高效液相色譜法測(cè)定玉米赤霉烯酮的方法

◎ 林有裕

（福建省糧油科學(xué)技術(shù)研究所，福建 福州 350002）

高效液相色譜法（HPLC）是當(dāng)前最為常用的物質(zhì)檢測(cè)與分離技術(shù)[1]，該種檢測(cè)方法隸屬于色譜法，流動(dòng)相為液體，借助高壓輸液體系，將極性不同、比例不同的混合劑、緩沖劑等這些流動(dòng)相裝入到固定相色譜柱之中，處在柱內(nèi)環(huán)境中的各成分分離后，利用檢測(cè)器來開展檢測(cè)活動(dòng)，旨在實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的科學(xué)性分析。為了提升谷物的質(zhì)量與安全性，可借助HPLC方法來對(duì)構(gòu)成健康威脅的玉米赤霉烯酮進(jìn)行檢測(cè)，以保證人、動(dòng)物食用的安全性。

玉米赤霉烯酮（ZEN）又稱F-2毒素，是隸屬于鐮刀菌的霉菌霉素[2]。該種霉素具有一定的污染性，且主要的污染對(duì)象為玉米、大米、小麥等。ZEN具有免疫毒性與生殖發(fā)育毒性，會(huì)對(duì)人、動(dòng)物造成腫瘤疾病，對(duì)人、動(dòng)物的生命健康產(chǎn)生極大威脅。ZEN屬于一種生殖系統(tǒng)霉素，易導(dǎo)致畸形問題的發(fā)生，且會(huì)大大降低家畜的生長(zhǎng)速度、繁殖性障礙與免疫性抑制，對(duì)于畜牧業(yè)會(huì)造成嚴(yán)重的威脅。為提升谷物的安全性，保證人、動(dòng)物食用的安全性，國(guó)家對(duì)ZEN的含量進(jìn)行限定，要求玉米、小麥中ZEN的限量標(biāo)準(zhǔn)是不高于60 μg/kg。若空氣濕度高于85%，此時(shí)禾谷鐮刀菌就會(huì)產(chǎn)生大量的霉菌，且這些霉菌已經(jīng)逐漸得到繁殖，最終產(chǎn)生玉米赤霉烯酮毒素[3]。

HPLC是色譜法中的一種重要方法，將流動(dòng)相設(shè)定為液體，借助高壓輸液系統(tǒng)把極性不同的單一性溶劑、比例不同的緩沖液與混合劑等泵入到色譜柱內(nèi)，處在柱內(nèi)環(huán)境中的各成分分離后，利用檢測(cè)器來檢測(cè)樣品含量，旨在實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的科學(xué)性分析。通過對(duì)比多種檢測(cè)方法，HPLC最具資格，也最為合適，盡管使用HPLC檢測(cè)方法前期所耗費(fèi)的成本較高，但該方法操作簡(jiǎn)單、穩(wěn)定性強(qiáng)、靈敏度，值得在谷物檢測(cè)ZEN中應(yīng)用。

1 高效液相色譜法測(cè)定玉米赤霉烯酮的操作方法

（1）試驗(yàn)儀器與試劑。型號(hào)為HP1100的液相色譜儀（美國(guó)惠普）；ZEN標(biāo)準(zhǔn)液；質(zhì)量為1.0 mg、濃度為99%的ZEN（美國(guó)西格馬公司），加入足量的乙腈溶解，將溶液稀釋到10.0 mL，濃度為100.0 μg/mL，儲(chǔ)存于冰箱；0.02 mol/L的乙酸銨溶液：稱量乙酸銨（分析純）1.54 g，并加入一定的水溶解，將該溶液稀釋到1 000 mL，并經(jīng)濾膜過濾；甲醇、乙腈，為色譜純。

（2）試驗(yàn)方法。①色譜條件。HPLC的應(yīng)用必須具備足夠的色譜條件?；旧V條件包括：將Hypersil ODS-C18設(shè)定為色譜柱，規(guī)格為（250.0 mm×4.6 mm，5.0 μm）；將甲醇、乙酸銨作為為流動(dòng)相，甲醇為0.02 mol/L，乙酸銨為（70∶30，V/V）；檢測(cè)波長(zhǎng)為236.0 nm；柱溫設(shè)定為24 ℃；流速為1.0 mL/min；進(jìn)樣量為20 μL。②樣品檢測(cè)。應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行科學(xué)性地處理，操作者及時(shí)將谷物、糧食樣品搗碎，并攪拌均勻，提取樣品量為10 mg，并加入20.0 mL乙腈，并準(zhǔn)備好振搖器，振搖3 min后，過濾，在50 ℃氮的條件下取出濾液10.0 mL并吹干，此時(shí)，應(yīng)加入乙腈1.0 mL，并及時(shí)將殘?jiān)芙猓瑢?duì)其進(jìn)行直接性的測(cè)定。③檢測(cè)波長(zhǎng)。通過試驗(yàn)研究，ZEN在乙腈溶液中的最大吸收波長(zhǎng)為236.0 nm，因此，在波長(zhǎng)為236.0 nm的條件下測(cè)定ZEN含量。④設(shè)定線性范圍。在1.0～9.0 μg/mL條件下，得出峰面積（y）與濃度（x）的相關(guān)關(guān)系，列出關(guān)于ZEN的回歸方程。依照儀器噪音的3倍計(jì)算濃度，樣品規(guī)格設(shè)定為10.0 g，并提取乙腈20.0 mL，檢出限為5.0 μg/kg。⑤方法的精確度。樣品中的ZEN濃度分別為27.6、196.0、728.0 μg/kg時(shí)，測(cè)定6次，且標(biāo)準(zhǔn)差變化范圍控制在3.0%～6.8%。

2 結(jié)果

試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用高效液相色譜法來檢測(cè)玉米赤霉烯酮，無須使用免疫親和柱，可大大降低成本，其提取過程更加簡(jiǎn)單，檢測(cè)效率高，最低檢出限要明顯低于國(guó)家的限量標(biāo)準(zhǔn)，且成本低、穩(wěn)定性高、靈敏度強(qiáng)，值得在ZEN檢測(cè)中應(yīng)用。

3 結(jié)語

谷物是人、動(dòng)物日常生活中不可缺少的食物，其存在價(jià)值不容忽視。為保證谷物的安全性，必須加強(qiáng)對(duì)谷物成分的檢測(cè)，強(qiáng)化對(duì)高效液相色譜法的應(yīng)用，科學(xué)選擇流動(dòng)相，控制各項(xiàng)檢測(cè)參數(shù)與指標(biāo)，能大大提高檢測(cè)效果。借助高效液相色譜法來檢測(cè)玉米赤霉烯酮，該試驗(yàn)方法操作起來相對(duì)簡(jiǎn)單，且成本低、穩(wěn)定性高、靈敏度也強(qiáng)，值得在玉米等谷物中玉米赤霉烯酮檢測(cè)系統(tǒng)中應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)：

[1]姚秀娟，王書舟，王志強(qiáng).免疫親和柱-高效液相色譜法測(cè)定食用油中玉米赤霉烯酮[J].河南預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2016（9）：661-663.

[2]崔曉娜，李 舫，王洪濤，等.高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定糧谷及飼料中玉米赤霉烯酮及其代謝物和伏馬毒素B1、B2[J].中國(guó)畜牧雜志，2015（4）：62-66.

[3]任丹丹，李少暉，謝云峰，等.高效液相色譜法測(cè)定原糧中玉米赤霉烯酮的改進(jìn)研究[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)，2015（4）：1162-1166.