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    燃料乙醇生產(chǎn)中提高酵母發(fā)酵能力方法概述

    2016-02-23 11:16:08張譯之王慧中
    西部皮革 2016年20期
    關(guān)鍵詞:耐受性木質(zhì)釀酒

    張譯之,王慧中

    (四川大學(xué)建筑與環(huán)境學(xué)院,四川 成都 610065)

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    燃料乙醇生產(chǎn)中提高酵母發(fā)酵能力方法概述

    張譯之,王慧中

    (四川大學(xué)建筑與環(huán)境學(xué)院,四川 成都 610065)

    木質(zhì)纖維素水解液含有許多抑制性物質(zhì)降低了發(fā)酵效率,為了提高發(fā)酵效率,提高釀酒酵母耐受性,使之在環(huán)境迫脅條件下可以有效地進行發(fā)酵。本文對提高酵母發(fā)酵性能的方法進行概述。

    燃料乙醇;酵母;耐受性

    前言

    木質(zhì)纖維素水解液中主要有葡萄糖、木糖、半乳糖和阿拉伯糖,但酵母只能利用己糖發(fā)酵,降低生產(chǎn)效率[1]。微生物利用木質(zhì)纖維素發(fā)酵產(chǎn)乙醇的過程中不利的因素大致分為三類,第一是溫度及pH不在酵母的最適范圍內(nèi)。第二,木質(zhì)纖維素水解糖化過程中產(chǎn)生的小分子環(huán)狀有毒化合物,對酵母的生長及發(fā)酵有抑制作用。第三,木質(zhì)纖維素糖化發(fā)酵中高濃度糖和乙醇對酵母的生長發(fā)酵有抑制作用。我們只有通過提高酵母的耐受性,使之對各種環(huán)境迫脅條件的適應(yīng)范圍提升,才能有效解決生產(chǎn)成本與生產(chǎn)效率的問題。

    1 隨機突變

    有研究通過反復(fù)紫外誘變且在含有木質(zhì)纖維素水解液平板上進行篩選,得到了對該水解液有耐受性的酵母。該實驗中,經(jīng)過三輪紫外誘變的酵母突變菌株可以在75%(v/v)的木質(zhì)纖維素水解液中生長。突變子在60%的水解液中發(fā)酵,野生型發(fā)酵不進行。同樣是紫外誘變,又有人獲得了優(yōu)秀的突變菌株在加入乙酸的合成培養(yǎng)基中,突變子可以在含8g/L乙酸中生長,野生型僅能在含7g/L乙酸中生長,但發(fā)酵性能優(yōu)于突變子[2]。紫外誘變可以加快突變發(fā)生的概率,但突變的方向不確定,突變菌株在某些性能方面優(yōu)于出發(fā)菌株,還需通過其他手段賦予突變菌株其他優(yōu)良性能。

    2 基因重組

    有人利用原生質(zhì)體融合技術(shù)將分別具有好的乙醇和抑制劑耐受菌株與高效利用木糖菌株融合,產(chǎn)生兼具兩者優(yōu)勢的雜合子。將S.cerevisiae NCIM-3090分別與三種不同的戊糖發(fā)酵菌株S.shehatae NCIM-3500、P.tannophilus NCIM-3502和S.stipitis NCIM-3507融合得到可利用己糖和戊糖的菌株,對其進行發(fā)酵評價,三種雜合子在混合糖的發(fā)酵液中發(fā)酵性能均比出發(fā)菌株好,乙醇產(chǎn)率均高于出發(fā)菌株[3]。雜交和原生質(zhì)體融合都可以快速獲得我們想要的菌株表現(xiàn)型,相比較隨機突變目的性較強,反復(fù)原生質(zhì)體融合獲得的雜合子,性能可以快速改善,但它的染色體倍數(shù)很可能是不確定的,這樣的雜合子即使擁有了優(yōu)良的性能,也很有可能在今后的傳代過程中丟失其性能,具有不穩(wěn)定性。

    3 代謝工程

    釀酒酵母乙醇生產(chǎn)中提高釀酒酵母的乙醇耐受性是提高發(fā)酵效率的關(guān)鍵。ATH1是編碼酸性海藻糖的基因,海藻糖能穩(wěn)定細(xì)胞膜和蛋白質(zhì),保護細(xì)胞抵御脅迫。有研究將ATH1基因分別與ADH1、CYC1和ATH1啟動子融合,插入到質(zhì)粒中并導(dǎo)入釀酒酵母。含有ATH1基因的3株重組釀酒酵母菌的酸性海藻糖酶表達(dá)水平均有所降低,與出發(fā)菌相比,釀酒酵母重組菌的乙醇產(chǎn)量更高,乙醇生成速率也更快。所以說抑制海藻糖酶的表達(dá)水平可以提高釀酒酵母對乙醇的抗性[4]。傳統(tǒng)的代謝工程的確有目的性更明確的優(yōu)點,但是這種方法也具有一定的局限性,微生物體內(nèi)的代謝網(wǎng)絡(luò)是十分復(fù)雜的,我們在基因改造時會忽略了基因間的相互作用,使得難以達(dá)到預(yù)期的效果。

    釀酒酵母有其獨有的乙醇產(chǎn)率高,收率高、乙醇耐受性好的特點,且具有食品安全性,這使得其廣泛用于燃料乙醇的工業(yè)生產(chǎn),但是以木質(zhì)纖維素水解液為原料的燃料乙醇生產(chǎn)中,有很多因素都抑制了釀酒酵母的發(fā)酵,所以釀酒酵母耐受性的提升很有必要。每一種技術(shù)手段都有其優(yōu)點和缺點,在優(yōu)化釀酒酵母的時候,應(yīng)結(jié)合酵母本身的特性,多種技術(shù)手段相結(jié)合,優(yōu)化工程菌。

    [1] Jeffries TW,Jin Y-S(2004)Metabolic engineering for improved fermentation of pentoses by yeasts.Appl Microbiol Biotechnol 63(5):495-509.

    [2] Harner NK,Bajwa PK,Habash MB,Trevors JT,Austin GD,Lee H(2014)Mutants of the pentose-fermenting yeast Pachysolen tannophilus tolerant to hardwood spent sulfite liquor and acetic acid.Antonie van Leeuwenhoek 105:29-43.

    [3] Kumari R,Pramanik K(2012)Improved bioethanol production using fusants of Saccharomyces cerevisiae and xylose-fermenting yeasts.Appl Biochem Biotechnol 167:873-884.

    [4] Jung YJ,Park HD.Antisense-mediated inhibition of acid trehalase(ATH1)gene expression promotes ethanol fermentation and tolerance in Saccharomyces cerevisiae.Biotechnol Lett,2005,27:1855-1859.

    張譯之(1992-),女,漢族,陜西西安人,碩士在讀,四川大學(xué)建筑與環(huán)境學(xué)院,研究方向:環(huán)境微生物工程。

    S216

    A

    1671-1602(2016)20-0033-01

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