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    血清和糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)激酶1 rs2811681和rs2758152與自然流產(chǎn)的關(guān)系

    2016-03-06 11:04:50何淑貞蒲育棟曹金如陳壽云鄧漢釗周玉玲
    海南醫(yī)學(xué) 2016年11期
    關(guān)鍵詞:激酶等位基因基因型

    何淑貞,蒲育棟,曹金如,陳壽云,鄧漢釗,周玉玲

    (東莞市第三人民醫(yī)院產(chǎn)前診斷中心,廣東 東莞 523326)

    血清和糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)激酶1 rs2811681和rs2758152與自然流產(chǎn)的關(guān)系

    何淑貞,蒲育棟,曹金如,陳壽云,鄧漢釗,周玉玲

    (東莞市第三人民醫(yī)院產(chǎn)前診斷中心,廣東 東莞 523326)

    目的 探討血清和糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)激酶1(SGK1)rs2811681和rs2758152與自然流產(chǎn)之間的關(guān)系。方法選取2013年1~12月我院64例自然流產(chǎn)患者作為病例組,同期40例人工流產(chǎn)患者作為對(duì)照組,采用3730XL測(cè)序儀檢測(cè)血清SGK1 rs2811681和rs2758152基因多態(tài)性,χ2檢驗(yàn)比較病例組與對(duì)照組基因型及等位基因頻率分布。結(jié)果①SGK1-rs2811681對(duì)照組基因型是AG+GG,而病例組以AG+GG為主,其次是AA,兩組基因型分布比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);對(duì)照組等位基因A和G頻率各占50.0%,而病例組A占64.8%,G占35.2%,對(duì)照組和病例組等位基因頻率比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),②SGK1-rs2758152對(duì)照組基因型GT+TT和GG各占50.0%,而病例組GT+TT占29.7%,GG占70.3%;等位基因頻率對(duì)照組G占75.0%,T占25.0%,而病例組G占82.0%,T占18.0%。對(duì)照組和病例組基因型及等位基因頻率比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論SGK1 rs2811681與自然流產(chǎn)有關(guān),而SGK1 rs2758152與自然流產(chǎn)無關(guān)。

    血清和糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)激酶1;自然流產(chǎn);基因多態(tài)性;相關(guān)性

    自然流產(chǎn)多發(fā)生在妊娠12周以內(nèi),該病的病因十分復(fù)雜,50%~60%的自然流產(chǎn)與胚胎染色體異常有關(guān)[1]。近幾年的研究表明[2-4],血清和糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)激酶1 (SGK1)具有廣泛的生理功能,其表達(dá)及活性增加參與了多種疾病病理過程的發(fā)生、發(fā)展。Salker等[5]的研究表明,患有原因不明性不孕癥婦女的子宮內(nèi)膜中血清和糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)激酶1(SGK1)含量較正常孕婦高,而習(xí)慣性流產(chǎn)者的SGK1含量則較正常孕婦低。本研究旨在探討SGK1 rs2811681和rs2758152與自然流產(chǎn)的關(guān)系,進(jìn)一步闡明自然流產(chǎn)的分子生物學(xué)機(jī)制,以便為更好的尋找自然流產(chǎn)的病因提供借鑒依據(jù)。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 選擇2013年1~12月期間在我院就診的自然流產(chǎn)患者作為病例組,年齡19~40歲,平均(29.6±4.3)歲。納入對(duì)象無染色體因素、解剖因素、感染因素、內(nèi)分泌因素、抗磷脂綜合征及血管栓塞性疾病等。所有研究對(duì)象均未生育過小孩。選擇同期進(jìn)行人工流產(chǎn)的患者作為對(duì)照組,年齡19~36歲,平均(28.0±4.5)歲。兩組間的年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t= 1.889,P=0.062)。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn),所有對(duì)象均簽署知情同意書。

    1.2 研究方法

    1.2.1 標(biāo)本采集和抽提 收集所有對(duì)象的一般臨床資料,同時(shí)采集2 mL EDTA抗凝血,-80℃冰箱保存,用于提取DNA。按DNA提取試劑盒(Axygen)說明書要求進(jìn)行操作,從全血標(biāo)本中提取基因組DNA。

    1.2.2 主要試劑和儀器 外周血基因組DNA抽提試劑盒、Taq DNA聚合酶、DNA Marker均購自上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司,引物由該公司合成。PRISM 3730序列分析儀購自美國ABI公司。

    1.2.3 引物設(shè)計(jì)與合成 通過NCBI基因序列數(shù)據(jù)庫獲得SGK1基因rs2811681 G/A和rs2758152 G/T核苷酸序列,并用Primer 5.0設(shè)計(jì)引物序列如下:上游引物3'-AGCCGGCATCAATCTTTAAT-5',下游引物3'-GCAAAAGCACCCTGTAGGC-5',擴(kuò)增產(chǎn)物長度是700 bp。

    1.2.4 PCR擴(kuò)增 采用20μL PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系,含1μL模板DNA,上下游引物各1μL,2μLdNTP,0.2μL Taq聚合酶,2μL反應(yīng)緩沖液,0.6μL Mg2+,12.2μL雙蒸水。PCR反應(yīng)條件:先于95℃預(yù)變性2 min,94℃30 s,59℃1 min 30 s,72℃1 min 30 s,40個(gè)循環(huán)后,72℃延伸10 min。將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物使用美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司3730XL測(cè)序儀測(cè)序。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,數(shù)據(jù)用頻數(shù)和構(gòu)成比表示。Hardy-Weinberg平衡用于檢測(cè)各基因型分布,χ2檢驗(yàn)用于比較病例組與對(duì)照組基因型及等位基因頻率,以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié) 果

    2.1 rs2811681基因型及等位基因分布 對(duì)照組基因型是AG+GG,而病例組以AG+GG為主,其次是AA,對(duì)照組和病例組基因型比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;對(duì)照組等位基因A和G頻率各占50.0%,而病例組A占64.8%,G占35.2%,對(duì)照組和病例組等位基因頻率比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,見表1。

    2.2 rs2758152基因型及等位基因分布 rs2758152對(duì)照組基因型GT+TT和GG各占50.0%,而病例組GT+TT占29.7%,GG占70.3%,兩組間基因型比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。等位基因頻率對(duì)照組G占75.0%,T占25.0%;而病例組G占82.0%,T占18.0%,兩組間等位基因頻率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,見表2。

    表1 SGK1-rs2811681與流產(chǎn)的關(guān)系[例(%)]

    表2 SGK1-rs2758152與流產(chǎn)的關(guān)系[例(%)]

    3 討 論

    自然流產(chǎn)是妊娠期常見的并發(fā)癥之一[6],其病因復(fù)雜,分子機(jī)理眾多。SGK1是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,在人和小鼠子宮內(nèi)膜孕酮水平上升時(shí),它會(huì)迅速進(jìn)行響應(yīng)。人SGK1基因位于6q23,包含12個(gè)外顯子,約長5.5 kb。近幾年的研究表明,SGK1與代謝綜合征、子癇前期等疾病密切相關(guān)[7-8]。有研究報(bào)道,SGKl對(duì)于建立子宮內(nèi)膜容受性和維持妊娠有著重要的作用[5]。

    本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),SGK1 rs2811681基因型由對(duì)照組的AG+GG轉(zhuǎn)變?yōu)椴±M的AA、AG+GG,由OR值2.111可知,AA基因型是引起流產(chǎn)的危險(xiǎn)因素,孕婦AA基因型越多,則越容易發(fā)生流產(chǎn)。而等位基因頻率也由對(duì)照組A和G各占50.0%,轉(zhuǎn)變?yōu)椴±MA占64.8%,G占35.2%,由OR值0.542可知,等位基因G是保護(hù)性因素,如果G突變?yōu)锳,則流產(chǎn)發(fā)生的概率將會(huì)增加。SGK1 rs2758152基因型和等位基因頻率對(duì)照組與病例組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,表明SGK1 rs2758152與自然流產(chǎn)無關(guān)。

    本研究所發(fā)現(xiàn)的上述變化,考慮可能是由于SGK1 rs2811681的等位基因G突變?yōu)锳,導(dǎo)致SGK1磷酸化后被激活,通過磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷脂酰肌醇三磷酸(PIP3)、三磷酸肌醇依賴性蛋白激酶1和2(PDK1和PDK2)信號(hào)通路發(fā)揮其生理作用;也可能是SGK1磷酸化激活泛素連接酶Nedd4-2,促使其降解,從而導(dǎo)致一系列的生理變化。我們的標(biāo)本量較小,得出的結(jié)果尚有待今后更大樣本量去證實(shí),我們將在今后的研究中增加樣本量及相關(guān)指標(biāo),以期獲得更加準(zhǔn)確的證據(jù),為自然流產(chǎn)的研究提供借鑒依據(jù)。

    [1]Practice Committee of American Society for Reproductive Medicine. Definitions of infertility and recurrent pregnancy loss:a committee opinion[J].Fertility and Sterility,2013,99(1):63.

    [2]Wu C,Yosef N,Thalhamer T,et al.Induction of pathogenic TH17 cells by inducible salt-sensing kinase SGK1[J].Nature,2013,496 (7446):513-517.

    [3]Lang F,Shumilina E.Regulation of ion channels by the serum-and glucocorticoid-inducible kinase SGK1[J].FASEB,2013,27(1): 3-12.

    [4]張舒靜.肝纖維化大鼠SGK1的表達(dá)變化及坎地沙坦對(duì)其的影響[D].太原:山西醫(yī)科大學(xué),2011.

    [5]Salker MS,Christian M,Steel JH,et al.DereguLation of the serum and glucocorticoid-inducible kinase SGK1 in the endometrium causes reproductive failure[J].Nature Medcine,2011,17(11): 1509-1513.

    [6]路妍妍,金海燕,田耕.自然流產(chǎn)患者蛻膜組織中CXCR4的表達(dá)及意義[J].海南醫(yī)學(xué),2015,26(13):1892-1893.

    [7]潘豐慧,李平,朱大龍.SGK1與代謝綜合征[J].國際內(nèi)分泌代謝雜志,2012,32(4):267-269.

    [8]戰(zhàn)玉峰,董曉靜,張雪蕊,等.血清和糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的蛋白激酶1和缺氧在子癇前期發(fā)病作用的研究[J].重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2015, 40(10):1363-1367.

    Association of SGK1 rs2811681 and rs2758152 polymorphisms with spontaneous abortion.

    HE Shu-zhen,PU Yu-dong,CAO Jin-ru,CHEN Shou-yun,DENG Han-zhao,ZHOU Yu-ling.Prenatal Diagnosis Center,the Third People's Hospital of Dongguan City,Dongguan 523326,Guangdong,CHINA

    ObjectiveTo analyze the association of SGK1 rs2811681 and rs2758152 polymorphisms with spontaneous abortion.MethodsSixty-four cases of spontaneous abortion,who enrolled into our hospital during January 2013 to December 2013,were chosen as the case group,and 40 cases of artificial abortion were selected as a control group for the same period.Polymorphisms of SGK1 rs2811681 and rs2758152 were detected by 3730XL sequencer.Genotype and allele frequency distribution of SGK1 rs2811681 and rs2758152 in the case group and the control group were compared with χ2test.Results①rs2811681 genotype in the control group was AG+GG,while rs2811681 genotype in case group was AG+GG,followed by AA.Control group and case group have a statistically significant difference(P<0.05).Allele frequency of A and G in the control group was equally 50.0%,while allele frequency of A and T in case group were respectively 64.8%and 35.2%,with a statistically significant difference between the control group and case group(P<0.05).②rs2758152 genotype of GT+TT and GG in the control group were equally 50.0%,while rs2758152 genotype of GT+TT and GG in the case group were respectively 29.7%and 70.3%.Allele frequencies of G and T in the control group were respectively 75.0%and 25.0%,while allele frequencies of G and T in the case group were respectively 82.0%and 18.0%.Genotype and allele frequency of rs2758152 in case group and control group have no statistically significant difference(P>0.05).ConclusionSGK1 rs2811681 has a significant correlation with spontaneous abortion, while SGK1 rs2758152 has no significant correlation with spontaneous abortion.

    Serum and glucocorticoid-regulated protein kinase 1;Spontaneous abortion;Polymorphism;Correlation

    R714.21

    A

    1003—6350(2016)11—1762—03

    10.3969/j.issn.1003-6350.2016.11.013

    2016-01-05)

    廣東省科技廳社會(huì)發(fā)展領(lǐng)域科技計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào):2012B032000015)

    周玉玲。E-mail:zhouyuling88@163.com

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