血清Bcl-w和Bid蛋白在哮喘急性重度發(fā)作患兒中的表達(dá)及意義

張微，張冰，陳旭央，胡莉蔓，施冰玲

（樂清市人民醫(yī)院，浙江 樂清 325600）

血清Bcl-w和Bid蛋白在哮喘急性重度發(fā)作患兒中的表達(dá)及意義

張微，張冰，陳旭央，胡莉蔓，施冰玲

（樂清市人民醫(yī)院，浙江 樂清 325600）

目的 探討凋亡因子Bcl-w和Bid蛋白在哮喘急性重度發(fā)作患兒中的表達(dá)及意義。 方法 50例哮喘患兒分別在哮喘急性重度發(fā)作期、緩解期采集靜脈血，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測(cè)血清Bcl-w和Bid蛋白的水平。 結(jié)果 哮喘組急性期血清Bcl-w和Bid的水平分別為（57.14±2.23）ng/mL和（78.00±2.13）ng/mL，顯著高于緩解期（40.48±1.66）ng/mL和（57.42±2.01）ng/mL（均P<0.01）；兩指標(biāo)呈直線正相關(guān)（r=0.32，P＜0.01）。 結(jié)論 哮喘兒童急性期血清Bcl-w和Bid的水平升高，緩解期下降，共同起著保持凋亡動(dòng)態(tài)平衡的作用。

哮喘；凋亡；發(fā)病機(jī)制；Bcl-w；Bid

很多研究證實(shí)，凋亡因子在癌癥的發(fā)病機(jī)制中起著非常重要的作用[1-2]。最近研究卻發(fā)現(xiàn)，凋亡因子參與了支氣管哮喘（以下簡(jiǎn)稱“哮喘”）的發(fā)病機(jī)制，但不同的因子表達(dá)水平不同[3]?？沟蛲龅鞍譈cl-w和Bid都是Bcl-2家族成員，分別具有抑凋亡或促凋亡的作用，它們與哮喘的關(guān)系則鮮見報(bào)道。本文通過觀察哮喘患兒血清Bcl-w和Bid的表達(dá)，探討它們?cè)谙l(fā)病機(jī)制中的作用，為哮喘的靶向治療提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2014年10月~2015年10月本院50例兒童哮喘患者，符合哮喘急性重度發(fā)作的診斷標(biāo)準(zhǔn)，急性期是指突然發(fā)生喘息、咳嗽、氣促、胸悶等癥狀，或原有癥狀急劇加重；緩解期指經(jīng)過治療或未經(jīng)治療，癥狀、體征消失，肺功能恢復(fù)到急性發(fā)作前水平，并維持3個(gè)月以上[4]。其中男30例，女20例，年齡3~5歲，平均（4.2±0.7）歲。50例患兒每天接受霧化吸入布地奈德溶液（1mg/次，每天2次）和博利康尼溶液（2.5mg/次，每天2次），靜脈使用甲基強(qiáng)的松龍[1~2mg/（kg·次），2次/d]及孟魯司特[（4mg/d，1次/d]等綜合治療。

1.2 方法 分別留取哮喘急性發(fā)作期及緩解期靜脈血各2mL，靜置2小時(shí)，3000轉(zhuǎn)/min離心取血清，-80℃低溫冰箱保存，留作一次性檢測(cè)。Bcl-w和Bid抗體ELISA試劑盒均購自上海研吉生物技術(shù)有限公司 （生產(chǎn)批號(hào)分別為201508和201512），ELISA法檢測(cè)血清Bcl-w和Bid的表達(dá)。按照說明書操作，具體步驟如下∶標(biāo)本和96孔酶標(biāo)板平衡至室溫，設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔，各孔加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品和樣本各50mL，加辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗體100μL，37℃水浴1小時(shí)，加洗滌液重復(fù)洗板5次，加入底物A、B各50μL 37℃避光水浴15分鐘，加終止液，450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的吸光度值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件，數(shù)據(jù)采用（）表示，哮喘組治療前后比較采用配對(duì)資料t檢驗(yàn)，并采用直線相關(guān)分析法分析。

2 結(jié)果

2.1 哮喘發(fā)作不同時(shí)期Bcl-w和Bid的表達(dá) 哮喘急性期血清Bcl-w和Bid的濃度顯著高于哮喘緩解期（P<0.01），詳見表1。

表1 血清Bcl-w和Bid的水平哮喘急性期和緩解期（，ng/mL）

表1 血清Bcl-w和Bid的水平哮喘急性期和緩解期（，ng/mL）

與急性期比較**P＜0.01

時(shí)間 n Bcl-w Bid急性期 50 57.14±2.23 78.00±2.13緩解期 50 40.48±1.66**57.42±2.01**

2.2 血清Bcl-w與Bid表達(dá)的相關(guān)性 血清Bcl-w與Bid蛋白的水平之間呈直線正相關(guān)（r=0.32，P＜0.01）。

3 討論

目前已發(fā)現(xiàn)Bcl-2家族成員超過25個(gè)，均具有不同的生理功能，處于動(dòng)態(tài)平衡中，分別為Bcl-w和Bid等。Bid是一種促凋亡蛋白，通過與Bcl-2蛋白家族其它成員相互作用，在朊酶類介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中起著重要作用，是朊酶類凋亡途經(jīng)的標(biāo)志物。最近研究發(fā)現(xiàn)它不僅僅是一個(gè)細(xì)胞殺傷分子，而且是有絲分裂的檢查點(diǎn)，起著維護(hù)基因穩(wěn)定的作用，被Fas/TNF-R1/Caspase 8信號(hào)途徑激活[5]；Bid還可能參與核苷酸結(jié)合和寡聚化結(jié)構(gòu)域的天然免疫過程[6]。Bcl-w則具有抑制細(xì)胞凋亡的功能，也是通過與家族蛋白及其他相關(guān)蛋白等發(fā)揮著復(fù)雜的抗凋亡功能[7]。

以往的研究發(fā)現(xiàn)，Bcl-2家族成員參與了哮喘的發(fā)病機(jī)制。哮喘小鼠Bcl-xL的基因表達(dá)增高，布地奈德能下調(diào)它的表達(dá)[8]。在哮喘大鼠氣道重塑模型的肺組織中，Bcl-2、Bax蛋白含量明顯增加，經(jīng)氨茶堿治療后它們的表達(dá)水平進(jìn)一步升高[9]。也有研究發(fā)現(xiàn)，哮喘小鼠肺組織Bcl-2表達(dá)升高，而Bax表達(dá)卻下降[10]。上述的研究提示不同的凋亡因子在不同的組織中，其基因或蛋白的表達(dá)可能不同。

本文發(fā)現(xiàn)，哮喘組急性期血清Bcl-w和Bid水平會(huì)升高，并在緩解期下降，提示哮喘急性期，血清中凋亡因子發(fā)生了改變，促進(jìn)凋亡作用和抑制凋亡作用的因子都得到了提升。在緩解期，凋亡因子隨著哮喘炎癥的減輕而向正常水平恢復(fù)，促凋亡因子和抑制凋亡因子的表達(dá)水平隨著疾病的演變保持著凋亡的動(dòng)態(tài)平衡。通過相關(guān)性分析，血清Bcl-w和Bid的表達(dá)水平存在直線正相關(guān)，表明促凋亡因子和抑制凋亡因子之間相互聯(lián)系、相互影響，在凋亡的通路上共同起作用。

綜上所述，哮喘兒童急性期血清Bcl-w和Bid蛋白的水平升高，緩解期下降，共同起著保持凋亡動(dòng)態(tài)平衡的作用。

[1] 潘麒，張連華，楊國良，等.Bcl-w在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用.腫瘤學(xué)雜志，2014，20（10）∶838

[2] 任磊，周業(yè)江，劉春鳳.Bcl-2/Bid在胃癌的差異性表達(dá)與臨床意義.中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)，2013，23（20）∶51

[3] 李昌崇，胡曉光，張維溪，等.哮喘幼年大鼠嗜酸細(xì)胞凋亡、fas mRNA和Bcl-2 mRNA表達(dá)及牛膝多糖的影響.中華兒科雜志，2003，41（9）∶657

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[5] Wang Y，Tjandra N.Structural insights of Bid，the caspase-8-activated Bid，and its BH3 domain.J Biol Chem，2013，288（50）∶35840

[6] Yeretssian G，Correa RG，Doiron K，et al.Non-apoptotic role ofBID in inflammation and innate immunity.Nature，2011，474（7349）∶96

[7] 戴曉莉，王敏，杜鴻.人Bcl-w基因的克隆和原核表達(dá).江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2012，22（2）∶176

[8] 彭文科，史菲，鄧春艷，等.布地奈德對(duì)哮喘小鼠淋巴細(xì)胞凋亡和Stat5b/Bcl-xL信號(hào)通路的影響.廣東醫(yī)學(xué)，2011，32（12）∶1530

[9] 段旭東，趙輝，王曉紅，等.氨茶堿對(duì)哮喘呼吸道重塑大鼠支氣管組織中Bcl-2及Bax蛋白含量的影響.中國老年學(xué)雜志，2010，30（11）∶1536

[10]杜文靜，董競(jìng)成，蔡萃，等.淫羊藿苷對(duì)哮喘小鼠肺內(nèi)嗜酸性粒細(xì)胞凋亡和Bcl-2、Bax基因蛋白表達(dá)的影響.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2011，31（9）∶1248

溫州市醫(yī)藥衛(wèi)生科學(xué)研究項(xiàng)目計(jì)劃（2013B68）