《中藥大辭典》記載的抗真菌中藥體外藥效再評價

吳晶 王亮 曹永兵 閻瀾 姜遠英

(中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院新藥研究中心，上海 200433)

·論著·

《中藥大辭典》記載的抗真菌中藥體外藥效再評價

吳晶 王亮 曹永兵 閻瀾 姜遠英

(中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院新藥研究中心，上海 200433)

目的 對《中藥大辭典》中記載有抗真菌藥理作用的127種中藥醇提物進行體外抗深部感染真菌 (白念珠菌、新生隱球菌、煙曲霉)的研究。方法 采用75%乙醇超聲提取法對127種中藥進行統(tǒng)一提取，參考CLSI微量液基稀釋法M27-A3和M38-A2方案進行抗白念珠菌、新生隱球菌、煙曲霉的最低抑菌濃度 (MIC)測定，并進一步考察其抗菌譜及抑制菌絲作用。結(jié)果 在2 mg/mL濃度下，僅博落回等17種中藥、月季花等34種中藥、黃柏等5種中藥分別對白念珠菌、新生隱球菌、煙曲霉有抑制作用，其中博落回和粉萆薢的抗菌譜廣；在4 mg/mL濃度下，127種中藥中僅粉萆薢和藜蘆能完全抑制菌絲生長，最低濃度分別為200 μg/mL和500 μg/mL。結(jié)論 首次用統(tǒng)一標準對《中藥大辭典》中記載的抗真菌中藥進行體外活性篩選，并對其藥效進行再評價，為新型抗真菌藥物開發(fā)提供理論依據(jù)和參考。

《中藥大辭典》；抗真菌；中藥；白念珠菌；新生隱球菌；煙曲霉

[Chin J Mycol，2016，11(6):348-353]

深部真菌感染的發(fā)病率和死亡率日益增加，臨床上常見的抗真菌藥物 (兩性霉素B脂質(zhì)體、氟康唑、棘白菌素類等)存在抗菌譜窄、耐藥性嚴重、價格高且均有不同程度毒副作用等問題[1-2]。傳統(tǒng)中藥是中華民族的偉大寶庫，歷史悠久、臨床療效顯著，在化學(xué)結(jié)構(gòu)和作用機制方面均存在多樣性，值得我們?nèi)ド钊胪诰?。《中藥大辭典 (第二版)》對中藥的抗真菌藥理活性和臨床療效有較為全面的收錄，如收錄的一枝黃花對紅色毛癬菌有極強殺菌作用，其水煎醇提液有抗白念珠菌作用，其療效與制菌霉素相當；丁香中丁香酚體外對多種皮膚癬菌有抑殺作用；白屈菜中白屈菜紅堿和血根堿混合物具抗真菌作用，對犬小孢子菌和絮狀表皮癬菌及煙曲霉有抗真菌活性；黃柏其水煎劑對多種致病性皮膚癬菌均有不同程度抑制作用；黃連其水煎劑對紫色毛癬菌、白念珠菌、絮狀表皮癬菌等14種皮膚真菌呈抑制作用等。但其收錄標準不一，對應(yīng)的參考文獻較為零散，且年代較早，不同實驗室對中藥的提取方法不一、篩選方法未能標準化，不能在同一水平進行活性強弱的比較，有些中藥產(chǎn)生抗真菌活性的濃度較高，實際應(yīng)用價值較低；且研究多數(shù)限于淺表部感染真菌，對深部真菌感染的探究較少[3-4]。目前日益嚴重的侵襲性真菌感染致死率高，從資源豐富的中藥中尋找有臨床應(yīng)用價值的抗深部真菌感染藥物有重要意義[5-7]。因此，本研究對《中藥大辭典》中報道的具有抗真菌作用的中藥再次進行考證，旨在建立科學(xué)、規(guī)范、實用、統(tǒng)一的標準對抗深部真菌作用進行體外藥效再評價，并研究其對白念珠菌菌絲的抑制作用?；钚暂^好的中藥進一步擴大抗菌譜，探究其對非白念珠菌和常見皮膚癬菌的抑制作用，為中藥現(xiàn)代化和新型抗真菌藥物的研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

菌株 白念珠菌 (Candidaalbicans)標準菌SC5314、敏感菌Y0109由美國華盛頓喬治敦大學(xué)的WilliamA.Fonzi教授惠贈，白念珠菌耐藥菌 (Candidaalbicans)102、103、近平滑念珠菌 (Candidaparapsilosis)ATCC 22019、光滑念珠菌 (Candidaglabrata)537、新生隱球菌 (Cryptococcusneoformans)32609、石膏樣小孢子菌 (Microsporumgypseum)、紅色毛癬菌 (Trichophytonrubrum)、煙曲霉 (Aspergillusfumigatus)7544均由長海醫(yī)院真菌室提供。所有菌株已經(jīng)形態(tài)學(xué)和分子鑒定。

藥物 127種中藥材購自上海雷允上大藥店、上海虹橋飲片廠、亳州同仁堂大藥店；氟康唑 (Fluconazole，F(xiàn)LC)、伏立康唑 (Voriconazole，VCZ)及酮康唑 (Ketoconazole，KCZ)均購自美國Sigma公司，其他試劑均為國產(chǎn)試劑。

培養(yǎng)基 RPMI 1640液體培養(yǎng)液：RPMI 1640 10 g，NaHCO32.0 g，嗎啡啉丙磺酸34.5 g，NaOH調(diào)pH至7.0，三蒸水定容1 000 mL，0.22 μm微孔濾膜過濾除菌；4℃保存?zhèn)溆?。Spider培養(yǎng)液 (pH 7.2)：營養(yǎng)肉湯10 g，甘露醇10 g，K2HPO42 g，三蒸水定容1 000 mL，高壓滅菌，保存于4℃?zhèn)溆?。YEPD培養(yǎng)液：酵母浸膏10 g、蛋白胨20 g、葡萄糖20 g，加三蒸水900 mL溶解，加入2 mg/mL氯霉素水溶液50 mL，三蒸水定容至1 000 mL，高壓滅菌，于4℃保存。沙堡葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 (SDA)：蛋白胨10 g、葡萄糖40 g、瓊脂18 g，加三蒸水900 mL溶解，加入2 mg/mL氯霉素水溶液50 mL，調(diào)整pH值至7.0，定容至1 000 mL，高壓滅菌，4℃保存[8]。

儀器 DL-1000B智能超聲波清洗器 (上海之信儀器有限公司)，SW-CT-IF型單人雙面超凈化工作臺 (蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司)，96孔細胞培養(yǎng)板 (丹麥Nunclon公司)，12孔細胞培養(yǎng)板 (美國Corning公司)，80A漩渦混合器 (上海琪特分析儀器有限公司)，THZ-82A臺式恒溫振蕩器 (上海躍進醫(yī)療器械廠)，隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱 (上海躍進醫(yī)療器械廠)，XW-Multiskan MK3型酶標儀 (芬蘭Labsystems公司)，倒置顯微鏡 (美國AMG○REVOS公司)，單反相機 (日本Nikon公司)。

1.2 方法

中藥的提取[9]中藥材50 g研磨成粉末，過20目篩，5倍量的75%乙醇50℃浸泡24 h，超聲提取30 min，2次，合并2次提取液，離心取上清液，得終濃度為200 mg/mL的生藥提取液，置于4℃冰箱備用[1]。

陽性對照藥物的配制 二甲亞砜 (DMSO)溶解FLC、VCZ、KCZ，配制成6.4 μg/mL藥物母液，置于4℃冰箱備用。

酵母菌活化 于35℃ SDA，孵育24～48 h，挑取單個菌落接種至YEPD培養(yǎng)液，于30℃、200 r/min振蕩培養(yǎng)16 h后，使其處于指數(shù)生長對數(shù)期，以保證菌的純度和活力；絲狀菌煙曲霉35℃馬鈴薯葡萄糖斜面培養(yǎng)基孵育7 d，無菌紗布過濾。

菌懸液配制[10-11]血細胞計數(shù)板計數(shù)，以RPMI 1640培養(yǎng)液調(diào)整酵母菌液濃度至 (0.5～2.5)×103CFU/mL、絲狀菌液濃度 (0.5～2.5)×104CFU/mL用于藥敏實驗。離心收集生長對數(shù)期白念珠菌，用滅菌的PBS緩沖溶液 (pH 7.2)清洗3次，將白念珠菌細胞混懸于1 mL Spider培養(yǎng)液中，用血細胞計數(shù)板計數(shù)，調(diào)菌濃度為1.0×106cells/mL用于菌絲生長實驗[10-11]。

藥物敏感測試板的制備 按2009年和2008年CLSI推薦標準M27-A3和M38-A2方案[10-12]：取無菌96孔板，于每排1號孔加RPMI 1640液體培養(yǎng)基100 μL作空白對照；3～12號孔各加新鮮配制的菌液100 μL；2號孔分別加菌液198 μL和中藥粗體物2 μL；2～11號孔進行2倍倍比稀釋，使各孔的最終藥物濃度分別為2 000、1 000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.813、3.906 μg/mL，各孔中乙醇的含量均低于1%。12號孔不含藥物，只加菌液100 μL作生長對照。作為陽性對照藥的FLC、VCZ和KCZ的終濃度分別為16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.062 5和0.031 3 μg/mL。各孔中DMSO的含量均低于1%。藥敏板于35℃隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，念珠菌和煙曲霉孵育48 h、新生隱球菌孵育72 h，用酶標分析儀于630 nm測各孔OD值，并輔以目測。

最低抑菌濃度 (MIC值) 與生長對照孔比較≥90%生長抑制所對應(yīng)的最低藥物濃度為氟康唑和中藥提取物的MIC90。生長對照孔的OD值控制在0.2左右，與生長對照孔比，以O(shè)D值下降90%以上的最低濃度孔中的藥物濃度為MIC90(真菌生長90%被抑制時的藥物濃度)。中藥提取物大多顏色較深可能產(chǎn)生假陽性結(jié)果，輔以目測，以肉眼觀察無菌生長的最低濃度為最低抑菌濃度。每塊藥敏板均設(shè)有質(zhì)控菌株及質(zhì)控化合物，實驗過程中質(zhì)控株近平滑念珠菌ATCC22019、質(zhì)控化合物氟康唑、伏立康唑、酮康唑MIC波動范圍不超過1個藥物梯度濃度，且均在CLSI-M27-A3和CLSI-M38-A2公布的質(zhì)控菌株MIC標準范圍內(nèi)，即本研究中實驗結(jié)果數(shù)據(jù)可靠。實驗在不同時間段重復(fù)3次，3次結(jié)果不超過一個濃度差則可信，且以高濃度MIC為準，若不符，再次重復(fù)測定。

菌絲生長實驗 在無菌12孔細胞培養(yǎng)板中，每孔加入1 mL菌懸液，加入含有不同藥物濃度中藥醇提取液 (乙醇含量低于5%)，37℃隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱中靜止培養(yǎng)3 h，在EVOS xl型倒置顯微鏡下觀察菌絲生長狀況并拍照。

2 結(jié) 果

2.1 127種中藥醇提物體外抗深部真菌結(jié)果

考慮到體外藥敏實驗MIC值與臨床用藥劑量的相關(guān)性，我們將MIC>2 000 μg/mL的中藥視為沒有抗真菌活性。按此標準，《中藥大辭典》中收錄的127種中藥醇提物中，以下92種對白念珠菌、煙曲霉、新生隱球菌的MIC均>2 000 μg/mL，視為無效：八角科 (八角茴香)百部科 (百部)百合科 (黃精、石刁柏、知母、浙貝母)敗醬科 (甘松)車前科 (車前草)唇形科 (薄荷、迷迭香)動物界 (蜈蚣)豆科 (番瀉葉、黑大豆、苦豆子、望江南、皂莢、廣金錢草)鳳尾蕨科 (鳳尾草)鳳仙花科 (鳳仙花、鳳仙透骨草)橄欖科 (沒藥)谷精草科 (谷精草)禾本科 (麥芽)胡椒科 (胡椒)姜科 (山奈、生姜)堇菜科 (紫花地丁)桔?？?(半邊蓮、沙參)菊科 (款冬花、艾葉、白術(shù)、蒼耳子、蒼術(shù)、菊花、蒲公英、一枝黃花)礦物 (白礬、雌黃、硫黃、硼砂、輕粉、自然銅)蘭科 (白及)藜科 (地膚子、土荊芥)楝科 (苦楝皮)蓼科 (萹蓄、辣蓼、靈芝、蓼大青葉)麻黃科 (麻黃)馬齒莧科 (馬齒莧)馬兜鈴科 (馬兜鈴、細辛)毛茛科 (白頭翁、石龍芮、唐松草、威靈仙)木通科 (木通、連翹)薔薇科 (烏梅)茄科 (枸杞子)忍冬科 (金銀花)傘形科 (防風、蛇床子、小茴香)?？?(桑白皮、桑葉)莎草科 (香附)商陸科 (商陸)十字花科 (萊菔子、青黛)石榴科 (石榴皮)松科 (松節(jié))天南星科 (水菖蒲)五加科 (海桐皮、刺人參)仙人掌科 (仙人掌)莧科 (倒扣草)繡線菊亞科 (木瓜)玄參科 (玄參、地黃)鳶尾科 (射干)蕓香科 (白鮮皮、花椒、浙桐皮、枳實)樟科 (香葉)真菌界 (馬勃)紫草科 (紫草)檳榔科 (檳榔)。

<2 000 μg/mL濃度下，博落回等17種中藥對白念珠菌有抑制作用，月季花等34種中藥對新生隱球菌有抑制作用，黃柏等5種中藥對煙曲霉有抑制作用；月季花、丁香、肉桂對3株深部真菌均有抑制作用；博落回、月季花、藜蘆、粉萆薢、硬水黃連、黃柏6種中藥對白念珠菌抑制作用明顯，MIC在31.25～250 μg/mL之間，且僅月季花和黃柏對煙曲霉有抑制作用，MIC為1 000 μg/mL和500 μg/mL。詳見表1 (按白念珠菌抑制作用從大到小排序)。

2.2 抗菌效果較好的中藥對10種常見致病真菌的MIC

博落回、月季花、藜蘆、粉萆薢、硬水黃連、黃柏6種中藥醇提物的白念珠菌MIC值均<250 μg/mL，抑制效果較好。因此，擴大其抗菌譜，對白念珠菌耐藥菌株、非白念珠菌和常見皮膚癬菌進行探究。研究表明：博落回和月季花抑制白念珠菌效果較其他藥材強，MIC在15.625～31.25 μg/mL；博落回和粉萆薢抗菌譜廣，對7種真菌均有抑制作用。詳見表2。

表1 35種中藥醇提物對3種深部真菌的MIC值

Tab.1 The MICs of antifungal activity of ethanol extracts from 35 traditional Chinese medicine

編號中藥名藥材批號新生隱球菌32609(μg/mL)煙曲霉7544(μg/mL)白念標準菌sc5314(μg/mL)白念敏感菌Y0109(μg/mL)VCZ陽性對照藥0.01560.250.01560.0625KCZ陽性對照藥0.12540.1250.0625FCZ陽性對照藥2>640.50.251博落回484915.625-31.2515.6252月季花09637.813100031.2515.6253藜蘆588162.5-12562.54粉萆薢433062.5-2502505硬水黃連42007.813-2502506黃柏4202-5002502507丁香002231.2510005002508厚樸3430250-5002509白蘞1427250-100050010羊蹄197331.25-100025011大黃0181500-2000200012孩兒茶36741000-2000200013蘆薈22302000-2000200014木香1501000-2000100015肉桂181612510002000200016土荊皮0160125-2000200017梔子33561000-2000100018白果1418500---19白屈菜14715001000--20藏茴香58331000---21草果3177250---22澄茄子5743250---23大風子0188500---24大蒜01832000---25廣玉蘭0450500---26紅豆蔻20801000---27紅毛七20681000---28槐花52751000---29藿香59222000---30決明子19472000---31牛蒡根08722000---32啤酒花45682000---33野升麻44411000---34使君子28782000---35香茅35062000---

注：-表示>2 000 μg/mL

2.3 考察對白念珠菌菌絲形成的影響

前期預(yù)實驗發(fā)現(xiàn)75%乙醇含量高于10%能完全抑制菌絲形成，3%菌絲則正常生長。因此，我們選取最大測試體積為20 μL/孔 (乙醇含量為2%)，即最高藥物濃度為4 mg/mL，作為粗步篩選最高濃度。通過考察127種中藥醇提物對白念珠菌菌絲形成的影響我們發(fā)現(xiàn)：在4 mg/mL濃度下，這127種中藥醇提物，僅粉萆薢和藜蘆能完全抑制菌絲生長，完全抑制菌絲最低濃度分別為200 μg/mL和500 μg/mL (見圖1)。

3 討 論

《中藥大辭典》載藥6 008種，是收載藥物較為全面的中醫(yī)藥領(lǐng)域工具書，對傳統(tǒng)中藥主要藥理作用和臨床應(yīng)用均有較為詳細的收錄，其中以抗真菌藥理作用進行檢索，共收錄202種。相比散見于各醫(yī)藥雜志和綜合性醫(yī)藥書籍的藥理作用研究，其收錄較為全面，參閱便捷，但收載標準不一，無法比較抗菌作用強弱，以便更好發(fā)掘抗真菌新藥[3-4]。因此我們首次針對3種常見深部感染真菌，用統(tǒng)一標準對《中藥大辭典》中記載的具有抗真菌藥理活性的中藥醇提物進行了體外抗真菌作用再評價。但由于部分中藥為冷背藥材，獲得渠道有限，目前我們僅研究其中127種。在后續(xù)的實驗中，我們將盡力完善剩余中藥的抗真菌活性評價。

目前，抗真菌中藥研究的標準比較混亂，為保證方法上的統(tǒng)一性，在中藥提取方面，實驗前期我們將文獻報道較好的中藥 (黃連、黃柏等18味中藥)進行了水提物、30%醇提、75%醇提的抗白念珠菌活性測定，以及參考部分研究[13]，發(fā)現(xiàn)同批中藥75%乙醇提取物的抗真菌效果較好，且75%醇提物抗菌效果最好，能避免中藥提取液被細菌污染，能保證實驗的穩(wěn)定性，同時超聲提取法與傳統(tǒng)中藥水煎提取相比，具有提取效率高、適應(yīng)性廣、簡單易行、重復(fù)性高的優(yōu)勢，因此本實驗研究我們僅選取75%乙醇超聲提取液來進行抗真菌作用的考察。為減少溫度及操作誤差對結(jié)果的影響，我們也盡量保證藥物集中干燥、粉碎、恒溫箱50℃浸泡24 h后提取。體外活性篩選方面，本研究采用美國臨床實驗室標準化協(xié)會 (CLSI)推薦的M27-A3和M38-A2微量稀釋法，該方法簡單易行，結(jié)果可靠、重復(fù)性好，便于實驗室之間比較；MIC結(jié)構(gòu)判定方面，采用機測與目測相結(jié)合的判定方法，以避免中藥本身顏色可能對吸光度的影響。本研究結(jié)果均平行測試了3次以上，每次3個復(fù)孔，以保證結(jié)果的可重現(xiàn)性。誠然藥材的產(chǎn)地不同、批號不同、亞種不同也會對其抗真菌活性造成誤差，我們盡量確保來源的正規(guī)性，對有效中藥進行不同來源的活性篩選，盡量減少偶然誤差，以保證結(jié)果的可靠性。

表2 6種中藥醇提物對10種常見致病真菌的抑制作用

注：-表示>2 000 μg/mL

圖1 粉萆薢和藜蘆對白念珠菌菌絲形成的影響

本實驗部分結(jié)果與《中藥大辭典》中報道的活性存在差異，如白礬、白鮮皮、連翹、山柰等藥材報道中具有殺菌作用[3-4]，但是實驗結(jié)果并未檢測到活性，表明部分傳統(tǒng)認為具有抗真菌活性的中藥可能并無抗菌活性。但同時我們也應(yīng)考慮由于不同的提取方法、測試菌株、實驗方法以及有效濃度判定標準不一等因素所造成的體外藥敏結(jié)果差異[13-15]和某些體外無抗真菌作用的中藥，通過體內(nèi)代謝或增強機體免疫力以達到抗菌作用的可能性，后續(xù)研究也從體內(nèi)外兩方面同時考察其抗菌活性。

同一中藥對不同的菌株影響也不同，在擴大抗菌譜試驗中，博落回、月季花、藜蘆、粉萆薢、硬水黃連、黃柏對白念珠菌臨床耐藥菌也有較好的活性，其中博落回、粉萆薢、黃柏對白念標準菌和臨床耐藥菌MIC并無差異，表明了中藥耐藥性低的優(yōu)勢。博落回和粉萆薢對9株真菌有抑制作用，博落回對酵母菌的抑制作用強于粉萆薢，但對絲狀菌的抑制作用弱于粉萆薢；對酵母菌抑制作用較好的藜蘆、硬水黃連在測定濃度下對絲狀菌并無作用，該結(jié)果提示我們深部真菌與淺部真菌的作用靶點可能不同。

本實驗還探究了中藥醇提物對白念珠菌菌絲形成的抑制作用，初步考察了中藥對菌絲毒力的影響，發(fā)現(xiàn)在一定濃度范圍下，僅粉萆薢和藜蘆能完全抑制菌絲生長，進一步豐富了中藥抗真菌的理論基礎(chǔ)。

中藥資源豐富、療效好、毒副作用小、在我國有上千年的實踐基礎(chǔ)，對其進行系統(tǒng)、科學(xué)、現(xiàn)代化的基礎(chǔ)研究，有助于理論數(shù)據(jù)的更新，更好的進行抗真菌新藥的深入挖掘。但中藥種類繁多，提取物中的化學(xué)成分及藥理活性尚不能完全明確，致使抗真菌的物質(zhì)基礎(chǔ)和毒理反應(yīng)亦不能明確。因此，下一步工作重點包括：橫向方面，擴大篩選范圍，對未報道具有抗真菌中藥的空白領(lǐng)域進行活性考察，尋找高效低毒抗真菌中藥；縱向方面，將體外活性較好的中藥進行體內(nèi)活性驗證，并活性導(dǎo)向分離其有效成分，為研制新型抗真菌藥物奠定基礎(chǔ)。

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[本文編輯] 施 慧

《中國真菌學(xué)雜志》醫(yī)學(xué)名詞著錄規(guī)范

以1989年及其以后由全國自然科學(xué)名詞審定委員會審定、公布，科學(xué)出版社出版的《醫(yī)學(xué)名詞》和相關(guān)學(xué)科的名詞為準，暫未公布者仍以人民衛(wèi)生出版社編輯的《英漢醫(yī)學(xué)詞匯》為準。中文藥物名稱應(yīng)使用1995年版藥典 (法定藥物)或衛(wèi)生部藥典委員會編輯的《藥名詞匯》(非法定藥物)中的名稱，英文藥物名稱則采用國際非專利藥名，不用商品名。

Re-evaluation of the traditional Chinese medicines (TCMs) with antifungal activities recorded in ‘Zhong Yao Da Ci Dian’

WU Jing,WANG Liang,CAO Yong-bing,YAN Lan,JIANG Yuan-ying
(CenterforNewDrugResearch,CollegeofPharmacy,TheSecondMilitaryMedicalUniversity,Shanghai200433,China)

Objective To investigate the antifungal activity of 127 types of the traditional Chinese medicines (TCMs) with the so-called antifungal activities recorded in ‘Zhong Yao Da Ci Dian’ againstCandidaalbicans,CryptococcusneoformansandAspergillusfumigatusinvitro.Methods The portion from each TCM by 75% alcohol extracts were determined for antifungal activity againstC.albicans,C.neoformansandA.fumigatusby using the standard CLSI M27-A3 and M38-A2 broth microdilution assays,and further to study the antifungal spectrum and inhibition of hyphae.Results The ethanol extracts from 17 TCMs exhibited the inhibitory activity againstC.albicanswith MICs ranged from 15.625 to 2 000 μg/mL.34 kinds of ethanol extracts from TCMs had the inhibitory effect againstC.neoformans.5 ethanol extracts from TCMs had the inhibitory activity of inhibitingA.fumigatus.Conclusion The antifungal activities of TCMs which has been recorded in ‘Zhong Yao Da Ci Dian’ are measuredinvitroby the consistent standard method for the first time,providing the experimental basis for investigation of new antifungal agents.

‘Zhong Yao Da Ci Dian’；antifungal agents；minimal inhibitory concentration；Candidaalbicans；Cryptococcusneoformans；Aspergillusfumigatus

國家自然基金 (81273556)

吳晶，女 (漢族)，碩士研究生在讀.E-mail:wjinghb69@163.com

姜遠英,E-mail:13761571578@163.com

R 978.5

A

1673-3827(2016)11-0348-06

2016-09-22