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    血清Bcl-w和Bid蛋白在哮喘急性重度發(fā)作患兒中的表達(dá)及意義

    2016-03-03 08:47:33張微張冰陳旭央胡莉蔓施冰玲
    浙江實(shí)用醫(yī)學(xué) 2016年6期
    關(guān)鍵詞:急性期重度哮喘

    張微,張冰,陳旭央,胡莉蔓,施冰玲

    (樂清市人民醫(yī)院,浙江 樂清 325600)

    血清Bcl-w和Bid蛋白在哮喘急性重度發(fā)作患兒中的表達(dá)及意義

    張微,張冰,陳旭央,胡莉蔓,施冰玲

    (樂清市人民醫(yī)院,浙江 樂清 325600)

    目的 探討凋亡因子Bcl-w和Bid蛋白在哮喘急性重度發(fā)作患兒中的表達(dá)及意義。 方法 50例哮喘患兒分別在哮喘急性重度發(fā)作期、緩解期采集靜脈血,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測(cè)血清Bcl-w和Bid蛋白的水平。 結(jié)果 哮喘組急性期血清Bcl-w和Bid的水平分別為(57.14±2.23)ng/mL和(78.00±2.13)ng/mL,顯著高于緩解期(40.48±1.66)ng/mL和(57.42±2.01)ng/mL(均P<0.01);兩指標(biāo)呈直線正相關(guān)(r=0.32,P<0.01)。 結(jié)論 哮喘兒童急性期血清Bcl-w和Bid的水平升高,緩解期下降,共同起著保持凋亡動(dòng)態(tài)平衡的作用。

    哮喘;凋亡;發(fā)病機(jī)制;Bcl-w;Bid

    很多研究證實(shí),凋亡因子在癌癥的發(fā)病機(jī)制中起著非常重要的作用[1-2]。最近研究卻發(fā)現(xiàn),凋亡因子參與了支氣管哮喘(以下簡(jiǎn)稱“哮喘”)的發(fā)病機(jī)制,但不同的因子表達(dá)水平不同[3]??沟蛲龅鞍譈cl-w和Bid都是Bcl-2家族成員,分別具有抑凋亡或促凋亡的作用,它們與哮喘的關(guān)系則鮮見報(bào)道。本文通過觀察哮喘患兒血清Bcl-w和Bid的表達(dá),探討它們?cè)谙l(fā)病機(jī)制中的作用,為哮喘的靶向治療提供理論依據(jù)。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 選擇2014年10月~2015年10月本院50例兒童哮喘患者,符合哮喘急性重度發(fā)作的診斷標(biāo)準(zhǔn),急性期是指突然發(fā)生喘息、咳嗽、氣促、胸悶等癥狀,或原有癥狀急劇加重;緩解期指經(jīng)過治療或未經(jīng)治療,癥狀、體征消失,肺功能恢復(fù)到急性發(fā)作前水平,并維持3個(gè)月以上[4]。其中男30例,女20例,年齡3~5歲,平均(4.2±0.7)歲。50例患兒每天接受霧化吸入布地奈德溶液(1mg/次,每天2次)和博利康尼溶液(2.5mg/次,每天2次),靜脈使用甲基強(qiáng)的松龍[1~2mg/(kg·次),2次/d]及孟魯司特[(4mg/d,1次/d]等綜合治療。

    1.2 方法 分別留取哮喘急性發(fā)作期及緩解期靜脈血各2mL,靜置2小時(shí),3000轉(zhuǎn)/min離心取血清,-80℃低溫冰箱保存,留作一次性檢測(cè)。Bcl-w和Bid抗體ELISA試劑盒均購自上海研吉生物技術(shù)有限公司 (生產(chǎn)批號(hào)分別為201508和201512),ELISA法檢測(cè)血清Bcl-w和Bid的表達(dá)。按照說明書操作,具體步驟如下∶標(biāo)本和96孔酶標(biāo)板平衡至室溫,設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔,各孔加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品和樣本各50mL,加辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗體100μL,37℃水浴1小時(shí),加洗滌液重復(fù)洗板5次,加入底物A、B各50μL 37℃避光水浴15分鐘,加終止液,450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的吸光度值。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件,數(shù)據(jù)采用()表示,哮喘組治療前后比較采用配對(duì)資料t檢驗(yàn),并采用直線相關(guān)分析法分析。

    2 結(jié)果

    2.1 哮喘發(fā)作不同時(shí)期Bcl-w和Bid的表達(dá) 哮喘急性期血清Bcl-w和Bid的濃度顯著高于哮喘緩解期(P<0.01),詳見表1。

    表1 血清Bcl-w和Bid的水平哮喘急性期和緩解期(,ng/mL)

    表1 血清Bcl-w和Bid的水平哮喘急性期和緩解期(,ng/mL)

    與急性期比較**P<0.01

    時(shí)間 n Bcl-w Bid急性期 50 57.14±2.23 78.00±2.13緩解期 50 40.48±1.66**57.42±2.01**

    2.2 血清Bcl-w與Bid表達(dá)的相關(guān)性 血清Bcl-w與Bid蛋白的水平之間呈直線正相關(guān)(r=0.32,P<0.01)。

    3 討論

    目前已發(fā)現(xiàn)Bcl-2家族成員超過25個(gè),均具有不同的生理功能,處于動(dòng)態(tài)平衡中,分別為Bcl-w和Bid等。Bid是一種促凋亡蛋白,通過與Bcl-2蛋白家族其它成員相互作用,在朊酶類介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中起著重要作用,是朊酶類凋亡途經(jīng)的標(biāo)志物。最近研究發(fā)現(xiàn)它不僅僅是一個(gè)細(xì)胞殺傷分子,而且是有絲分裂的檢查點(diǎn),起著維護(hù)基因穩(wěn)定的作用,被Fas/TNF-R1/Caspase 8信號(hào)途徑激活[5];Bid還可能參與核苷酸結(jié)合和寡聚化結(jié)構(gòu)域的天然免疫過程[6]。Bcl-w則具有抑制細(xì)胞凋亡的功能,也是通過與家族蛋白及其他相關(guān)蛋白等發(fā)揮著復(fù)雜的抗凋亡功能[7]。

    以往的研究發(fā)現(xiàn),Bcl-2家族成員參與了哮喘的發(fā)病機(jī)制。哮喘小鼠Bcl-xL的基因表達(dá)增高,布地奈德能下調(diào)它的表達(dá)[8]。在哮喘大鼠氣道重塑模型的肺組織中,Bcl-2、Bax蛋白含量明顯增加,經(jīng)氨茶堿治療后它們的表達(dá)水平進(jìn)一步升高[9]。也有研究發(fā)現(xiàn),哮喘小鼠肺組織Bcl-2表達(dá)升高,而Bax表達(dá)卻下降[10]。上述的研究提示不同的凋亡因子在不同的組織中,其基因或蛋白的表達(dá)可能不同。

    本文發(fā)現(xiàn),哮喘組急性期血清Bcl-w和Bid水平會(huì)升高,并在緩解期下降,提示哮喘急性期,血清中凋亡因子發(fā)生了改變,促進(jìn)凋亡作用和抑制凋亡作用的因子都得到了提升。在緩解期,凋亡因子隨著哮喘炎癥的減輕而向正常水平恢復(fù),促凋亡因子和抑制凋亡因子的表達(dá)水平隨著疾病的演變保持著凋亡的動(dòng)態(tài)平衡。通過相關(guān)性分析,血清Bcl-w和Bid的表達(dá)水平存在直線正相關(guān),表明促凋亡因子和抑制凋亡因子之間相互聯(lián)系、相互影響,在凋亡的通路上共同起作用。

    綜上所述,哮喘兒童急性期血清Bcl-w和Bid蛋白的水平升高,緩解期下降,共同起著保持凋亡動(dòng)態(tài)平衡的作用。

    [1] 潘麒,張連華,楊國良,等.Bcl-w在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用.腫瘤學(xué)雜志,2014,20(10)∶838

    [2] 任磊,周業(yè)江,劉春鳳.Bcl-2/Bid在胃癌的差異性表達(dá)與臨床意義.中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué),2013,23(20)∶51

    [3] 李昌崇,胡曉光,張維溪,等.哮喘幼年大鼠嗜酸細(xì)胞凋亡、fas mRNA和Bcl-2 mRNA表達(dá)及牛膝多糖的影響.中華兒科雜志,2003,41(9)∶657

    [4] Global Strategy for Asthma Management and Prevention. GINA Report,2014,http∶//www.ginasthma.org/documents/4

    [5] Wang Y,Tjandra N.Structural insights of Bid,the caspase-8-activated Bid,and its BH3 domain.J Biol Chem,2013,288(50)∶35840

    [6] Yeretssian G,Correa RG,Doiron K,et al.Non-apoptotic role ofBID in inflammation and innate immunity.Nature,2011,474(7349)∶96

    [7] 戴曉莉,王敏,杜鴻.人Bcl-w基因的克隆和原核表達(dá).江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2012,22(2)∶176

    [8] 彭文科,史菲,鄧春艷,等.布地奈德對(duì)哮喘小鼠淋巴細(xì)胞凋亡和Stat5b/Bcl-xL信號(hào)通路的影響.廣東醫(yī)學(xué),2011,32(12)∶1530

    [9] 段旭東,趙輝,王曉紅,等.氨茶堿對(duì)哮喘呼吸道重塑大鼠支氣管組織中Bcl-2及Bax蛋白含量的影響.中國老年學(xué)雜志,2010,30(11)∶1536

    [10]杜文靜,董競(jìng)成,蔡萃,等.淫羊藿苷對(duì)哮喘小鼠肺內(nèi)嗜酸性粒細(xì)胞凋亡和Bcl-2、Bax基因蛋白表達(dá)的影響.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,2011,31(9)∶1248

    溫州市醫(yī)藥衛(wèi)生科學(xué)研究項(xiàng)目計(jì)劃(2013B68)

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