組織細胞pH值測量方法研究進展

吳佩琪　梁長虹*

分子成像

組織細胞pH值測量方法研究進展

吳佩琪1，2梁長虹2*

組織細胞中的氫離子濃度是機體的一個重要體液參數(shù)，與組織細胞的功能密切相關(guān)。因此，準確測定組織細胞內(nèi)外的pH值，對反映組織細胞的功能狀態(tài)十分重要，對疾病的早期診斷和治療意義重大。常用的幾種可測定組織細胞pH值的方法包括MRI法、微電極法和熒光光譜法，就各種方法的原理及其優(yōu)缺點進行分析，同時介紹其研究和應(yīng)用進展情況，旨在為相關(guān)的實驗研究提供一定的參考。

pH值測量；磁共振波譜；化學交換飽和轉(zhuǎn)移技術(shù)；酰胺質(zhì)子轉(zhuǎn)移技術(shù)；微電極；熒光光譜

Int J Med Radiol，2016，39（4）：410-415

病理狀態(tài)下，組織細胞內(nèi)外常發(fā)生酸堿失衡，因此監(jiān)測病變部位的pH值的大小和變化趨勢可一定程度上揭示組織細胞的生理和病理情況，為疾病的早期診斷及治療提供重要的信息［1］。正常組織細胞和病變組織細胞之間在藥物吸收、釋放、分布、代謝等方面都可能存在很大差異，準確、客觀地揭示這種差異對設(shè)計靶向藥物和個性化藥物治療方案非常有利［2］。如何進行細胞內(nèi)外pH值的準確測定，尤其活體測定是研究的熱點。

1　組織細胞pH值及其臨床意義

氫離子濃度是指溶液中氫離子總數(shù)和總物質(zhì)的量的比［3］。Sorensen于1909年提出，以氫離子濃度的常用對數(shù)的負值代替氫離子濃度來作為溶液酸堿度的簡明指標，定義為氫離子濃度指數(shù)（potential of hydrogen，pH），由公式pH=-lg［H+］計算。生物體內(nèi)含有大量液體稱體液，pH值是一個重要的體液參數(shù)。細胞是生物體基本的結(jié)構(gòu)和功能單位，機體的正常生理代謝有賴于細胞內(nèi)外的酸堿平衡。研究表明，細胞內(nèi)多種生命活動都受pH值的影響，例如細胞內(nèi)酶活性的調(diào)節(jié)［4］、細胞生長與分化和細胞凋亡［5］等，而某些疾病（如腫瘤、肺病）的發(fā)生則可能與細胞質(zhì)或者酸性細胞器（如溶酶體、內(nèi)涵體等）內(nèi)的pH異常有關(guān)［6］。

因此，如果可以通過某些方法記錄細胞內(nèi)外pH值的瞬時和/或連續(xù)變化，則可間接推測細胞的功能活動，對了解細胞處于正常功能和病理狀態(tài)下的變化具有重要意義。目前臨床上血氣分析和尿檢等方法可提供人體內(nèi)環(huán)境的酸堿信息，但這些方法主要是從宏觀判斷機體酸堿平衡狀況，而對于局部器官、組織及特殊部位（如大腦）的pH值變化，這些方法則無能為力。因此，研究可對細胞內(nèi)外pH值進行準確測定的方法，尤其是可在活體情況下進行測定的方法，也就成為國內(nèi)外研究者的研究熱點，具有重要的臨床意義。

2　MRI測定組織細胞pH值

MRI是目前唯一一種可無創(chuàng)地測定在體組織細胞pH值的方法，應(yīng)用前景廣闊。它主要包括磁共振波譜法（magnetic resonance spectroscopy，MRS）、化學交換飽和轉(zhuǎn)移法 （chemical exchange saturation transfer，CEST）和酰胺質(zhì)子轉(zhuǎn)移法 （amide proton transfer，APT）。

2.1MRS是一種利用核磁共振現(xiàn)象和化學位移作用進行特定原子核及其化合物定量分析的方法［7］。

2.1.1原理位于外加磁場中的人體組織內(nèi)的原子核，其共振頻率不僅取決于外加磁場強度及其本身的物理性質(zhì)，同時還受原子核在化合物中的化學環(huán)境的影響，同一種原子核（如H核）所在的化合物的化學環(huán)境不同則進動頻率就不同，產(chǎn)生的磁共振頻率也就不同，在頻譜上產(chǎn)生的共振峰也就有差別，這種現(xiàn)象就是所謂的化學位移［8］，即相同質(zhì)子在MRS中吸收信號位置不同。MRS可以利用化學位移的不同，使不同化合物可以根據(jù)其在頻譜上共振峰的不同加以區(qū)別，由于共振峰的面積與共振核的數(shù)目成正比，從而能夠反映化合物的濃度變化。

目前MRS法測定組織細胞pH值時，使用的探針包括31P、19F和1H探針。19F具有較好的化學位移分散，因此關(guān)于pH敏感19F化合物的研究也得到了較大的發(fā)展［9］，但由于氟化物穩(wěn)定性較差且常常具有毒性，因此目前仍多用于離體實驗或動物實驗［10］。1H-MRS是最早應(yīng)用于臨床的MRS，在應(yīng)用于臨床方面有其獨特優(yōu)勢，Cerdan Ballesteros首先采用咪唑乙氧羰基丙酸作為pH敏感的1H探針，這種外源性1H探針無毒、非滲透，較19F化合物安全，但該法空間分辨力較低，敏感性也有待提高［11］。19F和1H探針在測定組織細胞pH值方面的應(yīng)用遠不及31P探針，就31P-MRS在測定組織細胞pH值中的應(yīng)用加以介紹。

31P-MRS是最早被發(fā)現(xiàn)可用于測定組織細胞內(nèi)pH值（intracellular pH，pHi）的探針，其基本原理為：在施加外加磁場后，細胞內(nèi)的無機磷庫中31P的頻譜發(fā)生依賴于pH值變化的化學位移，根據(jù)代謝物的MR波譜中無機磷和磷酸肌酸的位置可以計算出兩者的化學位移差，參考標準曲線，即可計算出該體素的pH值［12］。

2.1.2優(yōu)缺點

2.1.2.1優(yōu)點①具有無創(chuàng)性，對細胞結(jié)構(gòu)無損傷、對細胞代謝功能無影響，避免了損傷導致的pH值改變，可用于活體實驗。②測量精確度較高，可精確到0.06個pH單位［13］。③可重復性好，儀器可重復用于在體組織細胞的pH值測定。④操作較為簡便，設(shè)定好MR設(shè)備的序列參數(shù)即可開始測量。⑤可同時獲得細胞內(nèi)其他多種含磷化合物 （ATP、磷酸肌酸等）的信息，還可檢測細胞內(nèi)糖酵解途徑的活性和細胞能態(tài)等方面的信息［7］。

2.1.2.2缺點①時間分辨力較低，實驗室必須注意維持組織細胞長時間穩(wěn)定的生理狀態(tài)，方可測得較為準確的組織細胞pH值［14］。②空間分辨力較低，由于該法的細胞敏感性低，需要較高的細胞濃度，對單細胞pH值的測定困難；并且當細胞內(nèi)pH值偏堿性時，會對測定結(jié)果的準確性產(chǎn)生較大影響，因此該法更適合研究細胞群體或部分器官或組織的pH值［15］。③MR設(shè)備體積龐大，須特定條件方能安裝設(shè)備，不太適合普通實驗室的常規(guī)使用。

2.1.3研究進展MRS不僅可以測定組織細胞pH值，還有助于理解能量代謝、代謝的調(diào)控及疾病對能量代謝的影響方式［7］。對于人體中能量代謝十分旺盛的細胞，如骨骼肌細胞等，MRS的無創(chuàng)、可同時檢測多種代謝產(chǎn)物的優(yōu)勢極為顯著。Schmid等［16］在7 T MRI上對正常人運動過程中腓腸肌細胞的pH值以及氧化磷酸化相關(guān)物質(zhì)和進行了測量，得出了兩者的相關(guān)關(guān)系曲線，為可能導致骨骼肌代謝受損的疾病如糖尿病和周圍性血管疾病等的影像診斷提供了參考依據(jù)。MRS對組織的pH測量可為發(fā)現(xiàn)缺血、腫瘤病灶提供參考，Matsuo等［17］利用該法對腫瘤的放化療療效進行評價，并認為該法是一種理想的無創(chuàng)性影像方法，對腫瘤組織內(nèi)pH值、pO2在治療前后的變化等的測量結(jié)果較為精確，應(yīng)用前景廣闊。31P-MRS已逐漸由化學和生物學領(lǐng)域向動物實驗、臨床活體生理及病理狀態(tài)下物質(zhì)代謝和能量反應(yīng)研究階段邁進，已成為臨床影像醫(yī)學研究的重要方法。

2.2CEST法CEST成像技術(shù)是一種對pH值變化敏感的新型MRI技術(shù)，是常規(guī)磁化轉(zhuǎn)移（magnetic transfer，MT）成像技術(shù)的一種，主要通過采集氫原子信號成像。

2.2.1原理人體多數(shù)組織中自由水與結(jié)合水以一定的比例存在，并不斷交換，而自由水與結(jié)合水的磁化性質(zhì)不同，這種轉(zhuǎn)化稱MT?；瘜W交換在分子世界中普遍存在，如化學鍵的旋轉(zhuǎn)、構(gòu)象的轉(zhuǎn)換和氫交換等。小分子溶液的磁化轉(zhuǎn)移現(xiàn)象時觀察到靠近水的共振頻率Z譜的不對稱性，并將之命名為CEST［18］。

根據(jù)所處化學環(huán)境的不同將組織中的氫質(zhì)子分為3種：一是可移動的自由水中的質(zhì)子（又稱自由池）；二是與蛋白質(zhì)等大分子結(jié)合的、受到束縛的質(zhì)子（又稱結(jié)合池）；三是內(nèi)源性或外源性的某些游離大分子（如胺基、酰胺基等）上的質(zhì)子（又稱特定分子池）。這3類氫質(zhì)子由于其所處化學環(huán)境的不同，導致它們雖然處于同一主磁場中，但各自擁有不同的進動頻率。CEST主要研究的是特定分子池與自由池的化學交換效應(yīng)。在MR設(shè)備中施加一個選擇性偏置射頻脈沖，選擇性地飽和某個特殊共振頻率的氫質(zhì)子信號（即某種特定大分子），在適當?shù)沫h(huán)境下（適宜溫度、pH范圍），這些特定分子池中的氫質(zhì)子會和周圍自由水中的氫質(zhì)子發(fā)生化學交換，進而將部分飽和轉(zhuǎn)移到自由水中的氫質(zhì)子上，通過采集水信號即可體現(xiàn)出CEST效應(yīng)的強弱。質(zhì)子的化學交換速率與質(zhì)子周圍的環(huán)境（溫度、pH值）密切相關(guān)，進行相應(yīng)的運算即可得出pH值，最終獲得組織pH值的高分辨空間和/或時間分布圖。

2.2.2優(yōu)缺點

2.2.2.1優(yōu)點①無創(chuàng)性?？刹皇褂猛庠葱詫Ρ葎苊饬藢Ρ葎淼母鞣N不良反應(yīng)，可自然地反映組織本征的生理或病理信息，從而用于活體實驗。②空間分辨力良好，可提供高分辨力的組織細胞pH值空間分布信息。③敏感性及特異性非常高，多種分子探針可進行特定生理或病理組織成像，濃度可達納摩爾級別［20］。④可獲得細胞內(nèi)、外的pH值，測定細胞內(nèi)pH值主要依賴酰胺質(zhì)子轉(zhuǎn)移成像技術(shù)，而對細胞外pH值的測定則需要注入CEST成像對比劑［19］。⑤操作較為簡便。設(shè)定好MR設(shè)備的序列參數(shù)即可開始測量，并且預飽和射頻脈沖可以根據(jù)需要隨時開關(guān)，不對其他成像序列產(chǎn)生影響。⑥可重復性好。儀器可重復使用，且組織細胞不受侵害。

2.2.2.2缺點①時間分辨力較低。實驗室必須注意維持組織細胞長時間穩(wěn)定的生理狀態(tài)，方可測得較為準確的組織細胞pH值。②對單細胞pH值的測定困難。由于該法的細胞敏感性低，需要較高的細胞濃度，并且當細胞內(nèi)pH值偏堿性時會對測定結(jié)果的準確性產(chǎn)生較大影響，因此該法更適合研究細胞群體或部分器官或組織的pH值［20］。③MR設(shè)備安裝和使用受條件限制。④對比劑安全性問題。進行細胞外pH成像時須引用外源性對比劑，而后者大部分含有斕族元素［21］，其安全性尚未完全得到驗證，故一般不能用于活體研究。

2.2.3研究進展作為一種較新的MRI技術(shù)，研究者們?nèi)栽诓粩鄬嶒灒D使該法的測量更為準確，更適于臨床應(yīng)用。Liu等［22］設(shè)計的新的高通量MR方法，大大減輕了磁化率所受的影響，提高了細胞內(nèi)外pH值測量的準確性。不僅可進行pH成像，還可以進行代謝物（如多糖、多肽等）成像［23］。因腫瘤灶內(nèi)常常有細胞缺血壞死，并且腫瘤細胞的代謝與正常細胞不同，pH值也有所不同，因此該法對腫瘤早期檢出有重要意義。而這一進展主要得益于CEST對比劑的開發(fā)和應(yīng)用，早期使用小分子（如糖類、氨基酸類等）合成的CEST，稱反磁性CEST對比劑，后發(fā)展為使用鑭族元素合成的CEST對比劑，稱順磁性CEST對比劑［24-25］。這也為腦卒中的診斷和治療效果評價等提供了一種新的診斷技術(shù)［26］。獲得pH值的絕對定量信息，尤其是獲取腦部pH定量CEST圖，是該技術(shù)的發(fā)展趨勢，這將促使該技術(shù)更廣泛地應(yīng)用于臨床。

2.3APT法APT成像技術(shù)是CEST成像技術(shù)的一個分支。

2.3.1原理人體內(nèi)的蛋白質(zhì)含有各種特殊基團，如羥基、胺基、亞胺基、酰胺基等，在CEST成像中，如果選擇游離蛋白質(zhì)及多肽鏈上的酰胺質(zhì)子作為選擇性偏置射頻脈沖的飽和目標時，此時便可稱為APT成像技術(shù)。受到射頻脈沖飽和的酰胺質(zhì)子與水中的氫質(zhì)子不斷進行化學交換，水中氫質(zhì)子部分飽和，導致水成像信號下降，通過采集自由水飽和前與飽和后信號的改變，間接獲得酰胺質(zhì)子的交換速率，進而計算可得出pH值，最終獲得組織pH值的高分辨空間（及/或時間）分布圖。

2.3.2優(yōu)缺點由于APT成像技術(shù)是CEST成像技術(shù)的一個分支，其優(yōu)缺點與CEST法類似，故簡要描述。

2.3.2.1優(yōu)點①可無創(chuàng)性對組織的生理環(huán)境進行評估，可用于活體實驗。②空間分辨力良好。③敏感性及特異性較高。④可獲得高分辨力的活體蛋白質(zhì)和多肽的濃度等信息，更加符合臨床診斷的需要［28］。⑤操作較為簡便。⑥可重復性好。⑦一般不引入外源性對比劑，無對比劑安全性的擔憂。

2.3.2.2缺點①時間分辨力較低。②對單細胞pH值的測定困難。③不太適合普通實驗室的常規(guī)使用。

2.3.3研究進展APT法作為一種可安全應(yīng)用于人體的理想手段，并且可探測某些組織細胞內(nèi)蛋白質(zhì)含量的變化，其在臨床上的研究和應(yīng)用日益廣泛。目前，該法已廣泛地應(yīng)用于對腦卒中的研究［29］，并且，Harston等［30］的研究認為，相較于普通的T1、T2加權(quán)影像以及DWI，APT成像對缺血半暗帶的敏感性更高，可作為缺血半暗帶的代謝標記圖。該法也逐漸開始應(yīng)用于阿爾茨海默病的研究，Wang等［31］研究發(fā)現(xiàn)，阿爾茨海默病病人的雙側(cè)海馬區(qū)磁化轉(zhuǎn)移率（在3.5ppm處，ppm表示10-6）的不對稱性明顯高于正常人，提示APT成像極有可能成為該病的具有生物影像標記意義的無創(chuàng)性影像檢查方法?？傊?，APT成像技術(shù)是一種臨床應(yīng)用前景十分廣闊的pH測量技術(shù)。

3　其他方法

3.1微電極法微電極是指電極尖端長為幾微米至幾百微米且直徑在0.25～5.00 μm范圍內(nèi)的電極，但用于細胞外測定時，尖端直徑為幾百微米者也可叫作微電極。微電極法測量pH值是通過將微電極直接刺入待檢測組織或細胞中進行pH值的測量。

3.1.1原理pH敏感型玻璃微電極主要由玻璃微吸管、微參比電極和pH值敏感電極（內(nèi)含氫離子交換劑）組成。微參比電極與氫離子交換電極共同構(gòu)成測量電池。用于細胞內(nèi)、外pH值測定的微參比電極尖端直徑分別為1～3 μm、50～100 μm。測定細胞內(nèi)pH值時，將微電極插入待測細胞內(nèi)，然后讀取兩電極間的電位差數(shù)值，經(jīng)過相應(yīng)的計算后即可得出所測pH值。

3.1.2優(yōu)缺點

3.1.2.1優(yōu)點①測量精確度較高，可精確到0.02～0.05個pH單位，并且校準比較簡單。②時間分辨力高，既可反映pH的瞬時變化，又可持續(xù)監(jiān)測細胞內(nèi)pH值變化。③可同時記錄細胞膜電位的改變，提供細胞功能的其他信息［32］。④微電極體積較小，較適合實驗室的常規(guī)使用。

3.1.2.2缺點①具有有創(chuàng)性。微電極必須插入組織或細胞中才能實現(xiàn)對細胞外液或細胞內(nèi)液中pH值的測量，必然造成組織或細胞的損傷，限制了其臨床應(yīng)用。②測量誤差來源多，穿刺時微電極易被堵塞導致細胞液無法與pH敏感電極充分接觸；穿刺損傷導致細胞液滲漏，細胞內(nèi)、外液混合導致pH值改變；灰塵、油污或細胞膜物質(zhì)等附著于微電極的活性表面導致pH敏感電極的敏感性降低。③重復使用率低。使用過程中氫離子交換劑不斷逸失，電極功能衰退較快，因此平均工作壽命短，在一次實驗過程中往往需要使用數(shù)個電極［33］。④技術(shù)操作難度大。測量細胞內(nèi)pH值時必須保證微電極的活性表面僅與細胞內(nèi)部液體接觸，同時要避免受到細胞外液影響；操作時要借助顯微鏡進行觀察，對操作者的操作水平也有較高的要求；受微電極尖端直徑的限制，待測細胞的胞徑也不能過??；由于操作復雜，所需時間較長，因此無法實現(xiàn)細胞內(nèi)多個位點的pH值測定。

3.1.3研究進展微電極的發(fā)展主要依賴于其制作材料的發(fā)展，隨著制作材料的不斷改進，諸如鈉、鉀、鈣離子敏感玻璃微電極等pH測量微電極以外的微電極也逐漸被開發(fā)出來，有的微電極同時整合了多種測量功能，大大方便了基礎(chǔ)和臨床研究，并拓展了其在生物學研究中的應(yīng)用。微電極為研究鈉、鉀、鈣等離子在細胞內(nèi)外的濃度及其與pH值的相互關(guān)系、細胞內(nèi)外離子跨膜轉(zhuǎn)運的機制［34］等提供了有效手段。微電極的發(fā)展還衍生出了神經(jīng)細胞電生理技術(shù)［35］，為研究者在神經(jīng)細胞的研究提供了一大助力。目前，微電極的應(yīng)用多集中于實驗室，在臨床方面的應(yīng)用有待發(fā)展。

3.2熒光光譜法熒光光譜分析是根據(jù)物質(zhì)的熒光譜線的性質(zhì)及其強度進行物質(zhì)鑒定和含量測定的方法。

3.2.1原理熒光染料一般通過擴散進入細胞，在細胞內(nèi)發(fā)生水解等改變后生成熒光素分子，熒光素分子能夠吸收一定波長的光子并躍遷入激發(fā)態(tài)，之后能量會以較長波長的光發(fā)散出來，熒光素分子與質(zhì)子發(fā)生作用后引起熒光的變化，因此熒光的強度與隨著細胞內(nèi)的pH值的變化而變化。采用特定的儀器（如激光共聚焦顯微鏡）檢測細胞內(nèi)的熒光強度，再參照校準曲線，即可得出被測細胞內(nèi)的pH值［36］。

3.2.2優(yōu)缺點

3.2.2.1優(yōu)點①測量精確度高，可精確到0.01個pH單位。②空間分辨率高，具有200 nm的空間精確度，因此能夠給出細胞內(nèi)pH值的二維甚至三維地圖。③時間分辨率高，具有毫秒級的時間精確度，可實時監(jiān)測細胞內(nèi)多個位點的pH值變化［6］。④技術(shù)操作較簡單，該法不受細胞濃度和大小的限制，操作相對簡單，重復性較好。⑤可以測定數(shù)個細胞或大量細胞的pH值。⑥較適合實驗室的常規(guī)使用。

3.2.2.2缺點①盡管此法不像微電極法那樣對組織或細胞造成直接的穿刺損傷，但染料與細胞分子的螯合反應(yīng)還是會改變細胞的原本結(jié)構(gòu)，處理不慎還可能污染細胞；另外，部分熒光染料產(chǎn)生紫外區(qū)的熒光，會損傷活體樣品［37］。②測量存在一定的誤差，原因與染料種類、濃度和實驗條件（溫度和時間等）密切相關(guān)，必須根據(jù)被測組織細胞的不同及時調(diào)整前述參數(shù)；并且根據(jù)測定熒光強度的儀器的不同，須采用不同的校準曲線［38］。③不能用于細胞膜電位的測定。

3.2.3研究進展熒光光譜法的進展主要依賴于熒光染料（又稱熒光探針）的開發(fā)［37］，早期羧化半萘羅丹明類熒光染料等應(yīng)用較為廣泛［6］，隨后碳菁型pH熒光探針等更新的熒光探針不斷被開發(fā)出來［39］，使得該法的組織細胞pH成像更加清晰。然而，用于檢測細胞內(nèi)酸性器官（如溶酶體、內(nèi)涵體等）的理想的pH探針目前幾乎沒有，因此影響了該法在生物醫(yī)學應(yīng)用上的發(fā)展。

4　小結(jié)

MRI因其無創(chuàng)性及可獲取組織細胞其他代謝活動信息的優(yōu)勢，迅速而廣泛地應(yīng)用于臨床，為疾病的診斷和療效評價等做出了突出的貢獻。從最早可測定組織細胞內(nèi)pH值的31P-MRS，到后來興起的CEST成像技術(shù)及其分支APT成像技術(shù)，因此結(jié)合了物理學、化學和生物學的MRI技術(shù)當之無愧地成為目前生物醫(yī)學和臨床醫(yī)學領(lǐng)域最受矚目的技術(shù)方法，前景廣闊［40］。雖然微電極法和熒光光譜法測量pH值在臨床上的應(yīng)用遠不如MRI法，但相對于依賴MR設(shè)備等硬件設(shè)施的MRI法，這兩種方法在普通實驗室的應(yīng)用卻更為廣泛，并且在研究單細胞等方面擁有特殊優(yōu)勢。

總之，準確測定組織細胞內(nèi)外pH值具有重要意義，尤其是在活體情況下進行的測定。本文所介紹的這些測量方法各有其優(yōu)缺點，進行相關(guān)實驗時，研究者要熟悉所選方法的原理，選擇合適的技術(shù)方法，并且在實驗過程中注意揚長避短，以幫助實驗的順利進行。

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（收稿2015-09-09）

Research progress in methods of pH measurement in tissue cells

WU Peiqi1，2，LIANG Changhong2.1 Southern Medical University，Guangzhou 510515，China；2 Guangdong General Hospital，Guangdong Academy of Medical Sciences

As an important parameter of body fluid，the hydrogen-ion concentration closely related to the function of tissue cells.Thus accurately measuring the pH，inside or outside cells，is very important for early diagnosis and treatment. The most commonly used methods which can measure the pH of tissue cells include magnetic resonance，microelectrodes，and fluorescence spectrometry.We summarized the principle，advantages and disadvantages for each method，and introduced the research and application progress，aiming to provide some references for related experimental study.

PH measurement；Magnetic resonance spectroscopy；Chemical exchange saturation transfer；Amide proton transfer；Microelectrodes；Fluorescence spectrometry

國家自然科學基金（81271654），NSFC-廣東聯(lián)合基金（U1301258）

10.19300/j.2016.Z3717

R445.2

A

1南方醫(yī)科大學，廣州 510515；2廣東省人民醫(yī)院 廣東省醫(yī)學科學院

梁長虹，E-mail：cjr.lchh@vip.163.com

*審校者