不同產地粉葛四種異黃酮含量比較

蘇碧麗　胡娟　龐文生

【摘要】目的：考察不同產地粉葛中葛根素、3'-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的含量，為制定粉葛藥材質量標準提供參考依據(jù)。方法：采用RP-HPLC法，色譜柱Hypersil C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.2%磷酸，梯度洗脫；流速1.0 ml/min，柱溫30℃，檢測波長250 nm。結果：葛根素、3'-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的線性范圍分別為12.4～620ng、1.52～76ng、2.4～120ng、3.28～164 ng，四種成分的平均加樣回收率分別為101.1%、99.86%、101.78%、103.39%，RSD分別為1.43%、1.29%、0.95%、1.21%。結論：該方法簡便快速，重復性良好，結果準確可靠，可用于不同產地粉葛藥材中四種異黃酮類成分的含量測定。

【關鍵詞】HPLC；葛根素；3'-甲氧基葛根素；大豆苷；大豆苷元

【中圖分類號】R284.1 【文獻標志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2016）03-0010-02

粉葛為豆科植物甘葛藤Pueraria thomsonii Benth的干燥根，載于《中國藥典》[1]，具有解肌退熱、生津止渴的功效、臨床主要用于外感發(fā)熱頭痛、項背強痛、口渴等癥狀。粉葛的主要化學活性成分有葛根素、3'-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元等異黃酮類化合物[2]，具有降血壓、降血糖、保護肝臟、治療頸椎病等作用[3-4]；同時粉葛富含淀粉，因此具有較高的醫(yī)用和食用價值。近年來，文獻報道對粉葛異黃酮多指標成分的含量測定[5-8]，但是隨著粉葛栽培面積的不斷擴大，出現(xiàn)了許多栽培品種，因此不同產地藥材之間的有效成分含量存在著一定的差異，進而影響了藥材的質量。研究采用高效液相色譜法同時對廣東、廣西、安徽粉葛中四種異黃酮成分的含量，為粉葛藥材質量控制提供方法和依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters2695高效液相色譜系統(tǒng)（2998型二極管陣列檢測器）；KQ3200DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超市儀器有限公司）；Thermo超純水設備；電子分析天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；FW135中草藥粉碎機（天津市泰勒特儀器有限公司）。

[JP+2]1.2 藥品與試劑 3'-甲氧基葛根素對照品（批號：141217，成都普菲德生物技術有限公司）；葛根素對照品（批號：10752-201313）、大豆苷對照品（批號：111738-201302）、大豆苷元（批號：111502-200402）均購自中國食品藥品檢定研究院；粉葛（批號：150420，安徽本草國藥飲片有限公司；批號：150302，安徽省金芙蓉中藥飲片有限公司；批號：1504005，江西樟樹天齊堂中藥飲片有限公司）；甲醇、乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 對照品溶液的制備 精密稱取各對照品適量，分別用甲醇制成每毫升中含有葛根素0.062 mg、3'-甲氧基葛根素0.0076 mg、大豆苷0.012 mg、大豆苷元0.0164 mg即可。

2.2 供試品溶液的制備 取不同產地的粉葛粉末（過三號篩）約1.0 g，精密稱定，分別置于具塞錐形瓶中，精密加入30%乙醇100 ml，稱定重量，超聲提取30 min，放冷，再稱定重量，用30%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，過0.45 μm微孔濾膜，即得。

2.3 色譜條件 色譜柱Hypersil C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；檢測波長：250 nm；柱溫：30 ℃；流速：1.0 ml/min；進樣量：10 μl；梯度洗脫條件見表1。色譜見圖1。

2.4 方法學考察

2.4.1 線性范圍考察 分別精密吸取上述對照品溶液0.2、0.5、1、2、5、10 ml，置于10 ml容量瓶內，以甲醇定容至刻度，搖勻，0.45μm微孔濾膜濾過。分別按“2.3”項下條件測定，以峰面積（A）為縱坐標，進樣量為橫坐標（X，ng）繪制標準曲線，得到葛根素、3'-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的回歸方程，見表2。

2.4.2 精密度試驗 取混合對照品溶液，按“2.3”項色譜條件重復測定6次，測得葛根素、3'-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的峰面積RSD分別為0.52%、1.36%、1.00%、0.35%，結果表明儀器精密度良好。

2.4.3 重復性試驗 取同一來源的粉葛6份，分別按“2.2”項下制備供試品溶液，按“2.3”項下色譜條件進行測定，記錄峰面積，計算葛根素、3'-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的平均含量分別為0.29%、0.04%、0.04%、0.03%，RSD分別為1.61%、1.98%、1.50%、1.62%。結果表明本方法重復性良好。

2.4.4 穩(wěn)定性試驗 取同一來源的供試品溶液，按“2.3”項下的色譜條件，分別用于0、2、4、6、8、12 h進樣10 μL分別測定葛根素、3'-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的峰面積，RSD分別為1.02%、1.98%、1.15%、1.54%，結果表明供試品溶液在12 h內穩(wěn)定性良好。

2.4.5 加樣回收率試驗 精密稱取同一粉葛根粉末約0.5 g，置于錐形瓶中，精密加入適當量的對照品溶液，按“2.2”項下制備供試品溶液，平行制備6份。按“2.3”項下色譜條件測定，計算平均回收率和RSD，葛根素、3'-甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元的平均回收率分別為101.1%、99.86%、101.78%、103.39%，RSD分別為1.43%、1.29%、0.95%、1.21%。結果表明該方法準確可靠。[JP]

2.5 樣品含量測定 取不同產地的粉葛，分別按“2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.3”項下色譜條件測定，記錄各個成分的峰面積，以外標法計算樣品中各成分的含量，結果見表3。

3 討論

不同產地粉葛藥材中四種異黃酮類成分含量比較，葛根素：廣東>安徽>廣西；3-甲氧基葛根素：安徽>廣東>廣西；大豆苷：廣東>安徽或廣西；大豆苷元：廣東>廣西>安徽；不同產地之間含量相差較大的是3'-甲氧基葛根素，進一步的說明不同產地的環(huán)境、氣候、土壤、降水等條件對粉葛根藥材有效成分還是存在一定的影響。

本實驗通過高效液相色譜法建立對不同產地的粉葛多指標成分的含量測定，能夠更全面的控制粉葛飲片的質量，為粉葛藥材的選擇提供了一定的依據(jù)。

參考文獻

[1]國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典（一部）[S].北京： 中國醫(yī)藥科技出版社， 2015： 289.

[2]陳荔炟， 陳樹和， 劉焱文. 葛根資源、化學成分和藥理作用研究概況[J]. 時珍國醫(yī)國藥， 2006，17（11）： 2305-2306.

[3]尹麗紅， 李艷楓， 孟繁琳. 葛根的化學成分、藥理作用和臨床應用[J]. 黑龍江醫(yī)藥， 2010， 23 （3）： 371.

[4]鄭高利. 大豆異黃酮的藥理作用[J]. 中國現(xiàn)代應用藥學，1998， 15（1）： 4.

[5]王春怡， 楊方明， 李衛(wèi)民， 等. 不同來源的粉葛中總黃酮和葛根素的含量測定[J].時珍國醫(yī)國藥，2008，19 （11）： 2772-2773.

[6]張開霞， 章軍， 荊文光， 等. HPLC測定粉葛飲片中3種黃酮類成分含量[J].中國實驗方劑學雜志， 2013， 19（6）： 78-80.

[7]陸霄鶴. HPLC法測定兩種葛根中葛根素含量[J].內蒙古中醫(yī)藥， 2010，29（2）： 33-34.

[8]王新勝， 吳艷芳， 張延萍， 等. 伏牛山區(qū)野葛與粉葛中葛根素和大豆苷元含量的比較[J].中國醫(yī)院藥學雜志， 2010， 30（1）： 5-7.

（收稿日期：2015.12.19）