愛羅咳喘寧口服液對(duì)慢性阻塞性肺疾病大鼠血清白細(xì)胞介素-6和白細(xì)胞介素-8的影響

謝文英　張良芝　常學(xué)輝　尚立芝　胡文豪　李　亮　劉　坦　張　靜　李進(jìn)京

(河南中醫(yī)學(xué)院，河南　鄭州　450008)

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愛羅咳喘寧口服液對(duì)慢性阻塞性肺疾病大鼠血清白細(xì)胞介素-6和白細(xì)胞介素-8的影響

謝文英張良芝常學(xué)輝1尚立芝胡文豪李亮劉坦張靜李進(jìn)京

(河南中醫(yī)學(xué)院，河南鄭州450008)

〔摘要〕目的探討愛羅咳喘寧口服液對(duì)慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠血清白細(xì)胞介素(IL)-6、IL-8的影響。方法雄性SD大鼠60只隨機(jī)分為正常組、模型組、西藥組、中藥大劑量組、中藥中劑量組、中藥小劑量組，每組10只。采用2 次氣管內(nèi)注入脂多糖加煙熏造模后，給予對(duì)應(yīng)處理后測(cè)定各組大鼠血清IL-6、IL-8的含量。結(jié)果模型組大鼠血清IL-6、IL-8顯著高于正常組，經(jīng)用愛羅咳喘寧口服液治療后，血清IL-6、IL-8明顯下降，與模型組比較差異顯著。結(jié)論愛羅咳喘寧口服液治療COPD的作用機(jī)制可能與降低IL-6、IL-8水平有關(guān)。

〔關(guān)鍵詞〕慢性阻塞性肺疾?。粣哿_咳喘寧口服液；白細(xì)胞介素-6；白細(xì)胞介素-8

1河南中醫(yī)學(xué)院第二臨床醫(yī)學(xué)院內(nèi)科學(xué)科

第一作者：謝文英(1963-)，女，教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事常見病癥的辨證規(guī)律研究及中醫(yī)防治研究。

慢性阻塞性肺疾病(COPD)居我國(guó)疾病負(fù)擔(dān)序列的第一位，造成巨大的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。對(duì)于COPD 防治研究已成為目前醫(yī)學(xué)界研究的熱點(diǎn)課題之一。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為COPD 的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，涉及多種因素〔1，2〕。近年來(lái)，隨著對(duì) COPD 氣道炎癥的深入研究，普遍認(rèn)為激活的炎性細(xì)胞釋放多種介質(zhì)，包括白細(xì)胞介素(IL)-6、IL-8等參與COPD的發(fā)作、加重和復(fù)發(fā)。本研究主要通過(guò)觀察愛羅咳喘寧口服液對(duì)COPD 大鼠模型血清IL-6、IL-8含量的影響，探討愛羅咳喘寧口服液治療COPD的可能作用機(jī)制。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物雄性SD大鼠60只，清潔級(jí)，體重(300±20)g，由河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2藥物與試劑愛羅咳喘寧口服液(由炙麻黃、苦杏仁、云苓、蒼術(shù)、半夏、葶藶子、干姜、麥芽、白術(shù)、山藥、黨參、芫花、赤芍等藥物按一定比例配制而成，由河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院制劑室提供)；止咳橘紅口服液，北京同仁堂生產(chǎn)。IL-6、IL-8試劑盒購(gòu)自南京建成生物醫(yī)學(xué)研究所；脂多糖購(gòu)自廣州齊云生物技術(shù)有限公司(由美國(guó)Sigma公司生產(chǎn))。

1.3分組大鼠隨機(jī)分為6組：正常組、模型組、止咳橘紅口服液對(duì)照組(對(duì)照組)、愛羅咳喘寧大劑量組(中藥大劑量組)，愛羅咳喘寧中劑量組(中藥中劑量組)，愛羅咳喘寧小劑量組(中藥小劑量組)，每組10只。

1.4造模采用煙霧吸入+脂多糖灌肺復(fù)合因素建立COPD大鼠模型,參照文獻(xiàn)〔3，4〕法制作。在造模的第1天、第14天將大鼠以適量乙醚吸入麻醉后，暴露喉頭，以靜脈套管針替代氣管導(dǎo)管行氣管插管，向大鼠氣管內(nèi)注入脂多糖 LPS 100 μl(200 μg/μl)，完畢后將大鼠直立旋轉(zhuǎn)10～20 s，使LPS均勻分布于肺部。第2～13天、第15 ～ 28天，每天在有機(jī)玻璃密閉箱(80 cm×60 cm×50 cm，上方有一直徑為1.2 cm 的通氣孔)持續(xù)吸入新鮮的香煙霧(南寧卷煙廠生產(chǎn)真龍牌香煙，焦油含量19 mg，尼古丁1.2 mg)30 min，20支/d，每天熏煙后立刻用低于環(huán)境溫度(20℃)5℃冷空氣刺激1 h，造模28 d結(jié)束。

1.5處理造模成功后正常組、模型組大鼠分別給予蒸餾水按10 ml·kg-1·d-1灌胃；愛羅咳喘寧大劑量組按20 ml·kg-1·d-1灌胃混懸液(每毫升含藥物3 g)；愛羅咳喘寧中劑量組按10 ml·kg-1·d1灌胃混懸液(每毫升含藥物1.5 g)；愛羅咳喘寧小劑量組按5 ml·kg-1·d=1灌胃混懸液(每毫升含藥物0.75 g)；對(duì)照組按10 ml·kg-1·d-1灌胃藥物混懸液(每毫升含藥物0.0375 g)。每天灌胃2次/d，6AM與6PM各給藥一次，連續(xù)7 d。

1.6指標(biāo)測(cè)定灌胃結(jié)束24 h后斷頭處死動(dòng)物，取血3 ml于4℃靜置30 min后，以3 000 r/min 離心15 min，取血清在-20℃ 凍存待檢測(cè)。IL-6，IL-8檢測(cè)均用ELISA法,在河南中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心完成，均按照試劑盒說(shuō)明書由專人操作。

1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS18.0進(jìn)行F檢驗(yàn)及Q檢驗(yàn)。

2結(jié)果

見表1。模型組大鼠血清IL-6，IL-8顯著高于正常組(均P<0.01)；中藥大、中、小組及對(duì)照組大鼠血清IL-6，IL-8值顯著低于模型組(均P<0.01)，中藥大劑量組血清IL-6，IL-8值與對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)，中藥大劑量組血清IL-6，IL-8值顯著低于中藥中、小劑量組(均P<0.01)。

表1　各組大鼠血清IL-6，IL-8水平比較

與正常組比較:1)P<0.01；與模型組比較:2)P<0.01；與中藥大劑量組比較：3)P<0.01

3討論

COPD病因病機(jī)概括為六淫之邪侵襲，衛(wèi)表受邪，肺失宣肅而成，尤以六淫之寒邪為多，外感是其重要的誘發(fā)因素；其病機(jī)為本虛標(biāo)實(shí)，本虛為肺脾腎虛，標(biāo)實(shí)為痰飲、血瘀；反復(fù)發(fā)作致肺氣虛是本病遷延不愈的主要原因。COPD病機(jī)之關(guān)鍵涉及“氣虛”、“痰凝”、“血瘀”、“氣滯”，而又以“氣虛”為根本，病位涉及肺、脾、腎三臟，治則為宣肺降肺；益氣行氣；化痰祛瘀；健脾益腎。愛羅咳喘寧口服液為已故著名中醫(yī)謝暢懷治療慢性支氣管炎、慢性阻塞性肺疾病的經(jīng)驗(yàn)方，全方由炙麻黃、苦杏仁、云苓、蒼術(shù)、半夏、葶藶子、干姜、麥芽、白術(shù)、山藥、黨參、芫花、赤芍等藥組成。方中炙麻黃宣肺平喘，杏仁祛痰止咳平喘，兩者同為君藥。臣以半夏燥濕化痰，葶藶子瀉肺降氣，祛痰平喘；干姜溫肺化飲；茯苓健脾化痰；芫花瀉水逐飲，祛痰止咳。佐以黨參健脾益肺，白術(shù)健脾益氣，山藥補(bǔ)脾、養(yǎng)肺、固腎，蒼術(shù)燥濕健脾,麥芽健脾和胃，赤芍活血祛瘀。全方可起健脾益腎，祛痰祛瘀，止咳平喘之效〔5~7〕。

近年來(lái)，細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)和免疫功能紊亂與COPD關(guān)系的探討受到重視，細(xì)胞因子成員IL-6、IL-8在機(jī)體炎癥和免疫調(diào)節(jié)過(guò)程中發(fā)揮重要作用〔8~10〕。IL-6 是機(jī)體內(nèi)細(xì)胞產(chǎn)生的一種具有多種生物學(xué)活性的刺激因子，是機(jī)體復(fù)雜的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中的一個(gè)重要成員。IL-6在正常情況下調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答，在病理狀態(tài)下其濃度的升高可引起免疫性病理?yè)p傷。IL-8是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的有化學(xué)趨向作用的細(xì)胞因子，由多種參與炎癥反應(yīng)的細(xì)胞產(chǎn)生，如巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞等，其作用于嗜中性粒細(xì)胞趨化游走功能，加強(qiáng)炎癥防護(hù)，促進(jìn)T細(xì)胞趨化功能，加強(qiáng)免疫反應(yīng)〔11,12〕。IL-8在慢性呼吸道炎癥中起著關(guān)鍵作用，它可以激活中性粒細(xì)胞外形的改變、溶酶體酶的釋放、超氧化物的產(chǎn)生和增加、黏附分子的表達(dá)。可見，以 IL-8為主要細(xì)胞因子導(dǎo)致的氣道炎癥已被認(rèn)為是COPD 發(fā)病的重要機(jī)制之一〔13〕。

慢性支氣管炎大鼠模型血清IL-6，IL-8釋放增加，IL-6 又作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，導(dǎo)致病理性損傷，促進(jìn)疾病的發(fā)生與發(fā)展，與慢性阻塞性肺疾病炎癥的形成和發(fā)展具有重要影響。而愛羅咳喘寧口服液可通過(guò)抑制IL-6，IL-8的釋放而發(fā)揮其抗炎作用。愛羅咳喘寧口服液通過(guò)降低IL-6，IL-8含量，防止其對(duì)機(jī)體的進(jìn)一步損害，控制炎癥反應(yīng)，此可能是愛羅咳喘寧口服液治療COPD的作用機(jī)制之一。

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〔2014-12-09修回〕

(編輯曹夢(mèng)園)

Effect of Ailuokechuanning oral liquid on serum IL-6 and IL-8 in rat with chronic obstructive pulmonary disease

XIE Wen-Ying，ZHANG Liang-Zhi，CHANG Xue-Hui,etal.

Department of Diagnostics of Traditional Chinese Medicine,Henan Traditional Chinese Medicine College，Zhengzhou 450008，Henan,China

【Abstract】ObjectiveTo study the effect of Ailuokechuanning oral liquid on interleukin(IL)-6 and IL-8 in experimental rats' serums with chronic obstructive pulmonary disease (COPD).Methods60 SD male rats were randomly divided into normal control，model，Ailuokechuanning oral liquid( 5，10，20 ml·kg-1·d-1)，Zhikejuhong syrup control groups.COPD models were established by pouring lipopolysacchride(LPS)into trachea and putting rats into smoking environment twice a day.Levels of IL-6 and IL-8 in serum of rats were measured.ResultsThe levels of IL-6,IL-8 in rats′ serum of the model group were significantly higher than those in normal control group.The levels of IL-6,IL-8 of the rats treated with Ailuokechuanning oral liquid significantly decreased.ConclusionsThe mechanism of Ailuokechuanning oral liquid for treatment of COPD may be related to the inhibition of IL-6 and IL-8．

【Key words】Chronic obstructive pulmonary disease;Ailuokechuanning oral liquid;Interleukin-6;Interleukin-8

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(No.81573881)；河南省高等學(xué)校重點(diǎn)科研項(xiàng)目(15A360030)；河南省中管局項(xiàng)目(2013ZY02070)；鄭州市科技領(lǐng)軍人才項(xiàng)目(121PLTJRC535)

〔中圖分類號(hào)〕R285.5

〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

〔文章編號(hào)〕1005-9202(2016)04-0786-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.04.007