埃茲蛋白在小鼠圍著床期子宮中的表達(dá)與意義

謝帆，劉雪麗，肖卓妮，謝青貞*

(1.武漢大學(xué)人民醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心，武漢　430060；2.武漢大學(xué)第一臨床學(xué)院，武漢　430060)

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·實(shí)驗(yàn)研究·

埃茲蛋白在小鼠圍著床期子宮中的表達(dá)與意義

謝帆1，劉雪麗2，肖卓妮1，謝青貞1*

(1.武漢大學(xué)人民醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心，武漢430060；2.武漢大學(xué)第一臨床學(xué)院，武漢430060)

【摘要】目的探討埃茲蛋白(Ezrin)在小鼠圍著床期子宮中的表達(dá)與意義。方法以昆明小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，分別建立小鼠早孕及人工誘導(dǎo)蛻膜化模型，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)小鼠早期妊娠子中Ezrin mRNA水平，免疫組織化學(xué)(IHC)SP法檢測(cè)小鼠早期妊娠子宮中Ezrin的定位。結(jié)果(1)妊娠第1～4天(妊娠第1天記為D1)小鼠子宮Ezrin的表達(dá)：RT-PCR結(jié)果顯示，在D 1～4的小鼠子宮均可檢測(cè)到Ezrin mRNA表達(dá)，隨著妊娠天數(shù)的增加其表達(dá)量逐漸增高(P<0.05)，以D4更為顯著(P<0.01)；IHC 結(jié)果顯示，D 1～4小鼠子宮內(nèi)膜的腔上皮與腺上皮均可檢測(cè)到Ezrin蛋白的表達(dá)；IHC半定量分析結(jié)果顯示，隨著妊娠天數(shù)的增加Ezrin的蛋白水平逐漸增強(qiáng)(P<0.05)，以D4更為顯著(P<0.01)。(2)D 5胚胎著床位點(diǎn)小鼠子宮Ezrin的表達(dá)：RT-PCR結(jié)果顯示，在D5子宮著床位點(diǎn)的Ezrin mRNA表達(dá)量顯著高于非著床位點(diǎn)(P<0.01)；IHC 結(jié)果顯示，Ezrin在D5著床位點(diǎn)的免疫染色主要位于著床處下方的基質(zhì)中，在非著床點(diǎn)僅在腔上皮和基質(zhì)中有較弱的免疫染色；半定量分析結(jié)果顯示，著床點(diǎn)小鼠子宮Ezrin的蛋白水平較非著床點(diǎn)高(P<0.05)。(3)Ezrin在小鼠子宮蛻膜化過(guò)程的表達(dá)：D8和人工誘導(dǎo)蛻膜化組(蛻膜瘤)小鼠子宮Ezrin mRNA表達(dá)量顯著高于人工誘導(dǎo)蛻膜化對(duì)照組(分別為P<0.01和P<0.05)；D8小鼠子宮Ezrin mRNA表達(dá)量高于蛻膜瘤組(P<0.05)；D8和蛻膜瘤組小鼠子宮Ezrin的免疫染色均位于整個(gè)蛻膜區(qū)，人工誘導(dǎo)蛻膜化對(duì)照組小鼠子宮的Ezrin免疫染色位于腺上皮和腔上皮，基質(zhì)中未見(jiàn)Ezrin的免疫染色；IHC半定量結(jié)果顯示，D8和蛻膜瘤組小鼠子宮Ezrin的蛋白水平較人工誘導(dǎo)蛻膜化對(duì)照組高(P<0.05)，D8小鼠子宮Ezrin的蛋白水平較蛻膜瘤組高(P<0.05)。結(jié)論Ezrin在小鼠妊娠早期子宮的表達(dá)具有時(shí)間和空間差異性，可能參與小鼠胚胎著床及蛻膜化過(guò)程；激活的胚泡可能促進(jìn)小鼠Ezrin的表達(dá)。

【關(guān)鍵詞】埃茲蛋白；小鼠；子宮內(nèi)膜；胚胎著床

(JReprodMed2016，25(1)：50-55)

胚胎著床是哺乳動(dòng)物生殖過(guò)程中的重要步驟之一，是決定妊娠成功與否的關(guān)鍵[1]，但胚胎著床的確切機(jī)制尚不明確。研究表明，胚胎著床主要依賴(lài)于卵巢雌激素和孕激素，細(xì)胞因子、黏附分子、生長(zhǎng)因子和酶類(lèi)等也發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用[2]。對(duì)于胚胎著床機(jī)制的研究有助于提高人工輔助生育技術(shù)的妊娠率，并對(duì)探索抗著床避孕新途徑提供線(xiàn)索。

埃茲蛋白(Ezrin)是埃茲蛋白-根蛋白-膜突蛋白(ezrin-radixin-moesin，ERM)蛋白家族成員之一，是一種重要的連接細(xì)胞膜和細(xì)胞骨架之間的膜細(xì)胞骨架連接蛋白。近年來(lái)研究表明Ezrin通過(guò)調(diào)節(jié)黏附分子和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等途徑，參與細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與基質(zhì)之間的相互作用，在穩(wěn)定細(xì)胞形態(tài)、輔助細(xì)胞運(yùn)動(dòng)等多項(xiàng)活動(dòng)中發(fā)揮著重要作用，從而在腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移過(guò)程中扮演重要角色[3-4]。近年的研究表明，Ezrin與妊娠的建立和維持關(guān)系密切，因此Ezrin在生殖領(lǐng)域中的研究備受關(guān)注。Matsumoto等[5]的研究提示ERM蛋白和相關(guān)黏附分子引起的細(xì)胞結(jié)構(gòu)改變對(duì)于成功的胚胎著床是必需的。本文采用免疫組織化學(xué)法(IHC)及逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)方法，研究Ezrin在小鼠圍著床期子宮中的表達(dá)及意義。

材料與方法

一、實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：實(shí)驗(yàn)用性成熟的SPF級(jí)昆明種小白鼠(購(gòu)自武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)，8～12周齡，體重25～30克。飼養(yǎng)于人工控制條件下，室溫22℃，光照周期為14 h光照(06：00～20：00)，10 h黑暗；自由取食和飲水。

二、動(dòng)物模型及取材

1. 早期妊娠：下午3：00～4：00將自然發(fā)情的成年雌鼠與雄鼠以1∶1的比例合籠，第2天早晨檢查雌鼠是否有陰道栓，有陰道栓的雌鼠判定為交配成功，見(jiàn)栓當(dāng)日為妊娠第1天(D1)。于每天上午9：00取材妊娠第1～8天的小鼠子宮。妊娠第2～3天時(shí)，用生理鹽水沖洗輸卵管，胚胎分別為2～8細(xì)胞期表示妊娠正常；第4天時(shí)，用生理鹽水沖洗一側(cè)子宮角，胚胎為囊胚表示妊娠正常；妊娠第5天上午9：00，通過(guò)尾靜脈注射0.1 ml 的1%芝加哥藍(lán)(Sigma，美國(guó))，著床位點(diǎn)因血管通透性增加會(huì)變?yōu)樗{(lán)色，分別收集著床位點(diǎn)及位于著床位點(diǎn)之間的非著床位點(diǎn)組織材料。妊娠第6～8天，肉眼觀測(cè)是否發(fā)生蛻膜化確定著床位點(diǎn)。

2. 人工誘導(dǎo)蛻膜化：給健康雄性小鼠進(jìn)行輸精管結(jié)扎手術(shù)，手術(shù)后恢復(fù)至少兩周。將結(jié)扎后的雄鼠與正常雌鼠以1∶1的比例合籠。第2天早晨檢查小鼠陰道栓，見(jiàn)栓當(dāng)日記為假孕第1天。假孕第4天上午于一側(cè)子宮角注射10 μl芝麻油(Sigma，美國(guó))，人工誘導(dǎo)蛻膜化，另一側(cè)子宮角作為對(duì)照組。假孕第8天處死雌鼠，分別留取人工誘導(dǎo)蛻膜化的子宮角及對(duì)照側(cè)子宮角。

三、實(shí)驗(yàn)方法

1. 標(biāo)本的收集及檢測(cè)方法：采用頸椎脫臼法處死相應(yīng)模型和各時(shí)期的小鼠，迅速取出子宮，剔除子宮系膜，切成小段。將材料分成兩部分：一部分經(jīng)液氮速凍后保存于-70℃冰箱中，用于RNA和蛋白的提??；另一部分用4%多聚甲醛固定，乙醇梯度脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，制備成切片行免疫組化。每組各取3只小鼠。

2. RT-PCR法檢測(cè)Ezrin mRNA表達(dá)：取相應(yīng)模型小鼠子宮組織約100 mg提取總RNA，紫外分光光度計(jì)測(cè)定A260/A280范圍在1.7～2.0之間。以RNA為模板，逆轉(zhuǎn)錄獲取cDNA。

以NCBI上的小鼠Ezrin基因序列設(shè)計(jì)Ezrin引物(上游：5’-AGAGTACACGGCCAAGATCG-3’；下游：5’-TGTAGCCCATAGGCTCTGCT-3’。擴(kuò)增片段長(zhǎng)度233 bp)。以β-actin為內(nèi)參照(上游引物：5’-CACGATGGAGGGGCCGGACTCATC-3’；下游引物：5’-TAAAGACCTCTATGCCAACACAGT-3’。擴(kuò)增片段長(zhǎng)度240 bp)。PCR反應(yīng)條件為94℃ 1 min，1個(gè)循環(huán)；90℃ 30 s，60℃ 30 s，68℃ 10 min，25個(gè)循環(huán)；72℃ 10 min，4℃ 4 min，1個(gè)循環(huán)。

PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳，通過(guò)凝膠成像分析系統(tǒng)(美國(guó)Perkin Elmer Geliance 200型)攝像、測(cè)量并分析條帶的灰度值，以目的基因灰度值/內(nèi)參照基因灰度值的比值作為目的基因mRNA的相對(duì)表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取平均值。

3.IHC檢測(cè)Ezrin蛋白表達(dá)：應(yīng)用免疫組化SP法試劑盒(武漢谷歌生物)檢測(cè)，操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。兔抗小鼠Ezrin單克隆抗體購(gòu)于美國(guó)Thermo公司，用PBS代替一抗做陰性對(duì)照。陽(yáng)性反應(yīng)為棕黃色顆粒，陰性反應(yīng)為不著色；陰性對(duì)照切片無(wú)特異性著色。

光學(xué)顯微鏡下觀察Ezrin的定位和染色強(qiáng)度，采用image-proplus 6分析軟件對(duì)染色進(jìn)行半定量分析。在400倍高倍視野下，在每張切片相同區(qū)域隨機(jī)選擇5個(gè)完整的不重復(fù)的視野測(cè)定光密度，得出其平均值；每組樣本觀察5張切片，再求出每組平均值。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較采用t檢驗(yàn)和方差分析；P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

一、D1～4妊娠小鼠子宮Ezrin的表達(dá)

IHC 結(jié)果顯示，D1～4妊娠小鼠子宮內(nèi)膜的腔上皮與腺上皮均可檢測(cè)到Ezrin蛋白的表達(dá)；IHC半定量分析結(jié)果顯示，隨著妊娠天數(shù)的增加，Ezrin的蛋白水平逐漸增強(qiáng)，與妊娠D1比較，D2、D3小鼠子宮Ezrin的蛋白表達(dá)水平顯著增高(P<0.05)，D4的蛋白水平更進(jìn)一步增高(P<0.01)(圖1A、B)；RT-PCR結(jié)果顯示，在D1～4的小鼠子宮均可檢測(cè)到Ezrin mRNA的表達(dá)，隨著妊娠天數(shù)的增加其表達(dá)逐漸增高，與D1比較，妊娠D2、D3小鼠子宮Ezrin mRNA表達(dá)顯著增高(P<0.05)，D4的表達(dá)更進(jìn)一步增高(P<0.01)(圖1C、D)。

二、D5妊娠小鼠子宮Ezrin的表達(dá)

IHC結(jié)果顯示，Ezrin在D5著床位點(diǎn)的免疫染色主要位于著床處下方的基質(zhì)中，在非著床點(diǎn)僅在腔上皮和基質(zhì)中有較弱的免疫染色(圖2A)；IHC半定量分析結(jié)果顯示，著床點(diǎn)小鼠子宮Ezrin蛋白水平較非著床點(diǎn)高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(圖2B)；RT-PCR結(jié)果顯示，在D5小鼠子宮著床位點(diǎn)的Ezrin mRNA水平顯著高于非著床位點(diǎn)(P<0.01)(圖2C、D)。

三、Ezrin在小鼠子宮蛻膜化過(guò)程的表達(dá)

IHC結(jié)果顯示，D8和人工蛻膜化(蛻膜瘤)組小鼠子宮Ezrin免疫染色均位于整個(gè)蛻膜區(qū)，人工誘導(dǎo)蛻膜化對(duì)照組小鼠子宮的的Ezrin免疫染色位于腺上皮和腔上皮，基質(zhì)中未見(jiàn)Ezrin的免疫染色(圖3A)。

IHC半定量結(jié)果顯示，D8和蛻膜瘤組小鼠子宮Ezrin蛋白水平較人工誘導(dǎo)蛻膜化對(duì)照組高，各組之間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；D8小鼠子宮Ezrin的蛋白水平較蛻膜瘤組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(圖3B)。

RT-PCR結(jié)果顯示，D8的小鼠子宮Ezrin mRNA水平顯著高于人工誘導(dǎo)蛻膜化對(duì)照組(P<0.01)，蛻膜瘤組小鼠子宮Ezrin mRNA水平也顯著高于人工誘導(dǎo)蛻膜化對(duì)照組(P<0.05)；D8小鼠子宮Ezrin mRNA水平顯著高于蛻膜瘤組(P<0.05)(圖3C、D)

A和B分別為妊娠第1～4天(D1～4)小鼠子宮Ezrin免疫組化染色及灰度掃描結(jié)果；C和D分別為妊娠第1～4天(D1～4)小鼠子宮 Ezrin的RT-PCR產(chǎn)物電泳及半定量結(jié)果。M：分子量標(biāo)準(zhǔn)；le：腔上皮；ge：腺上皮。與D1比較，*P<0.05，#P<0.01；與D2比較，※P<0.05；與D3比較，△P<0.05圖1　妊娠第1～4天小鼠子宮Ezrin的表達(dá)

A和B分別為妊娠第5天小鼠子宮著床點(diǎn)(IS)和非著床點(diǎn)(NIS)Ezrin免疫組化染色及灰度掃描結(jié)果；C和D分別為妊娠第5天小鼠子宮著床點(diǎn)(D5-IS)和非著床點(diǎn)(D5-NIS)Ezrin的RT-PCR產(chǎn)物電泳及半定量結(jié)果。M：分子量標(biāo)準(zhǔn)；le：腔上皮；sc：基質(zhì)細(xì)胞。相互比較，*P<0.05，#P<0.01圖2　妊娠第5天小鼠子宮Ezrin的表達(dá)

A和B分別為人工誘導(dǎo)蛻膜化組(deciduoma)、妊娠第8天(D8)和人工蛻膜化對(duì)照組(Control)小鼠子宮Ezrin免疫組化染色及灰度掃描結(jié)果；C和D分別為人工誘導(dǎo)蛻膜化組(Dec)、妊娠第8天(D8)和人工蛻膜化對(duì)照組(C)小鼠子宮Ezrin的RT-PCR產(chǎn)物電泳及半定量結(jié)果。M：分子量標(biāo)準(zhǔn)；em：胚胎；le：腔上皮；ge：腺上皮；dc：蛻膜細(xì)胞。相互比較，*P<0.05；#P<0.01圖3　Ezrin在小鼠子宮蛻膜化過(guò)程中的表達(dá)

討論

胚胎著床是指處于活性狀態(tài)的胚泡和處于接受態(tài)的子宮之間按一定的時(shí)空順序分泌相關(guān)蛋白或局部因子從而達(dá)到相互識(shí)別、相互融合，最后導(dǎo)致胚胎滋養(yǎng)層與子宮內(nèi)膜建立緊密聯(lián)系的過(guò)程。該過(guò)程分為三個(gè)階段：定位、黏附及侵入。胚胎在植入過(guò)程中，通過(guò)活性胚泡和子宮內(nèi)膜之間的內(nèi)分泌、旁分泌等作用，首先脫去透明帶，孵化出胚泡，并定位在子宮內(nèi)膜著床點(diǎn)；滋養(yǎng)外胚層在黏附分子及其受體的作用下，黏附于子宮內(nèi)膜腔上皮組織并逐漸穿透上皮層和基底膜，最后侵入子宮基質(zhì)細(xì)胞層[6]。

在卵巢分泌的類(lèi)固醇激素的調(diào)控下基質(zhì)細(xì)胞增殖分化為蛻膜細(xì)胞的過(guò)程稱(chēng)為蛻膜化。在嚙齒動(dòng)物中，蛻膜化過(guò)程也可以通過(guò)注射人工刺激物的方式進(jìn)行誘導(dǎo)，例如向假孕子宮中注射芝麻油或?qū)ψ訉m進(jìn)行機(jī)械性搔刮等[7]。人工誘導(dǎo)的蛻膜與正常妊娠蛻膜在形態(tài)上有一定差異，但差異十分細(xì)微，多用于研究蛻膜化的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蚚8]。

Ezrin是連接細(xì)胞膜和細(xì)胞骨架之間的膜細(xì)胞骨架連接蛋白[9]。Ezrin通過(guò)氨基端伸向細(xì)胞膜直接或間接與細(xì)胞膜蛋白如細(xì)胞黏附分子CD44和CD43、細(xì)胞間黏附分子ICAM-1和ICAM-2、原癌基因c-Met、上皮細(xì)胞鈣粘蛋白E-Cadherin等結(jié)合，調(diào)節(jié)細(xì)胞間及細(xì)胞與基質(zhì)間的黏附[10]；通過(guò)羧基端伸向細(xì)胞漿與F-肌動(dòng)蛋白等細(xì)胞骨架相連接，在穩(wěn)定細(xì)胞形態(tài)、輔助細(xì)胞運(yùn)動(dòng)等多項(xiàng)活動(dòng)中發(fā)揮重要作用[11-13]。與Ezrin共表達(dá)的E-cadherin、ICAM-1/ICAM-2及整合素(integrin)等多種黏附分子已經(jīng)在小鼠胚胎著床的研究中被證實(shí)有明確的意義。研究表明，在小鼠中，整合素在子宮內(nèi)膜和胚胎的時(shí)空表達(dá)與植入窗的開(kāi)放同步，是小鼠子宮接受態(tài)的標(biāo)志[14]。由于人圍著床期子宮內(nèi)膜表達(dá)E-cadherin[15]，胚胎在胚泡期也表達(dá)E-cadherin[16]，這表明E-cadherin可能在人胚胎著床過(guò)程中起重要作用。與ICAM-1/ICAM-2同屬于免疫球蛋白超家族的Basigin也可能在胚胎著床中發(fā)揮重要作用，Basigin基因敲除小鼠有多種生殖缺陷，如雌性小鼠不育、卵母細(xì)胞受精率低，且胚胎很難在野生型母鼠子宮中著床，絕大多數(shù)突變體胚胎在圍著床期死亡[17]。Lecce等[18]研究表明，在大鼠胚胎植入過(guò)程中，Ezrin可以通過(guò)細(xì)胞骨架調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白骨架的重組，從而上調(diào)子宮內(nèi)膜容受性，促進(jìn)囊胚與子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞的黏附。

上述研究表明，Ezrin可能在胚胎著床中起重要作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，妊娠第1～4天，Ezrin表達(dá)于小鼠子宮內(nèi)膜的腔上皮與腺上皮中，表達(dá)逐漸增強(qiáng)，Ezrin的轉(zhuǎn)錄水平也逐漸增高，在妊娠第4天Ezrin在腔上皮與腺上皮表達(dá)量最高，妊娠第4天是胚胎在子宮腔定位和粘附的時(shí)期，提示Ezrin可能與早孕期著床過(guò)程中的胚胎粘附有關(guān)。免疫染色及RT-PCR檢測(cè)表明Ezrin在小鼠妊娠第5天子宮胚胎著床處下方的基質(zhì)中高表達(dá)，說(shuō)明Ezrin可能參與胚胎的著床。

在囊胚植入過(guò)程中，子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞是與囊胚滋養(yǎng)細(xì)胞緊密接觸的第一層細(xì)胞，該過(guò)程涉及到大量細(xì)胞骨架的重組及子宮內(nèi)膜細(xì)胞頂端黏附分子的增加，最關(guān)鍵的是頂端骨架蛋白的明顯改變，包括絲狀細(xì)胞骨架終末網(wǎng)在胚胎植入時(shí)的溶解分離。而大量肌動(dòng)蛋白和膜結(jié)合蛋白在子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞頂端重塑過(guò)程中發(fā)揮重要作用，而頂端胞膜黏附分子也重新分布從而參與到胚胎與子宮內(nèi)膜的黏附過(guò)程[19-20]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Ezrin在妊娠第8天及人工蛻膜化組小鼠的整個(gè)子宮蛻膜中都可以檢測(cè)到強(qiáng)的免疫染色信號(hào)及轉(zhuǎn)錄水平，妊娠第8天及人工誘導(dǎo)蛻膜化組Ezrin的轉(zhuǎn)錄及蛋白水平均顯著高于人工蛻膜化對(duì)照組，因此我們推測(cè)Ezrin可能在蛻膜化過(guò)程中起著重要的作用。

正常妊娠第5天著床點(diǎn)小鼠子宮Ezrin的轉(zhuǎn)錄及蛋白水平均高于非著床點(diǎn)，妊娠第8天小鼠子宮Ezrin的轉(zhuǎn)錄及蛋白水平較人工蛻膜化小鼠組高。以上結(jié)果均表明激活的胚泡可能誘導(dǎo)Ezrin在小鼠子宮中的表達(dá)，但具體機(jī)制不明，需要進(jìn)一步研究。

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[編輯：陸彩玲]

Expression of ezrin in mouse uterus during peri-implantation

XIEFan1，LIUXue-li2，XIAOZhuo-ni1，XIEQing-zhen1*

1.CenterforReproductiveMedicine，RenminHospitalofWuhanUniversity，Wuhan430060

2.TheFirstClinicalCollegeofWuhanUniversity，Wuhan430060

【Abstract】

Objective： To investigate the expression of ezrin in mouse uterus during peri-implantation.

Methods： Immunohistochemistry and reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) were adopted to detect the localization and expression of ezrin in mouse uterus in early pregnancy and artificial induced decidualization models.

Results： (1) Expression of ezrin in mouse uterus on day 1 to 4 (day 1=vaginal plug) of pregnancy： RT-PCR results showed that the expression of ezrin mRNA was significantly increased along with pregnancy days gradually (P<0.05)，which was prominent on day 4 of pregnancy (P<0.01). Immunohistochemistry localized ezrin protein to luminal epithelium and glandular epithelium in endometrium，and the signal of ezrin protein was also significantly enhanced along with pregnancy days gradually (P<0.05)，which reached the highest on day 4 of pregnancy by semi-quantitative analysis (P<0.01)；(2) Expression of ezrin in implanted sites on day 5 of pregnancy： RT-PCR results showed that ezrin mRNA was up-regulated in implantation sites on day 5 of pregnancy compared with inter-implantation sites (P<0.01). Immunohistochemistry results showed that ezrin protein was localized in subluminal stroma surrounding implanted embryo in implantation sites，while it was weakly detected in luminal epithelium and glandular epithelium in inter-implantation sites. The expression of ezrin protein in implantation sites on day 5 of pregnancy was higher than that of in inter-implantation sites (P<0.05) by semi-quantitative analysis；(3) Expression of ezrin during decidualization： Ezrin mRNA were significantly higher expressed in implantation sites on day 8 of pregnancy or deciduoma in artificially induced decidualization when compared with the control group of artificially induced decidualization (P<0.01 andP<0.05，respectively). In addition，the expression of ezrin mRNA was significantly higher on day 8 of pregnancy than that in deciduoma (P<0.05). The immunostaining of ezrin in deciduoma group and on day 8 of pregnancy were positively located over the whole decidua area，while ezrin was localized in glandular epithelium and luminal epithelium rather than stroma in control group. Semi-quantitative analysis showed that the optical density value of immunostaining on day 8 of pregnancy or in deciduoma group was significantly higher than that in control group(P<0.05)，and the value on day 8 of pregnancy was significantly higher than that in deciduoma group (P<0.05).

Conclusions： Ezrin was spatiotemporally expressed in mouse uterus during early pregnancy and may be involved in embryo implantation and decidualization. Ezrin expression in mouse uterus is induced by the activated blastocyst.

Key words：Ezrin；Mouse；Endometrium；Embryo implantation

【作者簡(jiǎn)介】謝帆，女，湖北人，碩士，生殖內(nèi)分泌專(zhuān)業(yè).(*通訊作者)

【收稿日期】2015-06-05；【修回日期】2015-08-11

DOI：10.3969/j.issn.1004-3845.2016.1.010