九頭獅子草對(duì)小鼠的抑菌、止癢、抗炎作用

羅忠圣　周　鎂　黃秀平　秦拴梅　范菊娣　覃容貴

(貴陽(yáng)新天藥業(yè)股份有限公司藥物研究所，貴州　貴陽(yáng)　550018)

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九頭獅子草對(duì)小鼠的抑菌、止癢、抗炎作用

羅忠圣周鎂1黃秀平1秦拴梅1范菊娣1覃容貴1

(貴陽(yáng)新天藥業(yè)股份有限公司藥物研究所，貴州貴陽(yáng)550018)

〔摘要〕目的研究九頭獅子草的抑菌、止癢、抗炎作用。方法采用平皿二倍稀釋法，觀察九頭獅子草的體外抑菌作用；采用右旋糖酐致小鼠瘙癢模型、磷酸組織胺對(duì)豚鼠局部皮膚致癢耐受試驗(yàn)，觀察九頭獅子草的止癢作用；采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹模型，新鮮雞蛋清致小鼠足跖腫脹模型，觀察九頭獅子草的抗炎作用。結(jié)果九頭獅子草對(duì)金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌有不同程度的抑制作用。九頭獅子草各劑量均可明顯降低右旋糖酐所致小鼠的瘙癢次數(shù)及瘙癢持續(xù)總時(shí)間(P<0.05)，中、高劑量能顯著提高磷酸組胺所致豚鼠的致癢閾(P<0.05)。各劑量均能顯著降低二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹度(P<0.05)，提高腫脹抑制率；各劑量均能顯著降低新鮮雞蛋清所致的小鼠足跖腫脹度(P<0.05)，提高腫脹抑制率；中、高劑量能顯著降低炎性足前列腺素(PG)E2含量(P<0.05)，提高PGE2抑制率。結(jié)論九頭獅子草具有良好的抑菌、止癢、抗炎作用。

〔關(guān)鍵詞〕九頭獅子草；抑菌；抗炎；止癢

1 貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院中藥學(xué)教研室

第一作者：羅忠圣(1971-)，男，副主任藥師，主要從事中藥制藥及新藥研究。

九頭獅子草為爵床科植物九頭獅子草全草，主產(chǎn)貴州，其性味辛、涼，功用主治為祛風(fēng)、清熱、化痰、解毒，用于治療風(fēng)熱咳嗽、小兒驚風(fēng)、喉痛、疔毒、乳癰。與其他藥物配伍使用，治療肺熱咳嗽、虛熱咳嗽、小兒吐奶并泄青、男子尿結(jié)、咽喉腫痛、痔瘡、蛇咬傷、黑皰疔、婦女白帶、經(jīng)漏等〔1~3〕。在貴州黔東南地區(qū)，九頭獅子草常被世居苗族婦女習(xí)用于治療婦科泌尿系統(tǒng)感染，本文研究其抗菌、止癢、抗炎作用。

1材料與方法

1.1動(dòng)物及藥物昆明種小鼠，清潔級(jí)，雌雄各半，體質(zhì)量20~25 g；健康豚鼠，清潔級(jí)，雌雄各半，體質(zhì)量200~250 g。以上動(dòng)物均由貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SYXK(黔)2002—0001。九頭獅子草干燥藥材，購(gòu)自貴陽(yáng)市萬東藥材市場(chǎng)，經(jīng)貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院生藥教研室龍慶德副教授鑒定為正品，藥材標(biāo)本保留于貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院中藥標(biāo)本館。九頭獅子草用70%乙醇回流提取2次，每次2 h，減壓濃縮，揮干乙醇，用蒸餾水配成1.5 g/ml (含生藥量)的藥液，按需稀釋。右旋糖酐(批號(hào)：T11092204 四川科倫藥業(yè)股份有限公司)；賽庚啶乳膏(批號(hào)：20120819常州四藥制藥有限公司)；新霉素氟輕松乳膏(批號(hào)：廣東恒建制藥有限公司)；氫化可的松注射液(批號(hào)：20110903 天津金耀氨基酸有限公司)；撲爾敏(批號(hào)：20110703 華中藥業(yè)股份有限公司)；地塞米松(批號(hào)：111108 浙江仙琚制藥有限公司)。

1.2實(shí)驗(yàn)菌株及培養(yǎng)基金黃色葡萄球菌(ATCC25923)、肺炎鏈球菌、綠膿桿菌(ATCC28753)、大腸桿菌(ATCC25922)，由貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院微生物學(xué)教研室提供。營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，上?？等鹕锟萍加邢薰荆?hào)120221；營(yíng)養(yǎng)瓊脂，上海盛思生化科技有限公司，批號(hào)121118。

1.3儀器數(shù)顯電熱培養(yǎng)箱，303A-型，武漢精華科教儀器有限公司；電熱恒溫箱WSZ-134-75，型號(hào)HH-BH，天津?qū)嶒?yàn)儀器廠；不銹鋼手提式壓力蒸汽滅菌器，YXQ-SG46-280SA，上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠；超凈工作臺(tái)，型號(hào)SW-CJ-1F，蘇凈集團(tuán)安泰公司；UV-2401紫外分光光度計(jì)，日本島津。

1.4方法

1.4.1體外抑菌實(shí)驗(yàn)采用平皿二倍稀釋法〔4〕。取金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌四株菌分別接種到普通營(yíng)養(yǎng)肉湯中，在37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，使菌活化繁殖，測(cè)定菌液中活菌數(shù)并稀釋成5×105CFU/ml供試菌懸液，備用。將已稀釋好的實(shí)驗(yàn)藥物分別加入冷卻至55℃左右的滅菌培養(yǎng)基中，混勻，制成不同濃度的藥物平板。取金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌等實(shí)驗(yàn)菌懸液，分別劃種于不同濃度的含藥平板，37℃培養(yǎng)18 h，觀察記錄最小抑菌濃度(MIC)。

1.4.2止癢實(shí)驗(yàn)

1.4.2.1對(duì)右旋糖酐致瘙癢小鼠的影響〔5〕取昆明種小鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分成五組，每組10只。分別為空白對(duì)照組(蒸餾水)，九頭獅子草低、中、高劑量組(15、22.5、30 g/kg)；賽庚啶乳膏陽(yáng)性對(duì)照組。各組小鼠腹部剃毛2 cm×1 cm，分別將受試藥液或?qū)φ找壕鶆蛲坑谔昝珔^(qū)，每天2次，連續(xù)3 d。末次給藥30 min后，于各組小鼠尾靜脈注射0.02%右旋糖酐5 ml/kg。以小鼠前爪搔抓頭部，后爪搔抓軀干，嘴咬全身各部位作為搔癢反應(yīng)指標(biāo)。觀察并記錄每只小鼠30 min內(nèi)各組小鼠瘙癢次數(shù)及瘙癢持續(xù)總時(shí)間。

1.4.2.2對(duì)磷酸組胺致癢豚鼠的影響〔6〕取健康豚鼠50只，雌雄各半，隨機(jī)分成5組，每組10只。分別為空白對(duì)照組(蒸餾水)，九頭獅子草低、中、高劑量組(10、15、20 g/kg)，新霉素氟輕松乳膏陽(yáng)性對(duì)照組(0.1 g/足)。實(shí)驗(yàn)前1 d，將各組豚鼠左后足背部剃毛，將左后足浸泡在藥液中10 min取出，模型對(duì)照組給予等量蒸餾水，陽(yáng)性組涂新霉素氟輕松乳膏，每日2次，連續(xù)2 d。第3天用0號(hào)砂紙擦傷豚鼠右后足背部剃毛處，擦傷程度以損傷表皮，不傷真皮，皮膚輕度滲血為度，面積約1 cm2，局部再給藥1次，末次給藥后10 min，開始于創(chuàng)面處滴0.01%磷酸組織胺每只 0.05 ml，此后每隔3 min依次按0.01%，0.02%，0.03%，0.04%…磷酸組織胺濃度遞增，每次均為50 μl/只，直至豚鼠出現(xiàn)回頭舔右后足為止。以豚鼠出現(xiàn)回頭舔右后足時(shí)所給予的磷酸組織胺總量為致癢閾，記錄并比較各組的致癢閾。

1.4.3抗炎實(shí)驗(yàn)

1.4.3.1對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響〔7〕小鼠分組及給藥同1.4.2.1，陽(yáng)性對(duì)照組給予氫化可的松(0.006 g/kg)。于末次給藥后40 min，每只小鼠右耳內(nèi)外側(cè)涂二甲苯0.03 ml致炎，左耳不涂為正常耳對(duì)照，1 h后脫頸椎處死，沿耳廓基線剪下雙耳，用8 mm打孔器沖下左耳及右耳同一部位的圓片，分別稱重，以兩耳的質(zhì)量之差作為腫脹度，計(jì)算腫脹抑制率：腫脹抑制率=(空白對(duì)照組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度)/空白對(duì)照組平均腫脹度×100%。

1.4.3.2對(duì)新鮮雞蛋清所致的小鼠足跖腫脹的影響〔7，8〕小鼠分組及給藥同1.4.2.1，陽(yáng)性對(duì)照組給予地塞米松(0.01 g/kg)。于末次給藥后40 min，每只小鼠右后足跖皮下注射10%新鮮雞蛋清0.03 ml。致炎4 h后處死動(dòng)物，在踝關(guān)節(jié)上剪下后足，精密稱取左右兩后足質(zhì)量，以兩足的質(zhì)量之差作為炎癥腫脹度。將炎性足充分剪碎后稱重并置于生理鹽水中浸泡2 h，3 000 r/min離心10 min，取上清液0.2 ml，加0.5 mol/L的氫氧化鉀-甲醇溶液2 ml，50℃下異構(gòu)化20 min，用甲醇稀釋至4 ml，于波長(zhǎng)278 nm處測(cè)定其OD值，以每克炎癥組織相當(dāng)?shù)腛D值表示PGE2的相對(duì)含量。計(jì)算腫脹抑制率及炎癥組織PGE2抑制率，腫脹抑制率計(jì)算方法同1.4.3.1，前列腺素(PG)E2抑制率=(空白對(duì)照組炎性組織PGE2含量-給藥組炎性組織PGE2含量)/空白對(duì)照組組織PGE2含量×100%。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS17.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)及秩和檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1體外抑菌實(shí)驗(yàn)九頭獅子草對(duì)四種病原菌的抑制作用強(qiáng)度依次為：大腸桿菌(MIC=7.8 mg/ml)、金黃色葡萄球菌(MIC=31.2 mg/ml)、綠膿桿菌(MIC=62.5 mg/ml)、肺炎鏈球菌(MIC=125 mg/ml)。

2.2止癢實(shí)驗(yàn)與空白對(duì)照組比較，九頭獅子草各劑量均可明顯降低右旋糖酐所致小鼠的瘙癢次數(shù)及瘙癢持續(xù)總時(shí)間(P<0.05)。見表1。與空白對(duì)照組致癢閾〔(17.5±4.95)μg〕比較，九頭獅子草低、中、高劑量〔(33.5±9.98)、(143±34.21)、(232.5±30.79)μg〕均能顯著提高磷酸組胺所致豚鼠的致癢閾(P<0.05)。陽(yáng)性對(duì)照組亦能提高豚鼠的致癢閾〔(270±15.81)μg〕。

2.3抗炎實(shí)驗(yàn)與空白對(duì)照組比較，九頭獅子草各劑量均能顯著降低二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹度(P<0.05)，提高腫脹抑制率。見表2。九頭獅子草各劑量均能顯著降低新鮮雞蛋清所致小鼠足跖腫脹(P<0.05)，提高腫脹抑制率；中、高劑量能顯著降低炎性足PGE2含量(P<0.05)，提高PGE2抑制率。見表3。

表1　對(duì)右旋糖酐致小鼠瘙癢的影響±s,n=10)

與空白對(duì)照組比較：1)P<0.05，下表同

表2　對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響(n=10)

表3　新鮮雞蛋清所致的小鼠足跖腫脹的影響±s，n=10)

3討論

陰道炎是陰道黏膜及黏膜下結(jié)締組織的炎癥，在各年齡層次的婦女均可發(fā)生。目前西醫(yī)治療陰道炎主要應(yīng)用抗生素和化學(xué)藥物，近期療效較好，而長(zhǎng)時(shí)間口服抗生素會(huì)產(chǎn)生毒副作用，若通過陰道給藥又常引起菌群失調(diào)導(dǎo)致真菌性陰道炎等，因此臨床應(yīng)用受到一定的限制。而中藥治療陰道炎臨床療效良好，標(biāo)本兼治，起效迅速，愈后無復(fù)發(fā)，經(jīng)濟(jì)方便，安全可靠。九頭獅子草為貴州省少數(shù)民族地區(qū)民間治療婦科泌尿系統(tǒng)感染的草藥，療效良好。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明九頭獅子草對(duì)金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌有不同程度的抑制作用；可降低右旋糖酐所致小鼠的瘙癢次數(shù)及瘙癢持續(xù)總時(shí)間，并提高磷酸組胺所致豚鼠的致癢閾，具有顯著的止癢作用；能降低二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹度，提高腫脹抑制率，能降低新鮮雞蛋清所致的小鼠足跖腫脹度，提高腫脹抑制率，還能顯著降低炎性足PGE2含量，提高PGE2抑制率，具有顯著的抗炎作用。以上結(jié)果與其臨床應(yīng)用和功能主治相吻合，為九頭獅子草治療陰道炎提供了充分的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。九頭獅子草在抗菌的同時(shí)兼有抗炎、止癢作用，這對(duì)各種原因引起的陰道炎來說可以達(dá)到標(biāo)本兼治療的效果。

前期研究結(jié)果表明九頭獅子草有良好的解熱作用，其水提液，石油醚部位及水部位均具有解熱作用，石油醚部位及水部位為解熱有效部位，解熱作用機(jī)制可能與降低血清中IL-6水平和下丘腦cAMP、PGE2含量有關(guān)〔9，10〕。因此，推測(cè)九頭獅子草抗炎作用也與降低IL-6的水平有關(guān)。

4參考文獻(xiàn)

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〔2014-08-11修回〕

(編輯安冉冉/曹夢(mèng)園)

通訊作者：覃容貴(1970-)，女，教授，博士，碩士生導(dǎo)師，主要從事中藥資源及藥理研究。

基金項(xiàng)目：貴州省科技廳聯(lián)合基金項(xiàng)目(黔科合LG〔2011〕030-K2009-29)

〔中圖分類號(hào)〕R961

〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

〔文章編號(hào)〕1005-9202(2016)03-0555-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.03.017