影響生鮮乳中β-內(nèi)酰胺酶檢測結(jié)果的因素探討

田西學(xué)，李　勝，李　宏，李會玲，楊漢卿，賈　青，趙彩會，田　間，李　潔，雒亞璇

(陜西省飼料監(jiān)測所，陜西 西安710016)

影響生鮮乳中β-內(nèi)酰胺酶檢測結(jié)果的因素探討

田西學(xué)，李勝，李宏，李會玲，楊漢卿，賈青，趙彩會，田間，李潔，雒亞璇

(陜西省飼料監(jiān)測所，陜西 西安710016)

摘要：生鮮乳質(zhì)量安全關(guān)系人身健康，我國農(nóng)業(yè)部將β-內(nèi)酰胺酶等6種物質(zhì)列入生鮮乳中的非法添加物，明令禁止并通告全國。為了探討影響生鮮乳中β-內(nèi)酰胺酶檢測結(jié)果的因素，我們在省內(nèi)奶畜養(yǎng)殖較為密集的涇陽、富平、臨潼、大荔等地開展了生鮮乳中β-內(nèi)酰胺酶特別監(jiān)督抽檢。結(jié)果表明：在奶價持續(xù)走低，高密度監(jiān)測、嚴管、嚴查、嚴打的情況下，生鮮乳中人為添加β-內(nèi)酰胺酶的可能性不大，生鮮乳中β-內(nèi)酰胺酶的來源主要與奶畜個體健康狀況、飼養(yǎng)管理水平、養(yǎng)殖環(huán)境衛(wèi)生與飲水等因素有關(guān)。

關(guān)鍵詞：生鮮乳 ； β-內(nèi)酰胺酶檢測結(jié)果；影響因素

β-內(nèi)酰胺酶是一種青霉素鉀或青霉素鈉的酶，是β-內(nèi)酰胺類抗生素的分解劑、解抗劑或隱蔽劑，俗稱金玉蘭酶劑。β-內(nèi)酰胺酶的提取物主要來自于霉菌的代謝產(chǎn)物，其本身是一種絲氨酸蛋白酶的衍生物，屬于蛋白質(zhì)多肽。固態(tài)時呈白色粉末、液態(tài)呈淺黃色或微黃色。關(guān)于生鮮乳中β-內(nèi)酰胺酶的來源，國內(nèi)外一些報道認為：生鮮乳中的β-內(nèi)酰胺酶的來源有兩種，一種是內(nèi)源性的即由奶牛體內(nèi)的耐用菌株為排斥抗生素而產(chǎn)生的。另一種是外源性人為添加的。即不法分子為了降解生鮮乳中殘留的抗生素逃避檢測而通過外源性添加到生鮮乳中去。

由于β-內(nèi)酰胺酶具有分解β-內(nèi)酰胺類抗生素的作用，在抗生素乳中加入β-內(nèi)酰胺酶后，乳中抗生素作為抗原與β-內(nèi)酰胺酶活性中心成分結(jié)合，產(chǎn)生競爭性抑制，使抗生素作為抗原暫時失活，當利用抗生素檢測卡檢測牛奶中抗生素時，呈陰性檢出，即檢測不出抗生素，但將加有β-內(nèi)酰胺酶的抗生素乳進行乳酸菌接種試驗時，其抗抑菌效果依然存在。這說明β-內(nèi)酰胺酶并不能使乳中抗生素完全失活，只是不法分子為了規(guī)避抗生素檢測而采取的一種規(guī)避手段。

我國農(nóng)業(yè)部將β-內(nèi)酰胺酶列入牛奶違禁添加物明令禁止，并以公告形式發(fā)布全國。各地奶業(yè)管理部門要加強監(jiān)管，嚴厲打擊，形成高壓態(tài)勢。為了探討影響生鮮乳中β-內(nèi)酰胺酶檢測結(jié)果的因素，我們在我省奶畜養(yǎng)殖密集區(qū)開展了β-內(nèi)酰胺酶特別監(jiān)督抽檢工作。

1抽檢范圍

根據(jù)我省奶業(yè)生產(chǎn)實際，由省飼料監(jiān)測所統(tǒng)一組織技術(shù)培訓(xùn)、技術(shù)指導(dǎo)并提供檢測所需設(shè)備及耗材，選擇我省奶畜養(yǎng)殖較為密集的涇陽、臨潼、富平、大荔等四縣作為生鮮乳中β-內(nèi)酰胺酶監(jiān)測特別監(jiān)督抽查點。

2方案與方法

2.1摸底監(jiān)測

以涇陽、臨潼、富平、大荔四縣的生鮮乳收購站為具體監(jiān)測點，以收購站奶罐中的混合乳為監(jiān)測對象，由各縣奶業(yè)監(jiān)管部門具體負責(zé)并實施監(jiān)測工作，每天監(jiān)測一次，連續(xù)跟蹤監(jiān)測15～20 d，并對檢測結(jié)果進行統(tǒng)計匯總。

2.2篩查監(jiān)測

即乳頭奶監(jiān)測，由各縣奶業(yè)監(jiān)管部門在轄區(qū)內(nèi)選擇2個條件較好的健康奶牛養(yǎng)殖場，每場選擇5頭健康產(chǎn)奶奶牛，連續(xù)5 d監(jiān)測同一頭奶牛乳頭奶中的β-內(nèi)酰胺酶情況，并進行統(tǒng)計匯總。

2.3技術(shù)跟進與指導(dǎo)

篩查監(jiān)測期間，省所組織了技術(shù)力量開展檢測前的技術(shù)培訓(xùn)與熟化，在檢測過程中，派出技術(shù)人員進行現(xiàn)場技術(shù)跟進和現(xiàn)場技術(shù)指導(dǎo)，解決技術(shù)難點和檢測過程中出現(xiàn)的各種問題，以保證檢測數(shù)據(jù)的準確性。

2.4跟蹤調(diào)查

檢測期間，及時匯總各個檢測點上反饋的檢測結(jié)果，積極組織技術(shù)人員深入奶牛養(yǎng)殖場戶,針對生鮮乳中的β-內(nèi)酰胺酶檢出情況，開展調(diào)查工作，尋找β-內(nèi)酰胺酶的影響因素。

3抽檢與調(diào)查結(jié)果

3.1摸底監(jiān)測結(jié)果

此次摸底監(jiān)測，共檢測生鮮乳收購站321個，監(jiān)測生鮮乳樣品4118批次，檢出β-內(nèi)酰胺酶陽性樣品20批次，檢出率為0.46%。經(jīng)過對20批次β-內(nèi)酰胺酶陽性樣品(采用杯碟法)進行確證后，20批次樣品均含有β-內(nèi)酰胺酶。

3.2篩查結(jié)果

持續(xù)監(jiān)測8個養(yǎng)殖環(huán)境較好的奶牛養(yǎng)殖場的40頭健康奶牛的乳頭奶，監(jiān)測乳頭奶樣品200批次，全部采用現(xiàn)場檢測，結(jié)果全部呈現(xiàn)陰性，即未檢出β-內(nèi)酰胺酶。

3.3跟蹤調(diào)查結(jié)果

根據(jù)β-內(nèi)酰胺酶陽性樣品，我們深入奶牛養(yǎng)殖場戶,采取現(xiàn)場座談、提問、實際查看飼喂現(xiàn)場和走訪群眾等方式進行實際調(diào)研，并對一些群眾觀點和認識，采取了逐一核實和現(xiàn)場采樣檢測的方法進行印證，通過以上細致工作，我們認為影響生鮮乳中β-內(nèi)酰胺酶檢測結(jié)果的因素有以下幾個方面：

3.3.1有病個體或長期不干凈飲水乳頭奶監(jiān)測結(jié)果表明：連續(xù)5 d測定利用人工擠奶方法從健康個體奶牛乳頭上擠出的牛奶進行β-內(nèi)先胺酶檢測，均未檢出β-內(nèi)先胺酶；但有病牛或不健康的奶牛所產(chǎn)的牛奶均被檢出β-內(nèi)先胺酶。除此之外，調(diào)查還發(fā)現(xiàn)，給奶牛長期飲用不干凈或高溫環(huán)境放置時間較長的自來水，牛奶中也會檢出β-內(nèi)先胺酶。這些現(xiàn)象表明：生鮮乳中β-內(nèi)酰胺酶的來源，不僅與奶牛個體健康與否有關(guān)，還與飼養(yǎng)管理條件及飲水衛(wèi)生有關(guān)。

3.3.2乳的種類及新鮮程度生鮮乳具有生物活性，產(chǎn)生β內(nèi)酰胺酶是生鮮乳內(nèi)生物菌群的一種自我機能反應(yīng)。剛擠出健康奶牛個體所產(chǎn)生的生鮮乳β內(nèi)酰胺酶監(jiān)測呈陰性，當儲存不當、放置時間過長或冷凍時間過長，同樣會被檢出β內(nèi)酰胺酶。我們將β內(nèi)酰胺酶陰性樣品冷藏到4℃冰箱中3 d后，取出解凍后進行β內(nèi)酰胺酶檢測，結(jié)果被檢出陽性；將新鮮的β內(nèi)酰胺酶陰性樣品自然放置2 d后進行檢測，結(jié)果也呈陽性。這說明β-內(nèi)酰胺酶檢測結(jié)果與生鮮乳的新鮮程度有關(guān)。

3.3.3檢測卡的選擇性與差異性不同的β-內(nèi)酰胺酶檢測卡，對乳的種類有著明顯的選擇性，用前要進行技術(shù)評價。用維德維康的β內(nèi)酰胺酶檢測卡，對牛奶和羊奶的添加樣進行β內(nèi)酰胺酶檢測試驗，結(jié)果β內(nèi)酰胺酶檢測卡對牛奶非常敏感，對羊奶的敏感程度不如牛奶，因而出現(xiàn)個別假陽性。另外，使用相同批次的陽性樣品和陰性樣品，對兩家公司的β內(nèi)酰胺酶檢測卡進行評價時，其測試結(jié)果的陽性差異率與陰性差異率也相差較大。

3.3.4環(huán)境溫度與檢測卡的穩(wěn)定性試驗用同一β內(nèi)酰胺酶的陽性牛奶，用相同的檢測卡在高溫和低溫環(huán)境下進行檢測，結(jié)果陽性重合率只有80%。這說明β內(nèi)酰胺酶檢測卡的穩(wěn)定性受檢測環(huán)境溫度影響較大。使用同一β內(nèi)酰胺酶的陽性和陰性牛奶，對北京尤尼賽斯科技有限公司、北京維德維康科技有限公司、深圳綠詩源有限公司的檢測卡進行比較試驗，結(jié)果表明：不同的檢測卡，在相同條件下，其檢測結(jié)果的陽性重合率與陰性重合率也存在不同程度的差異。因此，使用檢測卡時，要先進行技術(shù)評價和環(huán)境溫度測評，保證環(huán)境溫度符合檢測要求。

3.3.5采樣工具的衛(wèi)生潔凈程度生鮮乳樣品采集時，所用的采樣瓶的衛(wèi)生潔凈程度，對β內(nèi)酰胺酶檢測結(jié)果同樣會產(chǎn)生影響。用污染或不干凈的采樣瓶，采集健康奶牛的乳頭奶，有時也會出現(xiàn)β內(nèi)酰胺酶陽性結(jié)果，這主要是因為污染或不干凈的采樣瓶有某些結(jié)構(gòu)類似β內(nèi)酰胺酶的抗原物質(zhì)，會導(dǎo)致β內(nèi)酰胺酶被檢出。

3.3.6一些治療奶牛乳房炎的抗菌藥物調(diào)查中，據(jù)用戶反映，一些標注“無抗”用于治療奶牛乳房炎的抗菌藥物直接注射進奶牛乳房后，奶牛所產(chǎn)的牛奶會被檢出β內(nèi)酰胺酶，在現(xiàn)場進行試驗時，將這些“無抗”藥滴加到陰性樣品中進行β內(nèi)酰胺酶檢測時，樣品均呈陽性。另外，用戶還反映，含“無抗”藥物的牛奶，藥效持續(xù)時間較長，殘留在管道中清洗3次后，奶樣仍會檢出β內(nèi)酰胺酶。

4結(jié)論與建議

根據(jù)這次生鮮乳中β內(nèi)酰胺酶的特別監(jiān)督抽查結(jié)果，我們認為目前在奶價持續(xù)走低，高密度監(jiān)測、嚴管、嚴查、嚴打的情況下，人為添加的可能性不大，而影響生鮮乳中β-內(nèi)酰胺酶檢測結(jié)果的主要因素與奶畜個體健康狀況、飼養(yǎng)管理水平、養(yǎng)殖衛(wèi)生環(huán)境及飲水等有關(guān)。為了避免或減少生鮮乳中β-內(nèi)酰胺酶的污染情況，切實提高我省生鮮乳質(zhì)量安全水平，特作如下建議。

4.1要積極倡導(dǎo)“健康養(yǎng)殖理念”

努力提高飼養(yǎng)管理水平，降低奶畜疾病發(fā)生風(fēng)險，要加強科學(xué)養(yǎng)殖技術(shù)、技術(shù)規(guī)范、技術(shù)方法方面

的培訓(xùn)和指導(dǎo)，積極倡導(dǎo)“健康養(yǎng)殖理念”，大力推進科學(xué)養(yǎng)殖實用技術(shù)的普及、引導(dǎo)和推廣，杜絕養(yǎng)殖環(huán)節(jié)違禁獸藥、添加劑的添加和使用現(xiàn)象，努力改善奶畜養(yǎng)殖及飲水的衛(wèi)生環(huán)境，不斷提高奶畜飼養(yǎng)管理水平，降低奶畜疾病發(fā)生風(fēng)險。要加強對有病奶畜的登記和分群管理，防止有病奶畜乳、休藥期乳、有抗酸敗奶流入市場，努力提升奶源生鮮乳質(zhì)量安全水平。

4.2要加快奶站化驗室條件與能力建設(shè)

增強違禁添加物的預(yù)防與控制能力，要通過宣傳引導(dǎo)、法律規(guī)范、項目資金和財政資金支持，加快奶站化驗室條件建設(shè)與檢測能力建設(shè)。重點加強奶站檢測儀器設(shè)備建設(shè)和奶站檢測人員檢測技術(shù)能力建設(shè)?？焖偬嵘陶净炇业目焖贆z測技術(shù)水平。

4.3持續(xù)開展生鮮乳中β內(nèi)酰胺酶等違禁物質(zhì)的抽檢

加強跟蹤摸排與溯源工作，我國農(nóng)業(yè)部將β-內(nèi)酰胺酶列入牛奶違禁添加物并以公告形式發(fā)布全國。嚴厲打擊違法添加行，一經(jīng)發(fā)現(xiàn)，及時移送司法機關(guān)進行追查，發(fā)現(xiàn)一起，查處一起，絕不手軟。各地奶業(yè)監(jiān)管部門要持續(xù)開展生鮮乳中β內(nèi)酰胺酶等違禁物質(zhì)抽檢與跟蹤監(jiān)測，形成嚴管、嚴打之勢，確保生鮮乳質(zhì)量安全。

4.4加強“無抗”類藥物成份的分析和研究

進一步查明乳中“β內(nèi)酰胺酶”是否與“無抗”類藥物有關(guān),根據(jù)調(diào)查和用戶反映，“無抗”類藥物有可能會引起生鮮乳中β內(nèi)酰胺酶檢出，建議開展“無抗”類藥物成份分析和研究，進一步查明乳中“β內(nèi)酰胺酶”是否與“無抗”類藥物有關(guān)。

4.5要加大技術(shù)培訓(xùn)

不斷提高生鮮乳質(zhì)量安全檢測技術(shù)水平,β內(nèi)酰胺酶快速檢測技術(shù)經(jīng)過培訓(xùn)全省現(xiàn)已基本掌握，但在實際檢測過程中，還有很多問題需要注意，如乳的種類、乳的新鮮程度、β-內(nèi)先胺酶檢測的穩(wěn)定性、采樣工具的潔凈程度等諸多因素都會影響到檢測結(jié)果的準確性。因此，要不斷地學(xué)習(xí)、交流和總結(jié)，努力提升檢測隊伍的技術(shù)水平。

[收稿日期]2015-10-18

[作者簡介]田西學(xué)(1959-)，男，陜西富平人,本科，研究員，主要從事畜牧技術(shù)推廣和飼料與生鮮乳質(zhì)量安全監(jiān)測與管理工作。

[中圖分類號]TS 252

[文獻標識碼]A

[文章編號]1004-6704(2016)02-0064-02