仙鶴草不同提取物對腫瘤細(xì)胞作用的研究概況

王 蓮，張榮泉

(天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所，天津 300020)

仙鶴草不同提取物對腫瘤細(xì)胞作用的研究概況

王 蓮，張榮泉*

(天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所，天津 300020)

本文綜述了近年來中藥仙鶴草不同提取部位的水提物、乙酸乙酯提取物、乙醚提取物、丙酮提取物及其成分 鞣酸、仙鶴草酚及多糖等在體外對腫瘤細(xì)胞的作用，提示該中藥對腫瘤細(xì)胞具有的較強(qiáng)的生物活性，抑制腫瘤細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，而凋亡發(fā)生機(jī)制可能與Bcl-2和P53蛋白表達(dá)改變有關(guān)。今后應(yīng)加強(qiáng)生物體內(nèi)的藥效學(xué)和作用機(jī)理研究，為抗腫瘤新藥的開發(fā)提供依據(jù)。

仙鶴草，提取物，抑制腫瘤

仙鶴草為薔薇科植物龍芽草(AgrimoniaPilosaLedeb)的干燥地上部分[1]，性寒，味苦、澀，含有酯、酚、黃酮、皂苷、鞣質(zhì)、糖苷、揮發(fā)油及有機(jī)酸等成分，傳統(tǒng)主要用于治療咯血、尿血、便血、崩漏等各種出血癥[2]，有收斂止血、止帶止痢、活血調(diào)經(jīng)、補(bǔ)虛壯體等諸多功效[3]。現(xiàn)代藥理研究證明其具有抗炎、止血、抗氧化、抗菌消炎、抗腫瘤、降血壓及血糖[4-9]等生物活性。尤其該中藥的其抗腫瘤作用尤為明顯，其不同提取物在體外對多種腫瘤細(xì)胞具有抑制或殺傷作用?，F(xiàn)就仙鶴草不同提取物對腫瘤細(xì)胞作用的研究概況綜述如下。

1 仙鶴草水提物的作用

鄒夏慧等[10]使用不同濃度仙鶴草水提液處理人肝癌細(xì)胞(SMMC-7721),采用MTT法檢測細(xì)胞活力，并計算其抑制率，觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果表明該水提液能夠明顯抑制SMMC-7721細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，而細(xì)胞凋亡機(jī)制則可能與P53蛋白表達(dá)上調(diào)和Bcl-2蛋白表達(dá)下調(diào)有關(guān)。李紅枝等[11]以高、中、低3個劑量(4.0、2.0及1.0 mg/ml)的仙鶴草水溶性提取物給小鼠灌胃，連續(xù)30 d，觀察小鼠骨髓細(xì)胞微核實驗和睪丸染色體畸變實驗的抗突變作用，結(jié)果顯示該提取物對小鼠肉瘤(S180)、肝癌(H22)、宮頸癌(U14)、腦瘤(B22)、艾氏腹水癌(EAC)、黑素瘤(B16)和大鼠瓦克癌(W256)體外培養(yǎng)細(xì)胞均有較好抑制作用，殺死癌細(xì)胞的同時未損害正常細(xì)胞，可用于治療各種腫瘤。將仙鶴草注射液作用于胃癌(BGC-803)細(xì)胞和宮頸癌(HeLa)細(xì)胞，細(xì)胞抑制率分別達(dá)到61.9%和67.9%。流式細(xì)胞檢測結(jié)果顯示，仙鶴草注射液可干擾腫瘤細(xì)胞周期進(jìn)程，阻滯腫瘤細(xì)胞由G1+G0期向S期和G2+M期轉(zhuǎn)化，對人腫瘤細(xì)胞具有生長抑制作用[12]。另有報道[13]，使用仙鶴草注射液治療小鼠前列腺移植瘤5周后，發(fā)現(xiàn)腫瘤瘤質(zhì)量降低，瘤體減小，腫瘤組織大片壞死，表明仙鶴草對前列腺實體性移植瘤具有明顯的抑制作用。

仙鶴草水提液抑制腫瘤作用機(jī)理可能與調(diào)節(jié)體內(nèi)免疫蛋白作用有關(guān)。馬麗萍等[14]分別將0、2、4、8和16 g/L濃度的仙鶴草水提液作用于食管癌(Eca109)細(xì)胞，24、48和72 h后觀察其對Eca109細(xì)胞生長的抑制作用，并運(yùn)用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)，檢測16 g/L水提液作用72 h對Eca109細(xì)胞Bcl-2、P53蛋白表達(dá)的影響。MTT法測定結(jié)果表明，在16g/L仙鶴草水提液作用48 h和72 h后，Eca109細(xì)胞生長明顯受抑；而免疫組化結(jié)果顯示16 g/L仙鶴草水提液作用72 h后，Eca109細(xì)胞內(nèi)Bcl-2蛋白表達(dá)下調(diào)，P53蛋白表達(dá)上調(diào)。證實其誘導(dǎo)Eca109細(xì)胞凋亡的機(jī)制可能與下調(diào)Bcl-2蛋白表達(dá)及上調(diào)P53蛋白表達(dá)有關(guān)。而鄒夏慧等[15]亦以不同濃度的仙鶴草水提物細(xì)胞培養(yǎng)液處理肝癌(SMMC-7721)細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)其作用48和72 h后，細(xì)胞呈現(xiàn)明顯的凋亡形態(tài)學(xué)改變；20 mg/ml組的細(xì)胞凋亡率分別為19.5%和23.0%，40 mg/ml組分別為33.4%和42.7%；20 mg/ml組的Bcl-2蛋白陽性表達(dá)率分別為71.9%和58.5%，40 mg/ml組分別為47.9%和26.5%；20 mg/ml組的P53蛋白陽性表達(dá)率分別為22.9%和50.6%，40 mg/ml組分別為48.7%和83.7%。顯然水提液能較明顯地抑制SMMC-7721細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并呈現(xiàn)劑量、時間依賴性，凋亡發(fā)生機(jī)制可能與Bcl-2和P53蛋白表達(dá)改變有關(guān)。

2 仙鶴草乙酸乙酯提取物的作用

以不同質(zhì)量濃度的仙鶴草乙酸乙酯部位(0、50、100、150、200及250 μg/ml)作用于體外培養(yǎng)的人肝癌(HepG2)細(xì)胞，MTT法檢測其細(xì)胞生長抑制率；同時以流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡和腫瘤細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)的變化；Fluo-3/AM熒光探針觀察腫瘤細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的變化。檢測結(jié)果顯示該部位(總鞣質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為19.91%)可顯著抑制HepG2細(xì)胞的生長，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，其IC50為127.85 μg/ml。當(dāng)作用48 h后，HepG2細(xì)胞數(shù)量明顯減少；在Fluo-3/AM熒光探針的作用下，具有較強(qiáng)綠色熒光；同時檢測出細(xì)胞內(nèi)ROS具有較明顯增加。結(jié)果表明，仙鶴草乙酸乙酯有效部位能夠抑制HepG2細(xì)胞的生長，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，作用機(jī)制可能是與腫瘤細(xì)胞內(nèi)鈣離子的釋放和ROS的增加有關(guān)[16]。另有文獻(xiàn)[17]報道，使用不同濃度的仙鶴草乙酸乙酯提取物作用人肝癌(BEL-7402)細(xì)胞，72 h后細(xì)胞的生長增殖作用被抑制，并呈現(xiàn)劑量依賴性，作用較明顯，OD值與空白組相比，具有顯著性差異(P<0.05)，其IC50為89.277 μg/ml。

3 仙鶴草乙醚提取物的作用

將乙醚提取物與生理鹽水配制成1 g/L的混懸液，加入HeLa細(xì)胞培養(yǎng)基中，結(jié)果顯示，HeLa細(xì)胞明顯減少，提示其對HeLa細(xì)胞具有一定的抑制作用，其抑制率為35%[18]。

4 仙鶴草丙酮提取物的作用

仙鶴草丙酮提取物的正丁醇萃取層可顯著性抑制BEL-7402細(xì)胞生長，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，IC50為107.54 μg/ml，作用48 h后，BEL-7402細(xì)胞數(shù)量明顯減少，使用Fluo-3/AM熒光探針進(jìn)行檢測發(fā)現(xiàn)，其具有較強(qiáng)綠色熒光，同時檢測出細(xì)胞內(nèi)ROS明顯增加。結(jié)果表明，試驗樣品能夠抑制BEL-7402細(xì)胞生長，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，而作用機(jī)制可能與細(xì)胞內(nèi)鈣離子釋放和ROS增加有關(guān)[19]。

5 仙鶴草不同成分對腫瘤細(xì)胞的作用

仙鶴草中的鞣酸成分可以抑制腫瘤細(xì)胞，增強(qiáng)免疫細(xì)胞活性，認(rèn)為是仙鶴草中主要的抗腫瘤活性成分。有研究報道[20]，仙鶴草鞣酸能夠明顯抑制體外培養(yǎng)的人癌細(xì)胞裸鼠轉(zhuǎn)移瘤肺癌細(xì)胞株(SPC-A-1)、HeLa、人乳腺癌細(xì)胞株(MCF-7)和低分化胃黏液腺癌(Mgc803)，且對其中的HeLa作用最強(qiáng)，SPC-A-1次之，對HeLa 、SPC-A-1 及MCF-7的IC50分別為6.2、12.4及49.2 μg/ml，標(biāo)志著仙鶴草有可能成為臨床上治療宮頸癌和肺腺癌的有效藥物。此外，仙鶴草酚對白血病細(xì)胞(K562)也具有明顯的抑制作用，MTT試驗及流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果皆表明仙鶴草酚對K562白血病細(xì)胞活性及細(xì)胞凋亡率具有一定的影響，仙鶴草酚(0、0.11、1.0 mg/ml)劑量依賴性地抑制了K562細(xì)胞活性，增加了其凋亡率(P<0.05)[21]。

研究發(fā)現(xiàn)，仙鶴草總多糖對腦膠質(zhì)瘤(U251)細(xì)胞株增殖具有明顯的體外抑制作用(P<0.01)，并表現(xiàn)出濃度依賴關(guān)系，IC50為1.35 g/L，U251細(xì)胞經(jīng)該多糖處理后顯示出典型的凋亡形態(tài)變化，推測其抗腫瘤機(jī)制可能與誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡有關(guān)[22]。仙鶴草素為一種丹寧酸。在腹水型和固體型嚙齒動物腫瘤實驗中發(fā)現(xiàn)，在MM2腫瘤細(xì)胞腹腔接種前后，其經(jīng)腹腔給予仙鶴草素的劑量超過10 mg/kg時，可幾乎完全抑制小鼠體內(nèi)腫瘤的生長，延長了MM2腫瘤小鼠的壽命，甚至得以治愈。雖然其在體外對MM2細(xì)胞顯示出強(qiáng)烈的細(xì)胞毒性，但是通過向培養(yǎng)液中添加胎牛血清便能夠使其毒性減少至約初始活性的4%。另一方面，腹腔注射仙鶴草素亦增加了外圍白細(xì)胞的數(shù)量和單核細(xì)胞的比率。在腹腔注射丹寧酸的第4 d，附著細(xì)胞毒性的腹腔滲出細(xì)胞數(shù)量同樣增多；小鼠的脾臟增大，且脾臟細(xì)胞具有占用3H-胸苷的能力；而在未治療的小鼠中，仙鶴草素顯示出微弱的抗脾臟細(xì)胞直接遷移活動，表明了仙鶴草素是一種潛在的抗腫瘤丹寧酸，其可能是通過對腫瘤細(xì)胞和免疫細(xì)胞的作用而提高了宿主動物的免疫應(yīng)答[23]。

仙鶴草臨床主要用于治療腫瘤、糖尿病、婦科疾病、消化系統(tǒng)疾病以及泌尿系統(tǒng)疾病等[24-26]。本文綜述了仙鶴草的不同提取物、成分對不同的腫瘤細(xì)胞具有一定的抑制作用，作用濃度及其機(jī)理也闡述得較為清楚，為今后的深入研究打下了良好的理論基礎(chǔ)，但對其在動物體內(nèi)抗腫瘤作用的研究尚待加強(qiáng)。

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2016-03-15

*通訊作者：張榮泉，E-mail：zhangrongquan928@126.com。

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