基于化學(xué)成分臨床利用量的不同產(chǎn)地黃柏質(zhì)量評(píng)價(jià)

徐玉玲，吳南軒，李鵬程，伍蕊嗣，賈裕杰，劉 濤

（成都大學(xué)藥學(xué)與生物工程學(xué)院，四川 成都 610106）

基于化學(xué)成分臨床利用量的不同產(chǎn)地黃柏質(zhì)量評(píng)價(jià)

徐玉玲，吳南軒，李鵬程，伍蕊嗣，賈裕杰，劉 濤

（成都大學(xué)藥學(xué)與生物工程學(xué)院，四川 成都 610106）

采用小檗堿臨床利用量對(duì)黃柏藥材的質(zhì)量進(jìn)行再評(píng)價(jià)研究。通過(guò)正交試驗(yàn)優(yōu)選黃柏小檗堿最佳臨床提取工藝，根據(jù)最佳提取工藝采用HPLC法測(cè)定5批不同產(chǎn)地黃柏小檗堿含量，然后計(jì)算其臨床利用量。黃柏小檗堿最佳臨床提取工藝為加藥材10倍量的水提取3次，每次1.5h。貴州、陜西、湖北、天津、新疆的小檗堿臨床利用量（g/100g）分別為11.10，7.30，1.35，1.30，1.40g。該文建立的方法將中藥材中的有效成分與臨床實(shí)際利用情況相聯(lián)系，為黃柏及其他的中藥材品質(zhì)評(píng)價(jià)提供新思路。

黃柏；小檗堿；臨床利用量；質(zhì)量評(píng)價(jià)

0 引 言

黃柏為一種常用中藥，是蕓香科植物黃皮樹(shù)（Phellodendron chinense Schneid.）的干燥樹(shù)皮，具有清熱瀉火、解毒退虛熱之功效，小檗堿為其主要成分之一[1]。小檗堿為臨床上常用的一種廣譜抗菌藥，主要用于菌痢、胃腸炎、癰腫等細(xì)菌性感染[2]。研究證明小檗堿還具有抗腫瘤、抗心律失常、降血糖、將壓等作用[3]。目前藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)主要以化學(xué)有效成分含量為指標(biāo)，但一些研究發(fā)現(xiàn)有些有效成分在臨床上利用量不高，出現(xiàn)了“質(zhì)優(yōu)用劣”的現(xiàn)象。《中國(guó)藥典》2015版一部里收載的中藥材有效成分含量為（過(guò)三號(hào)藥典篩）藥粉含量，即用部分藥材含量來(lái)作為藥材的整體含量，一些研究表明，取過(guò)篩后的細(xì)粉進(jìn)行含量測(cè)定，所得結(jié)果并不能完全代表藥材整體真實(shí)的含量。因此劉濤等[4]提出用藥材真實(shí)含量結(jié)合有效成分臨床利用量來(lái)評(píng)價(jià)藥材的質(zhì)量。“中藥成分臨床利用量”是指藥材成分在臨床應(yīng)用時(shí)，藥材中的化學(xué)成分可被臨床使用時(shí)的使用量?；凇爸兴幊煞峙R床利用量”的中藥材藥用質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)，符合中醫(yī)藥臨床應(yīng)用特點(diǎn)，是體現(xiàn)中藥特色的中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)方法。本文對(duì)5個(gè)產(chǎn)地的黃柏采用小檗堿臨床利用量的方法進(jìn)行品質(zhì)考察，對(duì)其有效成分在臨床上的應(yīng)用具有重要參考價(jià)值，也為其他藥材的品質(zhì)評(píng)價(jià)提供了一種新思路。

1 儀器與試劑

iChrom P5100型高效液相色譜儀（大連依利特分析儀器有限公司），BS-6KH型電子天平（上海友聲衡器有限公司），F(xiàn)A2004型電子分析天平（上海良平儀器儀表有限公司生產(chǎn)）。黃柏藥材購(gòu)自各地大型藥材市場(chǎng)及藥房,共6個(gè)樣品，經(jīng)成都大學(xué)鑒定四川、貴州、天津、陜西、湖北、新疆產(chǎn)地購(gòu)買的實(shí)驗(yàn)藥材為黃柏干燥樹(shù)皮（詳情見(jiàn)表5）；其中四川黃柏（批號(hào)20150523）購(gòu)自成都市荷花池中藥材市場(chǎng)，用于工藝條件研究。小檗堿對(duì)照品（批號(hào)150623-160724），由中國(guó)食品藥品檢定研究所提供。乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

長(zhǎng)期以來(lái)，人們習(xí)用水作為溶媒煎煮黃柏藥材，供患者服用，因此結(jié)合臨床實(shí)際應(yīng)用，本實(shí)驗(yàn)用水作為提取溶媒，不超過(guò)3次提取次數(shù)和1.5h提取時(shí)間對(duì)黃柏藥材的臨床利用量進(jìn)行考察。

2.1 黃柏小檗堿含量測(cè)定

2.1.1 色譜條件

色譜柱GS-120-5-C18-AP（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相乙腈-0.1%磷酸（ν∶ν，50∶50）（100 mL加0.1g十二烷基磺酸鈉），檢測(cè)波長(zhǎng)265nm，柱溫室溫，流量1mL/min。

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取小檗堿適量，用2.1.1的流動(dòng)相稀釋成質(zhì)量濃度為0.0743mg/mL的溶液，其 HPLC圖譜如圖1（a）所示。

圖1 黃柏小檗堿的HPLC圖譜

2.1.3 供試品溶液的制備

供試品溶液1 精密稱定過(guò)三號(hào)篩的粉末約0.1 g，置于100 mL容量品中，加流動(dòng)相80 mL超聲處理，40min冷卻，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得。

供試品溶液2 精密稱定供試品溶液1制備粉碎時(shí)未過(guò)三號(hào)篩的部分藥材約0.1g，置于100mL容量品中，加流動(dòng)相80mL超聲處理，40min冷卻，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

供試品溶液3 精密量取2.2.2、2.2.3、2.3.2項(xiàng)下的提取2mL至50mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，再按2.1.1的色譜條件測(cè)定，其 HPLC圖譜如圖1（b）所示。

2.1.4 精密度試驗(yàn)

精密吸取鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液10 μL，按照2.1.1的色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定其峰面積，計(jì)算RSD為1.04%，表明儀器精密度良好。

2.1.5 加樣回收率試驗(yàn)

精密吸取已知含量的黃柏提取液1mL于50mL量瓶中，精密加入對(duì)照品溶液3mL（1.01mg/mL），按2.1.3中供試品溶液2的方法制成供試品溶液，平行6份，按2.1.1的色譜條件分別測(cè)定鹽酸小檗堿峰面積，結(jié)果平均回收率為98.96%，RSD為1.55%，表明本方法回收率良好。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 鹽酸小檗堿回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)選提取工藝

2.2.1 因素及水平的選擇

以水為提取溶媒[5-6]，選取溶媒用量、提取次數(shù)、提取時(shí)間為考察因素，以提取液中小檗堿的量為考察指標(biāo)[7-8]，采用L9（34）正交表安排實(shí)驗(yàn)。其因素水平表如表2所示。

表2 黃柏小檗堿臨床提取工藝正交試驗(yàn)因素水平

2.2.2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

分別取9組四川黃柏藥材（每組80g）按照正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，測(cè)量提取液的體積，根據(jù)2.1.1和2.1.3的步驟進(jìn)行含量測(cè)定，以小檗堿含量為指標(biāo)進(jìn)行分析[9-10]。結(jié)果如表3所示，方差分析如表4所示。

表3 黃柏小檗堿提取工藝正交試驗(yàn)

表4 方差分析表

由表3可得，水的用量、提取次數(shù)以及提取時(shí)間3個(gè)因素對(duì)小檗堿的提取影響程度不同，R值大小依次為RC>RB>RA，提取時(shí)間對(duì)于含量的影響最大。表4可得，水的用量（A）對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有顯著性影響，提取次數(shù)（B）和提取時(shí)間（C）對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有極顯著性影響，根據(jù)此分析結(jié)果，選擇最佳提取工藝為A3B3C3，即用10倍藥材量的水提取3次，每次1.5h。

2.2.3 提取工藝驗(yàn)證

取3組黃柏藥材，1、2組80g，第3組160g，1、2組分別加入800 mL水，第3組加入1 600 mL水，每組提取3次，每次1.5h。測(cè)定提取液的體積，計(jì)算小檗堿的量，結(jié)果如表5所示。

表5 黃柏小檗堿提取工藝驗(yàn)證

結(jié)果表明，3組驗(yàn)證試驗(yàn)小檗堿的量分別為6.388 9，6.560 7，13.590 1 g，表明所選擇的提取工藝穩(wěn)定、可行。

2.3 不同產(chǎn)地黃柏小檗堿真實(shí)含量以及臨床利用量測(cè)定

2.3.1 不同產(chǎn)地黃柏小檗堿真實(shí)含量測(cè)定

按2.1.3供試品溶液制備方法和2.1.1的色譜條件分別測(cè)定5批不同產(chǎn)地黃柏，其通過(guò)三號(hào)藥典篩的粉末與未通過(guò)的部分藥材的小檗堿含量，然后計(jì)算出黃柏整體藥材小檗堿含量，即為藥材真實(shí)含量。結(jié)果如表7所示。

表6 黃柏樣品來(lái)源表

表7 不同產(chǎn)地黃柏小檗堿的真實(shí)含量測(cè)定結(jié)果1）

2.3.2 不同產(chǎn)地黃柏小檗堿臨床利用量測(cè)定

分別取每批不同產(chǎn)地的黃柏藥材2組，每組100 g，分別加入1 000 mL水，每組提取3次，每次1.5h。測(cè)定提取液的體積，計(jì)算小檗堿的臨床利用量，結(jié)果如表8所示。

表8 不同產(chǎn)地黃柏小檗堿臨床利用量測(cè)定結(jié)果1）

2.3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

從表7中可以得知，貴州與陜西的黃柏小檗堿的真實(shí)含量最高，分別為15.7%、16.4%；湖北與新疆的相差不大，分別為3.42%、5.07%；天津的最低，其小檗堿真實(shí)含量為1.56%。藥材的真實(shí)含量低于過(guò)三號(hào)藥典篩的粉末的含量。

從表8中可以得知，不同產(chǎn)地黃柏小檗堿的臨床利用量各不相同，臨床利用量最高的是貴州，為11.10 g/100 g；其次是陜西的黃柏臨床利用量，為7.30 g/100 g；天津、湖北、新疆的臨床利用量相差不大，分別為1.30，1.35，1.40g/100g。

2.3.4 結(jié) 論

由表7可知，5個(gè)產(chǎn)地黃柏的真實(shí)含量比藥典中的方法低，將會(huì)對(duì)提取轉(zhuǎn)移率的計(jì)算產(chǎn)生一定的影響，故在計(jì)算提取轉(zhuǎn)移率時(shí)，采用真實(shí)含量計(jì)算較好。由表8可知，陜西的黃柏含量最高，但提取轉(zhuǎn)移率較低，而天津的黃柏含量最低，轉(zhuǎn)移率卻較高，表明藥材含量的高低與提取轉(zhuǎn)移率并非成正比關(guān)系，因此，在“真實(shí)含量”以及提取轉(zhuǎn)移率基礎(chǔ)上提出的“中藥成分臨床利用量”評(píng)價(jià)中藥品質(zhì)的方法具有一定意義。中藥成分臨床利用量[11-12]不僅可以反映藥材真實(shí)含量和轉(zhuǎn)移率的高低，同時(shí)對(duì)該成分在臨床上實(shí)際被利用的情況具有重要參考價(jià)值，為中藥材的品質(zhì)評(píng)價(jià)提供了一種新思路。

3 結(jié)束語(yǔ)

本文采用小檗堿臨床利用量對(duì)黃柏藥材進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，測(cè)定貴州、陜西、湖北、天津、新疆等地小檗堿的真實(shí)含量和臨床利用量，建立了中藥有效成分與臨床實(shí)際利用的關(guān)系。在“真實(shí)含量”以及提取轉(zhuǎn)移率基礎(chǔ)上提出的“中藥成分臨床利用量”評(píng)價(jià)中藥品質(zhì)的方法就具有一定的優(yōu)勢(shì)?！爸兴幊煞峙R床利用量”是指藥材成分在臨床應(yīng)用時(shí)，藥材中的化學(xué)成分可被臨床使用時(shí)利用的量[4]。中藥成分臨床利用量不僅可以反映指標(biāo)成分或有效成分含量以及提取轉(zhuǎn)移率的高低，同時(shí)對(duì)其在臨床上實(shí)際被利用的情況具有重要參考價(jià)值，為中藥材的品質(zhì)評(píng)價(jià)提供了一種新的方法。

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（編輯：徐柳）

Study on quality evaluation for cortex phellodendri from different habitats based on the clinical dosage of chemical composition

XU Yuling，WU Nanxuan，LI Pengcheng，WU Ruisi，JIA Yujie，LIU Tao
（School of Pharmacy and Bioengineering，Chengdu University，Chengdu 610106，China）

Re-evaluation and restudy on the quality of cortex phellodendri were carried out based on the clinical dosage of berberine.Optimum clinical extraction process for berberinein cortex phellodendri was preferentially selected via orthogonal test，and HPLC method was adopted to measurethecontentof5 batchesofberberinein cortexphellodendrifrom differenthabitats according to optimum extraction process，so as to calculate its clinical dosage.Optimum clinical extraction process for berberinein cortex phellodendri:add water（10 times of medicinal materials）and extract for three times（1.5h/time）.Clinical dosage（g/100g）of berberine in Guizhou，Shaanxi，Hubei，Tianjin and Xinjiang is respectively 11.10 g，7.30 g，1.35 g，1.30 g and 1.40 g.The method in this paper is related to the effective components of medicinal materials and the clinical practice，which provides a new thought for quality evaluation and study of Chinese medicinal materials and cortex phellodendri.

cortex phellodendri；berberine；clinical dosage；quality evaluation

A

：1674-5124（2016）12-0045-04

10.11857/j.issn.1674-5124.2016.12.010

2016-04-12；

：2016-06-09

四川省千人計(jì)劃項(xiàng)目（2013332）

徐玉玲（1975-），女，云南曲靖市人，高級(jí)工程師，碩士，主要從事中成藥開(kāi)發(fā)及再評(píng)價(jià)研究。

劉 濤（1976-），男，四川南充市人，研究員級(jí)高級(jí)工程師，博士，主要從事中成藥新藥開(kāi)發(fā)及再評(píng)價(jià)工作。