穿心蓮內(nèi)酯及其磺酸鹽抗血小板聚集的實驗研究*

段龍士 危瑋 尹曉明 謝歡 吳東風(fēng) 趙詩云#

（1江西省吉安市第一人民醫(yī)院吉安 343000；2江西省中醫(yī)藥研究院南昌 330046；3江西省人民醫(yī)院檢驗科南昌 330006）

穿心蓮內(nèi)酯及其磺酸鹽抗血小板聚集的實驗研究*

段龍士1?，|2尹曉明3謝歡2吳東風(fēng)2趙詩云2#

（1江西省吉安市第一人民醫(yī)院吉安 343000；2江西省中醫(yī)藥研究院南昌 330046；3江西省人民醫(yī)院檢驗科南昌 330006）

目的：探討穿心蓮內(nèi)酯及其磺酸鹽（喜炎平針）對血小板聚集的影響。方法：選擇穿心蓮內(nèi)酯、穿心蓮內(nèi)酯磺酸鹽（喜炎平）用二磷酸腺苷（ADP）作為誘導(dǎo)劑，分別測定大鼠體內(nèi)給藥對血小板5 min內(nèi)之最大聚集率。結(jié)果：大鼠體內(nèi)穿心蓮內(nèi)酯給藥劑量600 mg/kg與空白對照組比較（P＞0.05）無顯著性差異，穿心蓮內(nèi)酯磺酸鹽體內(nèi)給藥劑量400 mg/kg與空白對照組比較（P＜0.05，P＜0.01），可顯著降低5 min之內(nèi)最大聚集率。結(jié)論：穿心蓮內(nèi)酯對SD大鼠體內(nèi)給藥600 mg/kg抗血小板聚集作用不明顯，而其磺酸鹽400 mg/kg抗血小板聚集的作用明顯。

穿心蓮內(nèi)酯；穿心蓮內(nèi)酯磺酸鹽；SD大鼠；血小板聚集率

穿心蓮為爵床科植物的全草或葉。穿心蓮內(nèi)酯（Andrographolide）為天然植物穿心蓮的主要有效成份，分子式C20H3O5，分子量為350.45，具有清熱解毒、消炎止痛之功效，對細(xì)菌性與病毒性上呼吸道感染及痢疾有特殊療效，被譽(yù)為天然抗生素藥物，該品為二萜類內(nèi)酯化合物，均難溶于水，通常僅能口服給藥[1]。穿心蓮內(nèi)酯總磺酸鈉，分子式：C20H29O5·NaSO3，它是通過穿心蓮內(nèi)酯與濃硫酸發(fā)生酯化、脫水、成鹽精制而成的水溶性穿心蓮內(nèi)酯磺酸鈉，由于它是在其結(jié)構(gòu)中引入親水基團(tuán)，因此其水溶性好，療效高，具有清熱解毒止咳止痢，用于支氣管炎、扁桃體炎、細(xì)菌性痢疾等，通常為注射用藥[2～3]。近年來有研究發(fā)現(xiàn)清熱抗炎中藥同樣有抗血小板聚集的作用，有報道用穿心蓮內(nèi)酯能夠使心肌梗死的死亡率下降13%以上，但抗血小板聚集效果如何報道不多，課題組研究發(fā)現(xiàn)穿心蓮內(nèi)酯磺酸鹽具有抗血小板聚集的作用，通過兩者比較發(fā)現(xiàn)穿心蓮內(nèi)酯及穿心蓮內(nèi)酯磺酸鹽在血小板聚集功能上具有一定的差異，探討其藥理學(xué)的作用和可能的機(jī)制，為今后深入研究奠定了基礎(chǔ)，有望通過改變穿心蓮內(nèi)酯的分子結(jié)構(gòu)在功效上能得到進(jìn)一步開發(fā)和應(yīng)用。

1 材料

1.1 動物SD大鼠，SPF級，雄性，體重260～280 g，由湖南斯萊克景達(dá)實驗動物有限公司提供，許可證SCXK（湘）2011-0003。

1.2 藥物與試劑穿心蓮內(nèi)酯滴丸150 mg/袋（天士力制藥集團(tuán)股份有限公司）；穿心蓮內(nèi)酯磺酸鈉（喜炎平針2 ml∶50 mg，江西青峰藥業(yè)有限公司，批號2015032003）；阿司匹林（Aspirin）購于拜耳醫(yī)藥保健有限公司，批號BJ16334；二磷酸腺苷（Adenosine Diphosphate，ADP）購于美國海倫娜公司。

1.3 主要儀器AggRam血小板聚集儀，型號：BJF52001，購于美國海倫娜公司，試劑為原裝配套試劑。日本西斯美康血凝儀CS-5100，試劑均為原裝進(jìn)口配套。

2 方法與結(jié)果

2.1 大鼠體內(nèi)給藥對血小板聚集影響的方法SD雄性大鼠32只，分成四組，每組8只，即正常對照組（生理鹽水）、阿司匹林腸溶片組（60 mg/kg）、穿心蓮內(nèi)酯滴丸組（600 mg/kg），穿心蓮內(nèi)酯磺酸鈉組（400 mg/kg）。阿司匹林腸溶片組、穿心蓮內(nèi)酯組、穿心蓮內(nèi)酯磺酸鹽組腹腔注射給藥連續(xù)5 d，第4天禁食過夜，第5天給藥2 h后用乙醚麻醉，腹主動脈取血，用3.8%枸櫞酸鈉溶液按1∶9抗凝，以1 000 r/min離心10 min取上清液即得富血小板血漿（PRP），剩余部分以3 000 r/min離心10 min，取上清液即得貧血小板血漿（PPP），用PPP調(diào)PRP中的血小板數(shù)為（3～4）×109/L，采用比濁法測定，取250 μl置37℃恒溫培養(yǎng)箱溫育5 min，加入誘導(dǎo)劑ADP溶液25 μl（5 μmol/L），用血小板聚集儀進(jìn)行動態(tài)測量血小板聚集能力，記錄血小板5 min最大聚集率（PAGmax），與正常對照組比較計算給藥組血小板聚集的最大抑制率（IR），IR=（正常對照組PAGmax-給藥組PAGmax）／正常對照組PAGmax×100%。

2.2 大鼠體內(nèi)給藥對血小板聚集影響的結(jié)果穿心蓮內(nèi)酯磺酸鹽組、阿司匹林腸溶片組血小板在5 min內(nèi)最大聚集率均明顯低于正常對照組（P＜0.01），有非常顯著性意義。阿司匹林腸溶片組、穿心蓮內(nèi)酯組、穿心蓮內(nèi)酯磺酸鹽組IR分別為20.6%、2.57%、36.4%。說明穿心蓮內(nèi)酯磺酸鹽具有抗血小板聚集作用，而穿心蓮內(nèi)酯組和正常對照組比較（P＞0.05，）無統(tǒng)計學(xué)意義。見表1。

表1 穿心蓮內(nèi)酯及其磺酸鹽對ADP誘導(dǎo)大鼠體內(nèi)血小板聚集的影響（）

表1 穿心蓮內(nèi)酯及其磺酸鹽對ADP誘導(dǎo)大鼠體內(nèi)血小板聚集的影響（）

注：與正常對照組比較，*P＜0.01。

組別n劑量（mg/kg）血小板5 min最大聚集率（%）血小板聚集抑制率（%）正常對照組阿司匹林腸溶片組穿心蓮內(nèi)酯滴丸組穿心蓮內(nèi)酯磺酸鹽組8 8 8 8 60 400 600 70.34±8.78 58.26±6.50*71.51.±5.31 46.66±7.47*20.6 2.57 36.4

3 討論

血小板的聚集是動脈血栓和微血栓形成的最主要的因素，其機(jī)理主要是血小板過度活化（釋放）和凝血系統(tǒng)過度激活的結(jié)果?？寡“寰奂臋C(jī)理可能是：（1）抑制血小板環(huán)氧化酶，使血小板產(chǎn)生血栓烷素A2的能力下降，ADP誘導(dǎo)血小板顆粒內(nèi)的ADP釋放，而阻止了Ⅱ相聚集；（2）封閉和阻斷此纖維蛋白受體（FgR）的作用，達(dá)到競爭性抑制；（3）ADP可抑制血小板表面ATP酶的活性，ATP酶可以防止血小板相互粘聚，達(dá)到抑制血小板聚集；（4）封閉血小板暴露出磷脂表面，因而阻斷Ca2+“搭橋”而達(dá)到抗血小板粘聚的作用[4～6]。

眾所周知在預(yù)防心腦血管疾病藥物中阿司匹林（ASP）的效果顯著，主要作用是抑制血小板聚集、黏附及釋放，增強(qiáng)內(nèi)皮細(xì)胞功能，進(jìn)而防治血栓的形成，達(dá)到降低心腦血管疾病風(fēng)險的作用。其機(jī)理為不可逆的抑制血小板內(nèi)環(huán)氧合酶的合成，阻礙血小板花生四烯酸衍變PDD2，PGH2以及TXA2的生成，最終達(dá)到抑制血小板聚集、血栓的形成，還對ADP誘導(dǎo)的Ⅱ相聚集及低濃度的凝血酶都有抑制作用。雖然ASP在預(yù)防和治療血栓性疾病方面都發(fā)揮了積極的作用，但是引起血小板聚集的因素很多，它的作用途徑較為單一，加之其副作用等問題，在臨床應(yīng)用上還是受到一定的限制。

結(jié)果顯示，穿心蓮內(nèi)酯在一定藥物范圍內(nèi)抗血小板聚集作用不明顯，可能與其分子結(jié)構(gòu)有關(guān)，水溶性差，利用率低。穿心蓮內(nèi)酯磺酸鹽化學(xué)成分確定，抗炎功效明顯，其水溶性好，穩(wěn)定性及生物利用度高，通過其對大鼠的抗血小板聚集的藥理學(xué)研究，發(fā)現(xiàn)穿心蓮內(nèi)酯磺酸鹽可明顯降低血小板聚集率，表明穿心蓮內(nèi)酯磺酸鹽對血小板聚集有抑制作用。至于穿心蓮內(nèi)酯磺酸鹽是通過哪一途徑使血小板聚集率下降，這些機(jī)理都有待今后進(jìn)一步探討。

[1]劉晟楠,魏惠珍,殷文靜,等.不同產(chǎn)地不同部位3種穿心蓮內(nèi)酯成分研究[J].時珍國醫(yī)國藥,2016,27(6):1483-1484

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].2015年版.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2015.412,1308

[3]鐘星明,鐘美興,邱芳,等.穿心蓮內(nèi)酯對心肌肥厚大鼠心肌膠原及心肌酶譜的影響[J].時珍國醫(yī)國藥,2016,27(4):822-823

[4]趙詩云,危瑋,尹小明,等.喜炎平抗ADP誘導(dǎo)的血小板聚集作用的實驗研究[J].實用中西醫(yī)結(jié)合臨床,2016,16(8):81-82

[5]尹小明,趙詩云,彭旦明,等.SD大鼠血小板聚集實驗測定方法的研究[J].南昌大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2013,53(8):6-7

[6]尹小明,趙詩云,饒麗華,等.雞血藤不同成分抗AA誘導(dǎo)的血小板聚集作用得實驗研究[J].2016,34(4):422-424

R285.5

B

10.13638/j.issn.1671-4040.2016.12.046

2016-11-08）

江西省衛(wèi)生計生委中醫(yī)藥科研課題（編號：2008A291）

#通訊作者；趙詩云，E-mail：2605594053@qq.com