色譜指紋圖譜在中藥質(zhì)量控制中的應用

于　雪，辛瑩娟，蔣　緒

（咸陽職業(yè)技術(shù)學院，陜西　咸陽　712000）

色譜指紋圖譜在中藥質(zhì)量控制中的應用

于雪，辛瑩娟，蔣緒

（咸陽職業(yè)技術(shù)學院，陜西咸陽712000）

中藥鑒定與質(zhì)量控制目前廣泛應用于色譜指紋圖譜，主要得益于色譜法的自身特點。色譜指紋圖譜是中藥質(zhì)量標準研究的主要技術(shù)，相對全面地反映了中藥的組成成分、種類及含量信息。本文對色譜指紋圖譜進行綜述，對常見的色譜指紋圖譜的特點及使用范圍做詳細介紹。

色譜指紋圖譜；中藥質(zhì)量；控制應用

中醫(yī)現(xiàn)代化、科學化發(fā)展與中藥質(zhì)量評價標準密不可分，科學高效的中藥質(zhì)量評價標準可以有效提高中藥辨別以及質(zhì)量評定。色譜指紋圖譜之所以成為目前中藥質(zhì)量評價核心技術(shù)就在于該技術(shù)改善了中藥質(zhì)量標準不統(tǒng)一以及藥材真?zhèn)伪鎰e難度大的缺陷。本文從中藥色譜指紋圖譜的應用現(xiàn)狀、圖譜建立及數(shù)據(jù)處理、應用發(fā)展等方面進行綜述。

1　應用現(xiàn)狀

將中藥材或中藥制劑做相關(guān)處理，用特殊分析技術(shù)得到能夠較為全面、準確反映其化學特征的光譜圖或色譜圖就是中藥指紋圖譜，指紋鑒定是中藥指紋圖譜技術(shù)出現(xiàn)的基礎技術(shù)。其中色譜法、光譜法、X射線衍射法、核磁共振法以及聯(lián)用技術(shù)是主要的中藥指紋圖譜研究方法，在多種指紋圖譜技術(shù)中，色譜法是中藥圖譜技術(shù)的主流技術(shù)，主要源于其自身的顯著特性，色譜法可以充分表達中藥混合物內(nèi)在特性，相對于其他分析方法更適合分析混合中藥樣品。色譜法的特異性還表現(xiàn)在通過觀察色譜指紋圖譜整體特征可鑒別藥材真?zhèn)?、識別藥材、評估成藥質(zhì)量、觀察制劑成分變化、觀察不同批次的質(zhì)量等［1，2］。色譜指紋圖譜技術(shù)自身多樣性以及高效的分析檢測能力使其發(fā)展應用越來越受到關(guān)注，色譜指紋圖譜的質(zhì)量評價細節(jié)備受研究者關(guān)注的同時，數(shù)字化發(fā)展成為一種趨勢。色譜指紋圖譜分析技術(shù)在國際上發(fā)展較快，目前已經(jīng)出現(xiàn)微型分離技術(shù)、高溫分析技術(shù)研究以及多維色譜指紋圖譜分析［3］。其中微型分離技術(shù)已經(jīng)有研究驗證，主要應用在毛細管電泳法中，溶劑消耗少、成本低、環(huán)境污染少；Ciesla L等研究證實了該技術(shù)的可行性［4］。雖然微型分離技術(shù)已經(jīng)應用于色譜指紋圖譜分析中，但是國內(nèi)相關(guān)研究較少。高溫分析技術(shù)在研究實驗中，其操作成本低、無污染，被廣泛認可，但自身技術(shù)有明顯缺陷，升溫相關(guān)系統(tǒng)裝置要求高，操作中背景信號影響較大等都限制了科技工作者對其深入研究，導致高溫液相色譜應用較少。多維色譜指紋圖譜分析不僅可以記錄指紋圖譜，還可以記錄洗脫成分，分析其附加信息，比記錄指紋圖譜分析的技術(shù)更加先進。相比較而言2-D色譜分析技術(shù)研究應用較多，孫國祥等利用2-D色譜分析技術(shù)對龍膽瀉肝丸的質(zhì)量控制進行了研究［5］。

2　圖譜建立及數(shù)據(jù)處理

2.1 基本原則

中藥色譜指紋圖譜達到規(guī)范化、標準化、客觀化目標必須遵循特征性、系統(tǒng)性、穩(wěn)定性原則。

2.2 建立流程

中藥色譜指紋圖譜的建立可以通過以下流程進行，首先確定研究對象，收集樣品時要注意樣品代表性以及批次數(shù)量，研究樣本是經(jīng)過化學預處理得到藥材、中間體和注射劑的供試液。其次選取參照物，可以將樣品中含量高且容易分離的活性物質(zhì)作為參照物。再次確定試驗方法以及實驗條件，建立對照指紋圖譜及相關(guān)參數(shù)。最后分析藥材、中間體及注射劑的指紋圖譜相關(guān)性并作出評價。整體流程中樣品預處理是主要環(huán)節(jié)，直接影響分析結(jié)果。對于各項數(shù)據(jù)的處理方法也是目前研究的重點，力求尋找科學高效的方法，減少冗雜性，提升藥物質(zhì)量監(jiān)控效果。

2.3 數(shù)據(jù)處理

色譜指紋圖譜數(shù)據(jù)處理方法主要有觀察法、數(shù)據(jù)對比法、計算機圖譜解析法、化學計量法四種。觀察法主要通過比較待測樣品指紋圖譜與標準圖譜的特征值得出結(jié)論。數(shù)據(jù)對比法是通過引入相對指數(shù)、重疊率、八強峰、N強峰、表現(xiàn)豐度等量化數(shù)據(jù)進行比較［6］。計算機圖譜解析相關(guān)技術(shù)則主要有模糊信息分析法、灰色關(guān)聯(lián)聚類法、人工神經(jīng)網(wǎng)絡法以及非線性映照法?；瘜W計量法中常用的有分子模擬與優(yōu)化法、化學定量構(gòu)效關(guān)系法以及化學模式識別法。

3　應用發(fā)展

3.1 薄層色譜指紋圖譜法

薄層色譜指紋圖譜利用固定波長掃描薄層斑點，其優(yōu)勢在于比目測層析圖譜準確性高、操作快捷、經(jīng)濟、客觀，實踐中日常分析檢驗和現(xiàn)場檢驗采用該方法較多。有研究成功分離出燈盞花乙素峰與其它組分［7］。缺陷在于靈敏度、分離效率低，中藥中的微量成分檢測不全面。但是隨著相關(guān)分離檢測技術(shù)的發(fā)展，極大地提升了該方法的靈敏度和分辨率，有助于該技術(shù)在中藥質(zhì)量監(jiān)控中的推廣應用。

3.2 氣相色譜法

氣相色譜法主要用于中藥揮發(fā)性成分研究，因為該技術(shù)分析時以氣體為流動相，分析中藥成分時靈敏度高、分離度高、分析速度快、樣品用量少；但分離要求較高，被測物質(zhì)須液化，在一定程度上限制了其使用范圍。靳然等研究中表明劉玉磊使用該法建立了細辛揮發(fā)油氣相色譜指紋圖譜分析方法，獲得50個指紋峰，指認4個色譜峰［8］。氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)是對該技術(shù)的發(fā)展，分析用時少，檢測范圍小，中藥復方制劑質(zhì)量監(jiān)控可以采用該方法。

3.3 其他方法

高效液相色譜法結(jié)合經(jīng)典液相色譜法與氣相色譜法的特點，分離鑒定能力比薄層色譜指紋圖譜高，雖然操作容易、分析速度快、分辨率高，但是相關(guān)設備費用高，環(huán)境污染嚴重。高效毛細管電泳利用不同帶電粒子遷移速度的不同分離所需成分，分離儀器簡單、效率高、樣品用量少，適合多種中藥成分的藥物質(zhì)量檢測，但重現(xiàn)性低，很難實現(xiàn)操作方法標準化。

超臨界流體色譜高速逆流色譜法利用動態(tài)液－液分配原理分離樣品成分，分離度和重現(xiàn)性都比較好，雖然中藥成分分離研究較少，但是應用于指紋圖譜研究的價值極大。

4　結(jié)語

色譜指紋圖譜的特異性對中藥質(zhì)量監(jiān)控意義重大，隨著相關(guān)技術(shù)的發(fā)展，敏感性、分離效果、重現(xiàn)性等都將會有重大突破。雖然色譜指紋圖譜技術(shù)目前處于研究階段，但是現(xiàn)有的分離技術(shù)、分析技術(shù)已經(jīng)展現(xiàn)了其在中藥質(zhì)量監(jiān)控方面的特異性，在以后的研究發(fā)展中，結(jié)合各技術(shù)的優(yōu)勢，色譜指紋圖譜的應用價值會更高。但是不可否認，中藥自身復雜性、圖譜技術(shù)成熟性、色譜自身缺陷、客觀量化標準的缺乏等問題是亟需解決的問題，是色譜指紋圖譜相關(guān)技術(shù)發(fā)展面臨的巨大挑戰(zhàn)。

［1］馬麗娜，張巖，陶遵威.色譜分析技術(shù)在中藥指紋圖譜研究中的應用［J］.藥物評價研究，2011，35（1）：58-59.

［2］鄔偉魁，嚴倩茹.超高效液相色譜指紋圖譜在中藥質(zhì)量評價中的應用［J］.中國執(zhí)業(yè)藥師，2015，13（2）：36-39.

［3］Ciesla L，Hajnos M，Staszek D，et al.Validatedbinary high-performance thin-layer chromatographic fingerprints ofpolyphenolicsfordistinguishing differentSalvia species ［J］.J Chromatogr Sci，2010，48（6）： 421-427.

［4］Yu F，Kong L，Zou H，et al.Progress on the screening and analysis of bioactive compounds in traditional chinese medicines by biological fingerprinting analysis ［J］.Comb Chem High Throughput Screen，2010，13 （10）：855.

［5］孫國祥，張靜嫻.系統(tǒng)指紋定量法鑒別龍膽瀉肝丸質(zhì)量［J］.分析化學，2009，37（8）：1183-1187.

［6］曹玲，劉莉莉，王連芝，等.多維指紋圖譜在中藥質(zhì)量評價中的應用［J］.中國醫(yī)藥導報，2014，11（24）：164-165.

［7］李昕，王月茹，馬利，等.中藥色譜指紋圖譜在中藥質(zhì)量評價中的應用［J］.生物醫(yī)學工程學雜志，2012，29（1）：192-193.

［8］靳然，趙百孝.氣相色譜指紋圖譜在中藥分析及質(zhì)量評價中的應用［J］.現(xiàn)代科學儀器，2010，26（1）：122-123.

Application of Chromatographic Fingerprint in the Quality Control of Traditional Chinese Medicine

Yu Xue，Xin Yingjuan，Jiang Xu
（Xianyang Vocational and Technical College ，Xianyang 712000，China）

The identifcation and quality control of traditional Chinese medicine is widely used in chromatographic fngerprint， which is mainly due to its own characteristics.Chromatographic fngerprint is the main technology of the research on the quality standard of traditional Chinese medicine， and the relative comprehensive responses to the composition， type and quantity of the traditional Chinese medicine.The chromatographic fngerprints are reviewed in this paper.The common use of the common chromatographic fngerprint is introduced in detail.

chromatographic fngerprint；quality of traditional Chinese medicine； control application

于雪（1984-），女，漢族，陜西咸陽人，助教，碩士；研究方向：液相色譜、藥物蛋白相互作用。