脂褐素三種染色方法比較

董愉，張芬芬，吳惠群，梁英杰

（中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科，廣州 510080）

技術(shù)方法

脂褐素三種染色方法比較

董愉，張芬芬，吳惠群，梁英杰*

（中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科，廣州 510080）

目的比較顯示脂褐素的3種特殊染色方法，探討哪一種方法更適合應(yīng)用于臨床病理診斷。方法分別采用三氯化鐵-鐵氰化鉀、醛品紅和PAS 3種特殊染色方法，檢測HE染色石蠟切片中呈淺棕色或金黃色的顆粒是否為脂褐素。三氯化鐵-鐵氰化鉀染色的脂褐素呈藍(lán)黑色顆粒，醛品紅染色的脂褐素呈深紫色顆粒，PAS染色的脂褐素呈紅色顆粒。結(jié)果通過3種染色結(jié)果的比較，發(fā)現(xiàn)三氯化鐵-鐵氰化鉀染色對比清晰，定位準(zhǔn)。結(jié)論三氯化鐵-鐵氰化鉀、醛品紅、PAS三種染色均可用于顯示脂褐素，但三氯化鐵鐵氰化鉀染色方法優(yōu)于其他兩種。

脂褐素；三氯化鐵鐵氰化鉀染色；醛品紅染色；PAS染色

脂褐素沉積在人體各組織器官細(xì)胞中，常見于肝臟、腎臟、心肌、腎上腺與神經(jīng)細(xì)胞，主要分布在細(xì)胞核周圍。在HE染色中，脂褐素和某些其他色素一樣呈淺棕色或金黃色的顆粒，不容易區(qū)分。在臨床病理診斷中，往往需要證實這些色素是否為脂褐素，以便輔助病理診斷。用特殊染色技術(shù)可以證實這些色素是否為脂褐素。常用的脂褐素特殊染色方法有多種，各有其優(yōu)點和不足。本文對常用的三氯化鐵-鐵氰化鉀、醛品紅、PAS 3種脂褐素染色方法進(jìn)行比較，探討哪一種方法更適合應(yīng)于臨床病理診斷。

材料與方法

1 材料

收集中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院2015-2016年上半年HE染色中含有黃棕色或棕褐色色素的病例8例，常規(guī)脫水石蠟包埋，行連續(xù)切片，切片厚度為4～5μm。將3張連續(xù)切片分別進(jìn)行三氯化鐵-鐵氰化鉀、醛品紅和PAS染色，3種染色所用試劑均為本科室自行配制。

2 染色方法［1］

2.1 三氯化鐵鐵氰化鉀染色

切片脫蠟至水，蒸餾水稍洗，浸入高鐵化物液作用2～3min；流水沖洗后核固紅復(fù)染胞核10min；稍水洗，常規(guī)脫水透明，中性樹膠封片。

2.2 醛品紅染色

切片脫蠟至水，酸化高錳酸鉀氧化5min；稍水洗，2%草酸漂白1min；洗水沖洗，70%乙醇稍洗；醛品紅液浸染（加蓋）10min；70%乙醇洗2次，每次約30s，至切片沒有染液脫出；稍水洗，常規(guī)脫水透明，中性樹膠封片。

2.3 PAS染色

切片脫蠟至水，1%高碘酸氧化10min；稍水洗，蒸餾水洗3次，無色品紅液室溫暗處加蓋作用20min；1%偏重亞硫酸鈉洗1mim，流水沖洗；蘇木素復(fù)染；流水沖洗，常規(guī)脫水透明，中性樹膠封片。

結(jié) 果

HE染色，脂褐素呈淺棕色顆粒，細(xì)胞核藍(lán)色，胞質(zhì)紅色（圖1A）；三氯化鐵-鐵氰化鉀法染色，脂褐素呈暗藍(lán)黑色顆粒，細(xì)胞核紅色（圖1B）；醛品紅法染色，脂褐素呈深紫色顆粒，黏液也染成深紫色（圖1C）；PAS法染色，脂褐素呈紅色顆粒，黏液也染成紅色（圖1D）。

圖1 3種不同脂褐素染色方法效果比較。A，HE染色；B，三氯化鐵-鐵氰化鉀染色；C，醛品紅染色；D，PAS染色；箭，脂褐素；星號，黏液；比例尺，50μmFig.1 Comparison of the three staining methods for lipofuscin.A，HE stain；B，F(xiàn)CPF stain；C，AF stain；D，PAS stain；arrows，lipofuscin；asterisk，mucus；scale bar，50μm

討 論

色素依據(jù)其來源分為3類：內(nèi)源性色素、外源性色素和人為色素。脂褐素屬于內(nèi)源性色素，由機體自身所產(chǎn)生。其積累隨年齡增長而增多，是衰老的重要指征之一。見于淺表皮膚者俗稱“老年斑”。有研究指出，脂褐素沉積在人體各組織器官細(xì)胞中，導(dǎo)致細(xì)胞代謝減緩，活性下降，從而造成人體器官功能衰退產(chǎn)生衰老。在HE染色切片中，脂褐素在組織細(xì)胞內(nèi)呈棕褐色顆粒，與其它一些不同性質(zhì)和來源的色素相似而不易區(qū)別，必須借助于特殊染色才能將這些色素加以區(qū)分出來，因此，“色素染色”的意義就在于鑒別和證實它們，以便輔助病理診斷［2］。如結(jié)腸黑變病與慢性腸出血其腸黏膜內(nèi)均見色素沉著，用特殊染色方法可進(jìn)行鑒別，前者所含色素為脂褐素，后者含的色素為含鐵血黃素［3］。

脂褐素特殊染色方法有多種，常用的有三氯化鐵-鐵氰化鉀染色法、醛品紅法和PAS法。3種染色法都可以很好地顯示脂褐素，各有優(yōu)點和不足（表1）。

表1 三種脂褐素特殊染色方法比較Tab.1 Com pairison of the three staining m ethods for lipofuscin

脂褐素的化學(xué)成分非常復(fù)雜，三氯化鐵-鐵氰化鉀染色主要是因為脂褐素細(xì)胞含有高價鐵，脂褐素內(nèi)的還原物質(zhì)與高鐵化物溶液內(nèi)的高鐵離子作用被還原為亞鐵鹽，亞鐵鹽再與鐵氰化鉀反應(yīng)而呈暗藍(lán)色。進(jìn)行三氯化鐵-鐵氰化鉀染色時，要注意三氯化鐵-鐵氰化鉀染色是進(jìn)行性染色，切片在高鐵化物內(nèi)的時間不能太長，時間太長可顯示任何能還原高鐵化物的物質(zhì)而造成背景染色，染色過程中應(yīng)該不時在鏡下觀察以控制染色效果。

醛品紅和PAS試劑較為常用，配好后可存放較長時間，一般實驗室都有，需要染色時不用每次新鮮配制，但操作步驟比三氯化鐵鐵氰化鉀法多，另外醛品紅法和PAS法除了顯示出脂褐素外，也能將黏液顯示出來，二者均呈深紫色或紅色。如果組織中也含有黏液，則著染同樣顏色的黏液會影響脂褐素的觀察。

綜上所述，3種特殊染色方法均可用于檢測組織中的脂褐素，但三氯化鐵-鐵氰化鉀法具有更快捷、與組織其它成分對比好，更容易觀察的優(yōu)點，是首選的脂褐素染色方法，尤其是對一些含黏液的組織進(jìn)行脂褐素染色時。

［1］梁英杰，凌啟波，張威.臨床病理學(xué)技術(shù).廣東：人民衛(wèi)生出版社，2011，167-169.

［2］董妙珠，肖萍，洪新宇，等.不同染色法檢測豚鼠皮膚黑色素的比較研究.環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學(xué)，2006，23（5）：423-425.

［3］張品南，夏作利，郭群.結(jié)腸黑變病的形態(tài)學(xué)與組化研究.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2008，17（35）：5421-5422.

［4］Timiras PS.Developmental Physiology and Aging.New York：The Macmillan Company，1972，502-506.

Comparison of three staining methods for lipofuscin

Dong Yu，Zhang Fenfen，Wu Huiqun，Liang Yingjie*
（Department of Pathology，the First Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University，Guangzhou 510080，China.）

ObjectiveTo compare three special stainingmethods for lipofuscin and find out which one is the best for clinical pathological diagnosis.M ethodsThree special stainingmethodswere used to stain and distinguish the lipofuscin in HE-stained paraffin sections，namely ferric chloride-potassium ferricyanide（FCPF）which stains lipofuscin blue-dark，aldehyde-fuchsin（AF）which stains lipofuscin deep-purple，and Periodic Acid Schiff（PAS）which stains lipofuscin red.ResultsIn the comparison of the staining results，F(xiàn)CPF staining was shown to be the best contrast and accurate loccanization.ConclusionAll threemethods are usable for lipofuscin staining，ofwhich FCPF is better than the other two.

Lipofuscin；ferric chloride-potassium ferricyanide stain；aldehyde-fuchsin stain；periodic acid Schiff（PAS）stain.

R331

A

10.16705／j.cnki.1004-1850.2016.06.016

2016-10-20

2016-12-14

董愉，女（1977年），漢族，主管技師

*通訊作者（Towhom correspondence should be addressed）：liangyjj＠163.com