仙草多分布于廣東、福建、廣西、江西、浙江、臺(tái)灣和云南等地，其中廣東和福建為我國(guó)的兩大主產(chǎn)地［1-2］。據(jù)《中藥大辭典》記載，其性寒，味澀、甘，具有清暑解渴、涼血之功效，可治中暑、糖尿病、高血壓、急性腎炎、風(fēng)火牙痛、肌肉及關(guān)節(jié)疼痛、梅毒、丹毒、黃疸等癥［1］。仙草含有仙草多糖、黃酮類、三萜類、酚類等多種化合物?，F(xiàn)代藥理研究結(jié)果顯示，仙草具有抗氧化、抗損傷、降血壓、降血脂、降血糖、抗菌等多種功效［3］。仙草在我國(guó)及東南亞地區(qū)常被用來制作涼粉、涼茶，具有重要的食用與經(jīng)濟(jì)價(jià)值［4］。因其野生品種逐漸減少，相關(guān)栽培技術(shù)的研究也逐漸受到重視。以下從仙草的性狀及顯微鑒別、常規(guī)檢查、化學(xué)成分研究、指紋圖譜研究、有害物質(zhì)檢查、采收期研究來綜述仙草的質(zhì)量控制的研究現(xiàn)狀，以期為仙草的質(zhì)量控制與評(píng)價(jià)提供參考。

1　性狀及顯微鑒別

性狀及顯微特征是中藥材真?zhèn)蝺?yōu)劣的辨識(shí)手段之一，不同的藥材呈現(xiàn)不同的性狀及顯微特征［5-7］。不少學(xué)者［4，8］針對(duì)仙草的性狀、莖橫切面及粉末顯微作了詳細(xì)的描述。

1.1性狀仙草藥材常切段，2～4 cm不等。莖四棱，表面被有棕色疏毛或剛毛，棕黃色或棕褐色，具溝槽，幼莖常扭曲；質(zhì)韌，髓部明顯。葉對(duì)生，紙質(zhì)，多皺縮，不易捻碎，展開呈卵圓形或長(zhǎng)圓形，兩面皆被疏長(zhǎng)毛。氣微，嚼之味淡甘，有黏性。

1.2莖橫切面顯微特征表皮由1列整齊的方形細(xì)胞排列而成，具非腺毛。皮層薄壁細(xì)胞排列疏松，內(nèi)皮層為單層細(xì)胞排列，厚角組織明顯。韌皮部相對(duì)較窄。四棱處木質(zhì)部發(fā)達(dá)。嫩莖髓部薄壁細(xì)胞相對(duì)較大，老莖多中空。

1.3粉末顯微特征非腺毛有兩種，一種是多細(xì)胞組成，外壁具線條狀紋理。另一種是單細(xì)胞組成，外壁具疣狀突起。纖維細(xì)長(zhǎng)，壁較厚。螺紋導(dǎo)管多見，具緣紋孔導(dǎo)管或網(wǎng)紋導(dǎo)管偶見。多見不規(guī)則分泌物。多見直軸式氣孔。

2　常規(guī)檢查

中藥材的常規(guī)檢查對(duì)于其質(zhì)量控制具有重要的意義，包括水分測(cè)定、灰分測(cè)定、浸出物測(cè)定等多項(xiàng)檢查。王玉［9］對(duì)于仙草藥材的一些常規(guī)檢查指標(biāo)進(jìn)行了測(cè)定研究，結(jié)果顯示仙草的水分≤0.073%，總灰分≤16.27%，酸不溶性灰分≤1.86%，水溶性浸出物含量≥7.6%，為仙草藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立提供了參考。

3　化學(xué)成分研究

中藥材的質(zhì)量與其有效成分的種類和含量具有明顯的相關(guān)。林麗莎等［3］、趙志國(guó)等［4］對(duì)仙草的有效成分進(jìn)行了歸類整理，主要含有仙草多糖、黃酮類、三萜類、酚類等化合物，還有其他一些植物甾醇、礦物質(zhì)、氨基酸、維生素、植物色素等。

3.1仙草多糖仙草多糖具有抗氧化、清除脂質(zhì)過氧化物、抑菌等作用［10］。楊敏等［11-12］研究指明仙草多糖能影響谷胱甘肽過氧化物（GSH-px）的活性，一定程度上抑制H2O2所致大鼠肝勻漿丙二醛（MDA）的生成，并且具有明顯劑量—效應(yīng)關(guān)系。林少琴等［13］分離純化及鑒定了仙草多糖，張維冰等［14］通過超高效液相色譜—串聯(lián)四極桿質(zhì)譜分析方法測(cè)定了仙草多糖組成及其含量，其中半乳糖醛酸、葡萄糖相對(duì)比重較大，占總糖含量的一半。部分研究者還對(duì)仙草多糖的提取方法及工藝進(jìn)行了研究，主要有傳統(tǒng)水煮法［15］、熱水堿液浸提法［16-17］、微波輔助堿液提取法［18］、超聲輔助法［19-20］、酶法提?。?1］等，為仙草多糖的提取提供了參考。馮濤等［17］在仙草多糖提取及純化工藝的研究中采用了苯酚—硫酸法測(cè)定仙草多糖的含量，含量可達(dá)到3.495%，為仙草多糖含量測(cè)定提供了方法參考。

3.2黃酮類黃酮是一類多酚化合物，具有抗炎、調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)、抗腫瘤等多種藥理作用［22］。槲皮素是仙草黃酮類化合物的主要成分［23］，具有祛痰、平喘等功效。劉小玲等［24］的研究結(jié)果提示仙草中的保肝成分主要是槲皮素糖苷。朱良等［25］研究了超聲提取仙草中黃酮類的工藝及其抗氧化作用，結(jié)果表明黃酮最佳提取工藝為提取溫度60℃，提取時(shí)間30 min，超聲功率200 W，在此提取條件下的黃酮得率為2.05%。劉志偉等［26］研究結(jié)果表明纖維素酶能提升仙草黃酮的提取率，可達(dá)1.301%。黃穎楨等［27］在研究仙草最佳采收期時(shí)采用了硝酸鋁顯色法，結(jié)果測(cè)得仙草總黃酮的含量為13.83%。馮國(guó)金等［28］采用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定仙草中槲皮素含量，其色譜條件為：Ultimate XB-C18色譜柱（5 μm，4.6 mm×250 mm），乙腈∶水 ∶磷酸（45∶55∶0.4）為流動(dòng)相，流速為1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為360 nm，柱溫為25℃，在此條件下可測(cè)得其槲皮素含量為0.181 3 mg·g-1。該方法簡(jiǎn)單易行、準(zhǔn)確、穩(wěn)定，可作為仙草中槲皮素的含量測(cè)定方法，為仙草的質(zhì)量控制與評(píng)價(jià)奠定了基礎(chǔ)。

3.3三萜類據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，仙草中三萜類成分熊果酸和齊墩果酸具有降溫、鎮(zhèn)靜、降血糖的藥理作用［29］，是仙草中的重要化學(xué)成分。劉碧容［30］采用HPLC法測(cè)定了仙草中熊果酸的含量在3.91l～3.915 mg·g-1之間。陳豐連等［31］在劉碧容的研究基礎(chǔ)上建立了同時(shí)測(cè)定仙草中熊果酸和齊墩果酸的高效液相色譜方法，結(jié)果比只測(cè)熊果酸的含量的方法較優(yōu)，并且考察了不同溶劑和超聲提取時(shí)間等因素，得出用甲醇超聲提取30 min時(shí)其提取率最高，認(rèn)為該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、可行，可應(yīng)用于仙草的質(zhì)量控制與評(píng)價(jià)。冷桂華［32］采用反相高效液相色譜法對(duì)仙草的熊果酸與齊墩果酸進(jìn)行測(cè)定，其含量分別為0.229 49%和0.085 16%。

3.4酚類仙草中含有多種酚類化合物，其中咖啡酸含量最高［33］。現(xiàn)代藥理學(xué)研究［3］結(jié)果表明，咖啡酸具有抗菌、凝血、抗氧化等多種藥理作用。馮濤等［34］研究了仙草中總多酚的提取工藝，建立了高效液相色譜法，并測(cè)定出咖啡酸的含量為0.028%。王玉［9］隨之參考馮濤等［34］的高效液相色譜法，最終確定為乙腈—0.5%冰乙酸水溶液（12∶88），測(cè)得咖啡酸含量的范圍0.239 9 mg·g-1～0.636 5 mg·g-1，該方法簡(jiǎn)單穩(wěn)定、可靠，可適用于仙草的質(zhì)量控制與評(píng)價(jià)。

4　指紋圖譜研究

HPLC指紋圖譜是中藥指紋圖譜（fingerprinting）最早發(fā)展起來的中藥化學(xué)成分色譜指紋圖譜，具有高分離度，能全局性和特征性地展現(xiàn)中藥復(fù)雜的化學(xué)成分［35-36］。丁婕等［37］采用HPLC法，考察了多種因素，最終選用Dikma Diamonsil（2）C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈—2%甲酸，梯度洗脫，柱溫25℃，以咖啡酸為對(duì)照品，測(cè)定了34批仙草藥材并建立了其特征指紋圖譜。章懷奮等［38］建立了不同月份及不同采收時(shí)間仙草的高效液相指紋圖譜。韋智靈等［39］對(duì)仙草的水溶性成分進(jìn)行了指紋圖譜研究，選用Kromasil C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），色譜條件以乙腈—0.1%甲酸溶液流動(dòng)相，梯度洗脫，在流速為1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm，柱溫25℃的條件下，確定共有峰11個(gè)并指認(rèn)5個(gè)，為仙草的質(zhì)量控制與評(píng)價(jià)提供了依據(jù)。

5　有害物質(zhì)檢查

中藥材有害物質(zhì)檢查包括重金屬、微生物、農(nóng)藥殘留等，是控制中藥質(zhì)量的手段之一。王玉等［40］采用電感耦合等離子體質(zhì)譜法（ICP-MS）檢測(cè)了仙草中銅、砷、鉻等7種重金屬元素且含量均符合綠茶標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBWl0052的參考值，該方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、快速，可用于其質(zhì)量控制。周偉明等［41］同樣采用了這種方法檢測(cè)了鋁、鈣、銀等22種元素，再次驗(yàn)證了該方法準(zhǔn)確、快速，為仙草重金屬檢測(cè)提供方法學(xué)參考。韋榮昌等［42］根據(jù)《藥用植物及制劑外經(jīng)貿(mào)綠色行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)》檢測(cè)了重金屬的含量、農(nóng)藥殘留量，結(jié)果均符合該標(biāo)準(zhǔn)。

6　采收期研究

中藥材的采收期是直接影響其質(zhì)量的關(guān)鍵因素之一，適時(shí)采收藥材就顯得尤為重要［43-44］。傳統(tǒng)意義上，仙草在9月份顯花期前采收時(shí)仙草的生物產(chǎn)量較高。黃穎楨等［27］考察了生物產(chǎn)量與化學(xué)成分含量，對(duì)仙草中多糖和總黃酮的動(dòng)態(tài)積累進(jìn)行研究，結(jié)果顯示8月下旬其單株總多糖和總黃酮含量達(dá)到最高峰，分別為1.96%、13.83%，進(jìn)而確定仙草的最佳采收期為8月下旬，這對(duì)仙草的采收加工具有指導(dǎo)意義。章懷奮等［38］以咖啡酸為對(duì)照，采用高效液相色譜方法確定了仙草的采收月份為9～10月，采收時(shí)間約為午后16∶00，為仙草的生產(chǎn)及質(zhì)量控制研究提供了依據(jù)。

7　展望

仙草為藥食兩用的重要植物資源，可根據(jù)不同的加工方法進(jìn)行加工，制成的涼粉、涼茶等多種可食用保健品已得到人們的青睞。近年來，廣大科研工作者在仙草研究的各個(gè)方面都有所涉及，包括仙草的性狀鑒別、顯微鑒別，這些研究為仙草的質(zhì)量控制奠定了一定的基礎(chǔ)，然而對(duì)仙草的質(zhì)量評(píng)價(jià)及控制方面缺乏系統(tǒng)的研究。從已有的文獻(xiàn)報(bào)道來看，在仙草的有效成分研究方面主要是對(duì)仙草多糖、槲皮素、齊墩果酸、熊果酸、咖啡酸等成分進(jìn)行含量測(cè)定，有一部分僅僅只是測(cè)定了單一地區(qū)仙草有效成分的含量，關(guān)于仙草指紋圖譜的研究也相對(duì)較少，對(duì)于采用哪個(gè)或哪幾個(gè)有效成分作為仙草質(zhì)量控制含量測(cè)定的指標(biāo)目前卻鮮有報(bào)道，這些方面都亟待深入，以期為仙草的質(zhì)量控制提供依據(jù)，確保仙草的用藥安全性和有效性。

通過對(duì)仙草的質(zhì)量控制研究現(xiàn)狀的綜述，發(fā)現(xiàn)雖然仙草在多方面已有研究，但是對(duì)于其質(zhì)量控制研究仍相對(duì)較少。今后可以參考已有的研究進(jìn)行系統(tǒng)性的深入探索，建立一套科學(xué)的、實(shí)用的仙草質(zhì)量評(píng)價(jià)體系。同時(shí)，隨著現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)逐漸應(yīng)用到中藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)與控制，仙草的質(zhì)量評(píng)價(jià)與控制也將會(huì)有大的進(jìn)展與突破。

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【責(zé)任編輯：賀小英】

R284.1

A

1007-3213（2016）05-0755-04

10．13359/j．cnki．gzxbtcm．2016．05．033

2016-03-07

李博（1990-），男，在讀碩士研究生；E-mail:494051952@qq.com

張壽文（1971-），男，教授；E-mail:hem220@163.com