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    碳酸酐酶Ⅱ基因多態(tài)性與原發(fā)性開角型青光眼遺傳易感性的關系

    2016-02-27 05:57:13吳安黛葉鋅銘高和香
    國際眼科雜志 2016年2期
    關鍵詞:碳酸酐酶基因多態(tài)性

    吳安黛,葉鋅銘,高和香,李 俊,趙 晨

    ?

    碳酸酐酶Ⅱ基因多態(tài)性與原發(fā)性開角型青光眼遺傳易感性的關系

    吳安黛1,葉鋅銘1,高和香1,李俊1,趙晨2

    Relationship of carbonic anhydrase Ⅱ gene polymorphism with primary open angle glaucoma genetic susceptibility

    An-Dai Wu1, Xin-Ming Ye1, He-Xiang Gao1, Jun Li1, Chen Zhao2

    Citation:Wu AD, Ye XM, Gao HX,etal. Relationship of carbonic anhydrase Ⅱ gene polymorphism with primary open angle glaucoma genetic susceptibility.GuojiYankeZazhi(IntEyeSci) 2016;16(2):234-236

    摘要

    目的:分析碳酸酐酶Ⅱ基因多態(tài)性與原發(fā)性開角型青光眼遺傳易感性的關系。

    方法:選取2012-01/2014-12在麗水市人民醫(yī)院進行診治的原發(fā)性開角型青光眼患者(觀察組)50例與在麗水市人民醫(yī)院門診部體檢的健康人(對照組)50例進行試驗觀察,常規(guī)肘靜脈取血,使用聚合酶鏈反應和限制性片段長度多態(tài)性技術測試碳酸酐酶Ⅱ基因多態(tài)性的特點。

    結果:兩組患者在和rs10504813位點rs3758078位點的分布符合哈迪-溫伯格平衡定律(Hardy-Weinberg equilibrium),且試驗結果顯示在rs10504813位點中,兩組的基因型頻率的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),但在等位基因頻率分布之間的差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05);兩組在rs3758078位點的基因型頻率以及等位基因頻率的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。兩組患者在碳酸酐酶Ⅱ基因多態(tài)性進行單倍型分析發(fā)現(xiàn),TAC單倍型攜帶者出現(xiàn)原發(fā)性開角型青光眼的風險較小。

    結論:碳酸酐酶Ⅱ基因多態(tài)性與原發(fā)性開角型青光眼的患病風險存在一定的關聯(lián),rs3758078位點基因平衡可能是患病風險低的主要原因;TAC單倍型攜帶者出現(xiàn)原發(fā)性開角型青光眼的風險較小。

    關鍵詞:碳酸酐酶Ⅱ基因多態(tài)性;原發(fā)性開角型青光眼;遺傳易感性

    引用:吳安黛,葉鋅銘,高和香,等.碳酸酐酶Ⅱ基因多態(tài)性與原發(fā)性開角型青光眼遺傳易感性的關系.國際眼科雜志2016;16(2):234-236

    0 引言

    目前醫(yī)學界中對于碳酸酐酶Ⅱ基因多態(tài)性與原發(fā)性開角型青光眼的遺傳易感性關系尚未有比較明確的學說和理論支持[1]。我們通過選取麗水市人民醫(yī)院50例原發(fā)性開角型青光眼患者與50例健康人進行碳酸酐酶Ⅱ基因多態(tài)性與原發(fā)性開角型青光眼的遺傳易感性關系探索,現(xiàn)研究如下。

    1 對象和方法

    1.1對象選取2012-01/2014-12在麗水市人民醫(yī)院進行診治的原發(fā)性開角型青光眼患者(觀察組)50例與在麗水市人民醫(yī)院門診部體檢的健康人(對照組)50例進行試驗觀察,觀察組50例患者中有男28例,女22例,年齡23~73(平均40.6±0.8)歲,病程為3~13(平均3.2±1.5)mo;對照組50例健康人中有男26例,女24例,年齡25~75(平均41.3±1.0)歲。觀察組患者均符合下述條件:(1)高眼壓下房角鏡可觀察到房角開發(fā)[2]。(2)檢測到患者眼壓超過21mmHg至少兩次,且1d內(nèi)眼壓波動超過6~8mmHg[3]。(3)眼底檢查:C/D≥0.3,并且出現(xiàn)不同程度的視盤改變[4]。(4)視野檢查發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)不同程度的青光眼性視野缺損[5]。(5)OCT檢測發(fā)現(xiàn)患者出現(xiàn)視神經(jīng)纖維層損壞[6]。對照組所選健康人無原發(fā)性開角型青光眼家族患病史、其他類型眼部疾病。

    1.2方法兩組患者常規(guī)肘靜脈取血3~5mL,使用乙二胺四乙酸鈉鹽抗凝,并于-70℃冷庫中保存。使用酚抽提法提取DNA,并使用PCR和限制性片段長度多態(tài)性技術測試碳酸酐酶Ⅱ基因多態(tài)性的特點[7]。聚合酶鏈反應提取20μL,pH8.2蒸餾水13μL,聚合酶鏈反應緩沖液1μL,Thermusaquaticus聚合酶0.5μL。聚合酶鏈反應條件為97℃時預變性300s,并以下述條件進行30個循環(huán):94℃變性0.17min,50℃退火0.5min,72℃延伸0.5min,并與70℃時延伸600s。使用聚合酶鏈反應擴增后,取50~100ng聚合酶鏈產(chǎn)物進行限制性核酸內(nèi)切酶消化試驗。觀察兩組的基因分布特點,分析碳酸酐酶Ⅱ基因多態(tài)性與原發(fā)性開角型青光眼遺傳易感性的關系。

    2 結果

    2.1 rs10504813位點的基因分布特點在rs10504813位點中,兩組的基因型分布符合哈迪-溫伯格平衡定律(Hardy-Weinberg equilibrium)且兩組的基因型頻率的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),但在等位基因頻率分布之間的差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05),見表1。

    2.2 rs3758078位點基因分布特點兩組患者在rs3758078位點的分布符合哈迪-溫伯格平衡定律(Hardy-Weinberg equilibrium),兩組在rs3758078位點的基因型頻率以及等位基因頻率的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),見表2。

    2.3單倍型分析兩組患者在碳酸酐酶Ⅱ基因多態(tài)性進行單倍型分析發(fā)現(xiàn),TAC單倍型攜帶者出現(xiàn)原發(fā)性開角型青光眼的風險較小。

    3 討論

    青光眼是臨床中一種常見的眼部疾病,其具有較高的遺傳患病風險,原發(fā)性開角型青光眼(primary open angle glaucoma,POAG)是青光眼發(fā)病率較高的一種類型,約占青光眼總類型的50%[8]。碳酸酐酶抑制劑(carbonic anhydrase inhibitors)是臨床中一種治療青光眼高眼壓的藥物,碳酸酐酶Ⅱ在眼球中具有較高的敏感性,也是房水生成過程中的重要同工酶[9]。

    碳酸酐酶是一種含鋅金屬酶,其能夠逆向性促進二氧化碳溶水反應,并對于人體各種生理活動起到了重要的作用[10]。相關文獻指出,在高等脊椎動物中目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了有15種同工酶,其主要對呼吸循環(huán)、體液分泌、生物合成反應、腫瘤產(chǎn)生以及骨質(zhì)的吸收等生理功能反應進行參與[11]。在15種同工酶中,醫(yī)學界對于碳酸酐酶Ⅱ基因的研究較多,發(fā)現(xiàn)其在同工酶中的二氧化碳水合效率最高[12]。碳酸酐酶Ⅱ由單個基因編碼構成,也就是碳酸酐酶Ⅱ基因。碳酸酐酶Ⅱ基因在人體中多個組織中存在,例如肺泡、腎小管、腦組織等。二氧化碳雖然在自然的環(huán)境中也能夠進行水合反應,但碳酸酐酶Ⅱ基因能夠大大的提高水合反應效率[13]。碳酸酐酶Ⅱ促進二氧化碳水合反應雖然是一個簡單的化合反應,但是其反應生成的二氧化碳、氫分子與碳酸氫根與青光眼的出現(xiàn)有一定的聯(lián)系。

    抑制睫狀體上皮細胞中存在著碳酸酐酶Ⅱ,主要是為了控制眼壓,當碳酸酐酶Ⅱ使得二氧化碳水合反應而產(chǎn)生的碳酸氫根由細胞分泌或血管滲透等途徑流向房水中,而機體為了使得房水中的電解質(zhì)平衡,房水中的鈉分子增加,使得房水的滲透壓增加,并且讓體內(nèi)的水分向房水滲透,維持房水中的酸堿平衡。而有效的抑制碳酸酐酶Ⅱ,能夠減少水合反應生成的碳酸氫根,降低房水的產(chǎn)生以此達到降低眼壓的目的。目前醫(yī)學界對于碳酸酐酶Ⅱ的研究僅在心肌梗塞、癌癥與腫瘤生成等進行[14]。青光眼具有較高的致殘率,且我國的青光眼患者約占總人數(shù)的0.23%~1.68%,且大部分青光眼呈現(xiàn)出具有遺傳性特征,在DNA的遺傳中呈現(xiàn)顯性或隱性。原發(fā)性開角型青光眼的直系親屬的發(fā)病風險是正常人的10倍。原發(fā)性開角型青光眼的遺傳敏感性是由多個基因完成的,單個基因點位對碳酸酐酶Ⅱ基因多態(tài)性與原發(fā)性開角型青光眼的相關性研究所提供的信息是有限的[15]。因此,我們選取了2個基因點位進行聚合酶鏈反應,兩組患者在和rs10504813位點、rs3758078位點的分布符合哈迪-溫伯格平衡定律(Hardy-Weinberg equilibrium),且試驗結果顯示在rs10504813位點中,兩組的基因型頻率的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),但在等位基因頻率分布之間的差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05);兩組在rs3758078位點的基因型頻率以及等位基因頻率的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。兩組患者在碳酸酐酶Ⅱ基因多態(tài)性進行單倍型分析發(fā)現(xiàn),TAC單倍型攜帶者出現(xiàn)原發(fā)性開角型青光眼的風險較小。從中可以推斷出,碳酸酐酶Ⅱ基因多態(tài)性與原發(fā)性開角型青光眼具有一定的關系,能夠為臨床研究原發(fā)性開角型青光眼遺傳易感性提供可參考的依據(jù)。

    表1 兩組患者在rs10504813位點中的基因型分布個(%)

    表2 兩組患者在rs3758078位點中的基因型分布個(%)

    參考文獻

    1 黃一鴻.CYP1B1基因突變與原發(fā)性開角型青光眼發(fā)病關系的研究進展.中華實驗眼科雜志2014;32(7):654-658

    2 王鳳云,李楊,蘭蘭,等.中國原發(fā)性開角型青光眼一家系MYOC基因的突變分析.中華實驗眼科雜志2014;32(8):728-733

    3 劉鐵城.青少年開角型青光眼臨床表型及遺傳學特征.解放軍醫(yī)學院學報2014;35(7):778-780

    4 王建文,孫慧敏.開角型青光眼相關基因的研究.國際眼科雜志2005;5(4):711-714

    5 魏雁濤,段山,葛堅,等.廣州開角型青光眼家系致病基因定位與功能初步研究.中華眼科雜志2005;41(12):1068-1075

    6 孔琛柯,郭建新,劉小云,等.原發(fā)性開角型青光眼家系MYOC基因突變研究.中國實用眼科雜志2013;31(8):1068-1071

    7 田強,李富華,趙堪興,等.原發(fā)性開角型青光眼家系一新的myocilin基因突變.中華醫(yī)學遺傳學雜志2007;24(6):629-634

    8 劉莛,賀翔鴿.原發(fā)性開角型青光眼家系致病基因的定位研究.眼科研究2009;27(5):401-406

    9 石珂,汪昌運,彭愛民,等.原發(fā)性開角型青光眼家系的遺傳學特征分析.山東醫(yī)藥2010;50(18):99-100

    10 高次子,李壽玲,江江,等.一原發(fā)性開角型青光眼家系的臨床特點及致病基因的篩查.安徽醫(yī)科大學學報2011;46(3):265-269

    11 張麗娜.LOXL1基因rs2165241C/T多態(tài)性與開角型青光眼易感性的meta分析.浙江臨床醫(yī)學2013;12(10):1553-1554

    12 范寶劍,梁旭輝,彭智培,等.原發(fā)性開角型青光眼患者Myocilin基因的單核苷酸多態(tài)性.中華醫(yī)學遺傳學雜志2004;21(1):70-73

    13 寧波,付玲玲.原發(fā)性開角型青光眼Myocilin蛋白的結構和遺傳性.中國實用眼科雜志2013;31(2):108-110

    14 李中國,張虹.MYOC/TIGR基因與原發(fā)性開角型青光眼.眼科研究2004;22(6):669-672

    15 金曉紅,孫興懷.原發(fā)性開角型青光眼的遺傳學進展.中國實用眼科雜志2002;20(1):7-11

    ·臨床論著·

    Foundation item:National Natural Science Foundation of China(No.81222009)

    1Department of Ophthalmology, Lishui People’s Hospital,Lishui 323000, Zhejiang Province, China;2Department of Ophthalmology, the First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University,Nanjing 210029, Jiangsu Province, China

    Correspondence to:An-Dai Wu. Department of Ophthalmology, Lishui People’s Hospital,Lishui 323000, Zhejiang Province, China. 3183339200@qq.com

    Received:2015-09-23Accepted:2016-01-11

    Abstract

    ?AIM:To analyze the relationship of carbonic anhydrase Ⅱ gene polymorphism with primary open angle glaucoma genetic susceptibility.

    ?METHODS:From January 2012 to December 2014, 50 cases in our hospital for treatment of primary open angle glaucoma (study group) and 50 cases in outpatient department of our hospital for health examination (control group) were tested. The conventional elbow venous blood was taken. The use of polymerase chain reaction (PCR) and restriction fragment length polymorphism test were used to detect the characteristics of carbonic anhydrase Ⅱ gene polymorphism.

    ?RESULTS:The locus site of rs3758078 and rs10504813 of the two groups were in line with Hardy - Weinberg equilibrium law (Hardy-Weinberg equilibrium).The results displayed in rs10504813 site, the difference of genotype frequencies between the two groups was not statistically significant (P>0.05). But the difference in allele frequencies between the two groups was statistical significance (P<0.05). The differences of locus genotype and allele frequencies between the two groups in rs3758078 had no statistical significance (P>0.05). After the carbonic anhydrase Ⅱ polymorphism haplotype analysis in the two groups, TAC(Tracking area code of cell served by neighbor Enb) haplotype carriers appeared lawer risk of primary open-angle glaucoma.

    ?CONCLUSION:There is certain relation between the polymorphism and the risk of carbonic anhydrase primary open-angle glaucoma, and rs3758078 locus balance may be the main reason for low risk;TAC haplotype carriers appear lower risk of primary open angle glaucoma.

    KEYWORDS:?carbonic anhydrase Ⅱ gene polymorphism;primary open angle glaucoma;genetic predisposition

    DOI:10.3980/j.issn.1672-5123.2016.2.09

    收稿日期:2015-09-23 修回日期: 2016-01-11

    通訊作者:吳安黛.3183339200@qq.com

    作者簡介:吳安黛,本科,住院醫(yī)師,研究方向:青光眼。

    基金項目:作者單位:1(323000)中國浙江省麗水市人民醫(yī)院眼科;2(210029)中國江蘇省南京市,南京醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院眼科

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