豬源產(chǎn)新德里金屬β-內(nèi)酰胺酶-1大腸埃希菌的感染特性研究

常世愷，趙戰(zhàn)勤*，薛　云，龍　塔，丁　軻，程相朝

(1.河南科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，河南省高等學(xué)校環(huán)境與畜產(chǎn)品安全重點(diǎn)學(xué)科開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室，洛陽(yáng) 471003；2.河南科技大學(xué)醫(yī)學(xué)技術(shù)與工程學(xué)院，微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室，洛陽(yáng) 471003)

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豬源產(chǎn)新德里金屬β-內(nèi)酰胺酶-1大腸埃希菌的感染特性研究

常世愷1，趙戰(zhàn)勤1*，薛云2，龍塔1，丁軻1，程相朝1

(1.河南科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，河南省高等學(xué)校環(huán)境與畜產(chǎn)品安全重點(diǎn)學(xué)科開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室，洛陽(yáng) 471003；2.河南科技大學(xué)醫(yī)學(xué)技術(shù)與工程學(xué)院，微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室，洛陽(yáng) 471003)

摘要：對(duì)豬源產(chǎn)NDM-1大腸埃希菌E120413株在豬群中的交互傳播、致病力和體內(nèi)分布特性等進(jìn)行初步探討。仔豬糞便樣本的細(xì)菌學(xué)檢測(cè)結(jié)果表明，E120413株細(xì)菌能從接種仔豬快速傳染給未接種的同居組仔豬；接種組仔豬糞便樣本檢測(cè)到E120413株細(xì)菌的持續(xù)時(shí)間最短為7周，最長(zhǎng)超過(guò)11周；同居組的持續(xù)時(shí)間介于7～9周。仔豬血液樣本的檢測(cè)結(jié)果表明，E120413株細(xì)菌能快速突破仔豬的免疫防御進(jìn)入血液循環(huán)形成菌血癥；接種組和同居組仔豬菌血癥的持續(xù)時(shí)間為第2—10天和第4—10天，并在第7天達(dá)到最高活菌濃度3.7×105和4.3×105CFU·mL-1。仔豬組織樣本的檢測(cè)結(jié)果表明，從感染仔豬的腦、心、肝、脾、肺、腎、胃、腸系膜淋巴結(jié)和十二指腸中均能分離到該菌，且能在十二指腸長(zhǎng)期存在(≥11周)。但仔豬的臨床癥狀與病理學(xué)檢查結(jié)果表明，該菌僅能引起感染豬的體溫升高和輕微的局部炎癥反應(yīng)，并不能導(dǎo)致豬的明顯臨床癥狀和嚴(yán)重病理變化。產(chǎn)NDM-1大腸埃希菌E120413株對(duì)豬具有較強(qiáng)的傳播擴(kuò)散能力和持續(xù)感染能力。

關(guān)鍵詞：豬；大腸埃希菌；NDM-1；感染

“超級(jí)細(xì)菌”是具有廣泛耐藥性(pan-drug resistance，PDR)細(xì)菌的總稱，包括耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、多重抗藥性肺炎鏈球菌、耐萬(wàn)古霉素腸球菌、多重抗藥性結(jié)核桿菌等。各種“超級(jí)細(xì)菌”的不斷出現(xiàn)給人類(lèi)健康帶來(lái)極大威脅[1-2]。攜帶有新德里金屬β-內(nèi)酰胺酶-1(New Delhi metallo-β-lactamase-1，NDM-1)耐藥基因(blaNDM-1)的細(xì)菌是一種新型的“超級(jí)細(xì)菌”。該類(lèi)細(xì)菌能產(chǎn)生一種特殊的β-內(nèi)酰胺酶，其活性部位為金屬離子，最初源于在印度首都新德里有旅行史的患者，所以得名NDM-1[3]。NDM-1能抵抗幾乎所有的抗生素，給臨床治療帶來(lái)極大威脅[4-5]。目前，世界上40多個(gè)國(guó)家和地區(qū)的人群已被發(fā)現(xiàn)攜帶blaNDM-1基因的“超級(jí)細(xì)菌”[6-8]。令人擔(dān)憂的是，近幾年英國(guó)學(xué)者又從印度新德里的生活環(huán)境中(包括飲用水、池塘、城市排水系統(tǒng)等)分離到攜帶blaNDM-1基因的多種革蘭陰性桿菌，其中11種細(xì)菌是首次發(fā)現(xiàn)，包括對(duì)人類(lèi)致病力較強(qiáng)的鮑氏志賀菌和霍亂弧菌[9-10]。迄今為止，發(fā)現(xiàn)攜帶blaNDM-1基因的細(xì)菌多為腸桿菌科細(xì)菌，這些細(xì)菌多為消化道的正常菌群或條件性致病菌，少數(shù)為致病菌[9，11]。目前，國(guó)內(nèi)外均沒(méi)有在動(dòng)物體內(nèi)檢出產(chǎn)NDM-1細(xì)菌的報(bào)道。2012年4月，作者實(shí)驗(yàn)室從臨床送檢豬的病料樣品中分離出1株產(chǎn)NDM-1大腸埃希菌，并對(duì)blaNDM-1基因進(jìn)行了初步的序列分析。豬作為多種微生物進(jìn)化的“混合器”，豬源產(chǎn)NDM-1“超級(jí)細(xì)菌”的傳播特性以及公共衛(wèi)生學(xué)意義值得進(jìn)一步研究。本研究探討了該菌在豬群中的交互傳播、致病力和體內(nèi)分布特性，為客觀評(píng)估豬源產(chǎn)NDM-1細(xì)菌在豬群內(nèi)部的擴(kuò)散能力提供了重要參考依據(jù)。

1材料與方法

1.1菌株、材料與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

豬源產(chǎn)NDM-1大腸埃希菌E120413株由河南科技大學(xué)河南省高等學(xué)校環(huán)境與畜產(chǎn)品安全重點(diǎn)學(xué)科開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室分離鑒定并保存。

LB培養(yǎng)基購(gòu)自美國(guó)BD公司。碳青霉烯類(lèi)抗生素厄他培南(ertapenem)購(gòu)自美國(guó)MERCK公司；TaqDNA聚合酶、基因組提取試劑盒購(gòu)自上海SANGON公司；PCR引物由上海SANGON公司合成。

8～9周齡長(zhǎng)白仔豬購(gòu)自洛陽(yáng)盛平華多種豬有限公司。

1.2仔豬接種試驗(yàn)

將豬源產(chǎn)NDM-1大腸埃希菌E120413株接種于含厄他培南(終質(zhì)量濃度為1 μg·mL-1)的LB平皿上，37 ℃培養(yǎng)16～18 h，挑取單菌落純化培養(yǎng)1次，用5～7 mL無(wú)菌PBS(0.01 mol·L-1、pH7.2)洗脫菌苔，混合均勻后對(duì)細(xì)菌懸液進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。將22頭8～9周齡健康仔豬隨機(jī)分為3組(9頭、9頭和4頭)。第1組為接種組，每頭仔豬通過(guò)口腔灌服上述菌液2 mL(含活菌1.1×1010CFU)。第2組為同居組，每頭仔豬均通過(guò)口腔灌服無(wú)菌LB培養(yǎng)基2 mL；第2組和第1組仔豬同圈混合飼養(yǎng)。第3組為空白對(duì)照組，每頭仔豬均通過(guò)口腔灌服無(wú)菌LB培養(yǎng)基2 mL，進(jìn)行隔離飼養(yǎng)。每日觀察、記錄所有仔豬的臨床癥狀，測(cè)定接種前及接種后1～10 d的直腸溫度變化。

1.3仔豬糞便樣本的細(xì)菌檢測(cè)

于接種前和接種后不同時(shí)間點(diǎn)(表1)，無(wú)菌采取所有仔豬的直腸糞便樣本5 g到離心管中，用無(wú)菌PBS 5 mL溶解糞便樣本，劇烈振蕩3 min，4 000 r·min-1離心1 min，轉(zhuǎn)移上清液到另一個(gè)無(wú)菌離心管中，參考文獻(xiàn)所述方法[12-13]使用含厄他培南(1 μg·mL-1)的LB平皿進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。同時(shí)，對(duì)計(jì)數(shù)平板上的生長(zhǎng)菌落進(jìn)行blaNDM-1基因的PCR檢測(cè)[14]。

表1仔豬糞便樣本中E120413株大腸埃希菌的含量變化規(guī)律

Table 1Persistence ofEscherichiacoliE120413 strain in fecal samples of piglets

a.仔豬接種E120413株劑量為1.1×1010CFU·頭-1；b.接種前的樣品數(shù)據(jù)；c.仔豬被剖檢；V.平均值；N.不統(tǒng)計(jì)或無(wú)檢測(cè)數(shù)據(jù)

a.Piglets were inoculated with 1.1×1010CFU E120413 strain；b.Values of pre-inocubation；c.Piglets were dissected；V.The mean values；N.Not tested or no data

1.4仔豬血液樣本的細(xì)菌檢測(cè)

于接種前和接種后不同時(shí)間點(diǎn)(表2)，通過(guò)前腔靜脈采取仔豬血液到EDTA抗凝采血管中。按文獻(xiàn)所述方法[12-13]使用含1 μg·mL-1厄他培南的LB平皿進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。同時(shí)，對(duì)計(jì)數(shù)平板上的生長(zhǎng)菌落進(jìn)行blaNDM-1基因的PCR檢測(cè)[14]。

表2仔豬血液中E120413株細(xì)菌的含量變化規(guī)律

Table 2Persistence of E120413 strain in blood samples of piglets

a.仔豬接種E120413株劑量為1.1×1010CFU·頭-1； N.仔豬被剖檢，無(wú)檢測(cè)數(shù)據(jù)

a.Piglets were inoculated with 1.1×1010CFU E120413 strain；N.Piglets were dissected and not tested

1.5仔豬的病理學(xué)檢查及其組織樣本的細(xì)菌檢測(cè)

參考文獻(xiàn)按[15]所述方法進(jìn)行，簡(jiǎn)述如下。于試驗(yàn)開(kāi)始后1、2和11周，分別從接種組、同居組中各取2、2和4頭仔豬(表1)進(jìn)行病理學(xué)剖檢。每頭豬無(wú)菌采取心、肝、脾、肺、腎、腦、胃、十二指腸和腸系膜淋巴結(jié)組織各5 g，剪碎，分別與5 mL無(wú)菌PBS混合，勻漿器勻漿，然后轉(zhuǎn)入10 mL離心管中靜置5 min，取上清按文獻(xiàn)所述方法[12-13]使用含厄他培南(1 μg·mL-1)的LB平皿進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。同時(shí)，使用10%的甲醛溶液對(duì)各組織進(jìn)行固定，制作病理切片，并觀察其病理組織學(xué)變化。每批次剖檢時(shí)取1頭PBS對(duì)照組仔豬作為健康對(duì)照。

2結(jié)果

2.1仔豬腸道中的細(xì)菌動(dòng)態(tài)變化規(guī)律

仔豬腸道細(xì)菌的檢測(cè)結(jié)果表明(表1)，在接種豬源產(chǎn)NDM-1大腸埃希菌E120413株后2 d(48 h)，所有接種組仔豬的糞便樣品均能檢測(cè)到該菌，其活菌含量介于2.3×103～3.6×104CFU·g-1之間，平均含量為1.2×104CFU·g-1。然后開(kāi)始下降，而在第4天和第14天下降最為顯著(χ2-test：P<0.001)，但在接種后7周內(nèi)，所有仔豬均能檢測(cè)到該菌。在接種后8周，5頭仔豬(期間9頭仔豬中有4頭用于剖檢，結(jié)果見(jiàn)表1)中2號(hào)和4號(hào)已不能檢測(cè)到，但3號(hào)仔豬一直持續(xù)到11周仍能檢測(cè)到。在試驗(yàn)開(kāi)始后2 d(48 h)，同居組12號(hào)仔豬的糞便樣品已能檢測(cè)到E120413株細(xì)菌。在第4天，所有同居組仔豬的糞便樣品均能檢測(cè)到該菌。然后其平均含量快速上升(χ2-test：P<0.001)，在第10 天達(dá)到最大值2.4×103CFU·g-1。與接種組相似，在第14天開(kāi)始劇烈下降(χ2-test：P<0.001)，但在試驗(yàn)開(kāi)始后4 d至7周內(nèi)，所有仔豬均能檢測(cè)到E120413株細(xì)菌。其中，12號(hào)仔豬攜帶E120413株細(xì)菌的持續(xù)時(shí)間最長(zhǎng)，為9周；11號(hào)的持續(xù)時(shí)間最短，為7周。

這些試驗(yàn)結(jié)果表明，E120413株細(xì)菌能從接種仔豬快速傳染給未接種的同居組仔豬，且在腸道中長(zhǎng)期存在(≥7周)。

2.2仔豬血液中的細(xì)菌動(dòng)態(tài)變化規(guī)律

仔豬血液中的細(xì)菌檢測(cè)結(jié)果(表2)表明，接種組仔豬血液樣品中能檢出E120413株大腸埃希菌的時(shí)間介于第2—10天。接種后2 d，在2和6號(hào)仔豬血液中即能檢出E120413株細(xì)菌，第4天，所有仔豬血液中均能檢出該菌，其活菌含量介于5.4×103～2.2×104CFU·mL-1之間，平均含量為1.2×104CFU·mL-1。第7天，其平均含量進(jìn)一步升高到3.7×105CFU·mL-1。第10天，1、2、4、7號(hào)仔豬血液中已不能檢出E120413株細(xì)菌。在試驗(yàn)開(kāi)始后2 d，同居組仔豬血液中均不能檢出E120413株細(xì)菌。但第4天，所有同居組仔豬的血液樣品中均能檢出E120413株細(xì)菌。第7天，其平均含量進(jìn)一步升高到4.3×105CFU·mL-1。第10天，5頭仔豬中，13和16號(hào)已不能檢出。同居組仔豬血液樣品中能檢出E120413株細(xì)菌的時(shí)間介于第4-10天。2和3周后，所有接種組和同居組仔豬血液樣品中均沒(méi)有檢出E120413株細(xì)菌。5、7、9、11周后，所有仔豬血液樣品中也均不能檢出E120413株細(xì)菌(數(shù)據(jù)略)。

這些試驗(yàn)結(jié)果表明，E120413株細(xì)菌能快速突破仔豬的免疫防御進(jìn)入血液循環(huán)形成菌血癥。

2.3仔豬器官組織中的細(xì)菌分布

仔豬不同組織中的細(xì)菌檢測(cè)結(jié)果(表3)表明，接種后1周，從接種組和同居組仔豬的心、肝、脾、肺、腎、腦、胃、腸系膜淋巴結(jié)和十二指腸中均能分離到E120413株大腸埃希菌，這與仔豬所呈現(xiàn)的菌血癥結(jié)果(表2)一致，也表明該細(xì)菌能導(dǎo)致仔豬發(fā)生全身性的系統(tǒng)感染。接種后2周，從接種組(6號(hào)和7號(hào))和同居組(15號(hào)和16號(hào))仔豬的腎和胃組織中均未能檢出E120413株細(xì)菌，但在其他組織中仍能檢出該菌。接種后11周，接種組4頭中的2、4號(hào)和同居組4頭中的11、14號(hào)仔豬的各組織臟器中均未能檢出E120413株大腸埃希菌。但是，從接種組3號(hào)仔豬的肝和十二指腸，5號(hào)仔豬的十二指腸以及同居組12、13號(hào)仔豬的十二指腸中仍檢出了E120413株細(xì)菌，表明該菌能在感染豬的某些組織，特別是十二指腸中長(zhǎng)期(≥11周)定植。

這些試驗(yàn)結(jié)果表明，E120413株細(xì)菌能導(dǎo)致仔豬發(fā)生全身性的系統(tǒng)感染，且能在某些組織中持續(xù)存在。

2.4仔豬的臨床癥狀與病理學(xué)檢查

臨床癥狀觀察結(jié)果表明，接種組和同居組仔豬的精神狀態(tài)和食欲情況均正常，均沒(méi)有發(fā)生腹瀉、嘔吐、呼吸困難和死亡等臨床癥狀，與隔離飼養(yǎng)的PBS空白對(duì)照組仔豬相比沒(méi)有明顯差異。接種組和同居組仔豬在接種后4～8 d出現(xiàn)了體溫升高，但平均升高不超過(guò)1 ℃，且在9 d后恢復(fù)正常。

在接種后1、2和11周，分別對(duì)部分仔豬進(jìn)行病理學(xué)剖檢，發(fā)現(xiàn)接種組和同居組仔豬的心、肝、脾、肺、腎、胃、腸、淋巴結(jié)、膀胱等組織均無(wú)明顯病理變化，與PBS對(duì)照組相比沒(méi)有肉眼可見(jiàn)的差異。病理組織學(xué)觀察結(jié)果表明，各組織結(jié)構(gòu)完整、細(xì)胞排列規(guī)則，無(wú)細(xì)胞壞死、出血等病理變化。僅在1周后剖檢的接種組和同居組仔豬的肺、十二指腸和腦組織中發(fā)現(xiàn)了輕微的充血、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等病理變化。

這些試驗(yàn)結(jié)果表明，該菌僅能引起感染豬的體溫升高和輕微的局部炎癥反應(yīng)，并不能導(dǎo)致豬的明顯臨床癥狀和嚴(yán)重病理變化。

表3仔豬器官組織中E120413株細(xì)菌的檢測(cè)結(jié)果

Table 3Persistence of E120413 strain in deep organs of piglets

a.仔豬口服接種E120413株劑量為1.1×1010CFU·頭-1；b.腸系膜淋巴結(jié)

a.Piglets were orally inoculated with 1.1×1010CFU E120413 strain；b.Mesenteric lymph nodes

3討論

產(chǎn)NDM-1細(xì)菌是一類(lèi)新型細(xì)菌，幾乎對(duì)所有抗生素都有耐藥性，給人類(lèi)健康帶來(lái)極大威脅[4-5]。自2009年首次被發(fā)現(xiàn)以來(lái)，從人類(lèi)病原菌群、正常菌群甚至環(huán)境微生物中均發(fā)現(xiàn)了該類(lèi)細(xì)菌[9-10]。但是，目前均沒(méi)有在動(dòng)物體內(nèi)檢出產(chǎn)NDM-1細(xì)菌的報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)室于2012年4月首次分離到1株豬源產(chǎn)NDM-1大腸埃希菌，然后又在不同豬群中陸續(xù)分離到4株，這表明產(chǎn)NDM-1細(xì)菌在豬群中不是偶然出現(xiàn)和存在的，而具有一定的廣譜性?？股貫E用是“超級(jí)細(xì)菌”不斷出現(xiàn)的首要原因。隨著抗生素濫用情況的不斷加劇，回顧產(chǎn)NDM-1“超級(jí)細(xì)菌”在世界范圍內(nèi)迅速傳播的歷史，不難理解blaNDM-1基因從人源細(xì)菌到環(huán)境微生物的擴(kuò)散之路。因此，在豬身上發(fā)現(xiàn)產(chǎn)NDM-1“超級(jí)細(xì)菌”并非偶然。但是，鑒于豬與人類(lèi)的健康關(guān)系密切，豬源產(chǎn)NDM-1“超級(jí)細(xì)菌”的出現(xiàn)必然引起人們對(duì)這一特殊耐藥細(xì)菌的來(lái)源以及傳播特性的疑慮和擔(dān)心，也凸現(xiàn)出豬源產(chǎn)NDM-1“超級(jí)細(xì)菌”在公共衛(wèi)生學(xué)上的重要地位。

與其他多重耐藥菌感染相似，產(chǎn)NDM-1細(xì)菌主要感染類(lèi)型包括泌尿道感染、傷口感染、醫(yī)院獲得性肺炎、呼吸機(jī)相關(guān)性肺炎、血流感染、導(dǎo)管相關(guān)感染等[6，8，10]。本研究中，在試驗(yàn)開(kāi)始2 d后，同居組仔豬的糞便樣品已能分離出豬源E120413株細(xì)菌，且其平均含量在第4—10天快速上升到2.4×103CFU·g-1。這些試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明該菌能從帶菌動(dòng)物快速傳播給同群動(dòng)物并在仔豬腸道內(nèi)大量增殖；而其傳播途徑是經(jīng)呼吸道還是消化道感染，或是兩者兼而有之尚需進(jìn)一步研究。接種組和同居組仔豬糞便中的帶菌時(shí)間均在7周以上，最長(zhǎng)可超過(guò)11周，這表明E120413株細(xì)菌在仔豬腸道內(nèi)的定植能力較強(qiáng)，仔豬消化道對(duì)該菌的清除能力較弱。而該菌在仔豬腸道的持續(xù)存在能力，并不斷向環(huán)境中排菌，給其傳播擴(kuò)散創(chuàng)造了條件。

接種2 d后，在2號(hào)和6號(hào)仔豬血液中即能檢出E120413株細(xì)菌；4 d后，包括同居組在內(nèi)的所有仔豬血液中均分離到該菌。這表明口服接種的E120413株細(xì)菌不僅能在豬腸道內(nèi)大量增殖和持續(xù)存在，而且能突破其局部免疫防御進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)，并形成菌血癥。無(wú)論是接種組還是同居組仔豬，7 d后即從所有主要臟器中分離到該菌，暗示該菌是通過(guò)血液循環(huán)快速到達(dá)全身各個(gè)器官組織，從而形成全身性的系統(tǒng)感染。但是，從感染豬的臨床癥狀與剖檢病變可以看出，該菌僅能引起感染豬的體溫升高和輕微的局部炎癥反應(yīng)，并不能引起豬的明顯臨床癥狀和嚴(yán)重病理變化。令人驚奇的是，在沒(méi)有明顯臨床癥狀和病理變化的情況下，在所有豬的腦組織(7和14 d)中也檢測(cè)到了E120413株細(xì)菌，且含量相對(duì)較高，其順利突破豬血腦屏障的侵襲機(jī)制值得進(jìn)一步研究。E120413株細(xì)菌在仔豬十二指腸存在的時(shí)間較長(zhǎng)且含量較大，這可能是因?yàn)榇竽c埃希菌對(duì)該器官具有更強(qiáng)的組織嗜性[16-17]，也暗示E120413株細(xì)菌可能在十二指腸形成一個(gè)儲(chǔ)存庫(kù)，然后通過(guò)淋巴流或血流擴(kuò)散到全身各處，最終形成局部或系統(tǒng)的感染與免疫反應(yīng)[16，18]。

4結(jié)論

豬源產(chǎn)NDM-1大腸埃希菌E120413株在豬群中具有較強(qiáng)的交互傳播能力和持續(xù)感染能力，但其致病力較弱。這為豬群中產(chǎn)NDM-1細(xì)菌的防治，也為客觀評(píng)估該菌在豬群內(nèi)部的擴(kuò)散能力及其對(duì)人的潛在風(fēng)險(xiǎn)提供了參考依據(jù)。

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(編輯白永平)

Transmissibility of New Delhi Metallo-β-lactamase-1-ProducingEscherichiacoliIsolate from Pig

CHANG Shi-kai1，ZHAO Zhan-qin1*，XUE Yun2，LONG Ta1，DING Ke1，CHENG Xiang-chao1

(1.LabofVeterinaryMicrobiology，CollegeofAnimalScienceandTechnology，HenanUniversityofScienceandTechnology，Luoyang471003，China；2.LabofMedicalEngineering，CollegeofMedicalTechnologyandEngineering，HenanUniversityofScienceandTechnology，Luoyang471003，China)

Key words:pig；Escherichiacoli；NDM-1；infection

Abstract:One NDM-1-ProducingEscherichiacolistrain，designated as E120413，was isolated from a clinical pig case in China.Here we determined its transmissibility，pathogenicity andinvivodistribution in pigs.We performed kinetic bacterial distribution assays of porcine fecal samples，blood samples and organ tissues.The results demonstrated that E120413 strain can quickly infect the Close contacts of piglets from the inoculated piglets after being given 2 mL of the bacterial suspension containing 1.1×1010CFU of E120413 strain.In these two groups，similar numbers of organisms were isolated from the fecal samples of these two groups of piglets，giving the longest persistence terms of over 11 weeks and 9 weeks，respectively.The E120413 organisms also could be isolated from the blood samples from day 2 to day 10 in the inoculated piglets and from day 4 to day 10 in the control piglets with the peaks of 3.7×105and 4.3×105CFU·mL-1respectively，suggesting that the E120413 organisms might reach the porcine blood circulation and tissues effectively after infection.The presence of live E120413 organisms was then observed in brain，heart，liver，spleen，lung，kidney，stomach，duodenum，and mesenteric lymph nodes in both oral delivery group and control group.The stronger persistence of E120413 organisms in the mesenteric lymph nodes (≥11 weeks) may result from the environment，which was less hostile than that in any other organs of pig based on tissue specificity.But，no obvious signs of disease and serious pathological changes were observed in these two groups of pigs during the entire experimental period.In conclusion，we have shown that the NDM-1-ProducingEscherichiacoliE120413 strain has the stronger transmissibility and ability to cause persistent infection in pigs.

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2016.01.020

收稿日期：2015-06-03

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31302106)；河南省科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目(132300410279)

作者簡(jiǎn)介：常世愷(1989-)，男，河南安陽(yáng)人，碩士生，主要從事動(dòng)物病原微生物學(xué)研究，E-mail：cskvip8@qq.com *通信作者：趙戰(zhàn)勤(1980-)，男，博士，副教授，E-mail：zhaozhanqin@126.com

中圖分類(lèi)號(hào)：S852.612

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào):0366-6964(2016)01-0149-08